Geri Dön

Expression analysis and behavioral assays in Drosophila CMT models

Drosophila CMT modellerinde anlatım analizi ve davranışsal çalışmalar

PDF İndir

  1. Tez No: 409269
  2. Yazar: CANSU KÜEY
  3. Danışmanlar: PROF. ESRA BATTALOĞLU, DOÇ. ARZU ÇELİK FUSS
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Genetik, Genetics
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2015
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 123

Özet

Charcot–Marie–Tooth (CMT) hastalığı periferik sinir sisteminin en sık görülen kalıtsal hastalığıdır. Progresif distal duysal kayıp ve zaaf, el ve alt bacakta atrofi ve iskelet bozukluklarıyla seyretmektedir. Bugüne dek yaklaşık 40 gen CMT ile ilişkilendirilmiştir. GDAP1, hastalığın demiyelizan, aksonal ve ara formlarına yol açan, baskın veya çekinik seyredebilen mutasyonları olan az sayıdaki genden biridir. MTMR2mutasyonları ise hastalığın şiddetli ve erken başlangıçlı bir tipi olan otozomal çekinik demiyelizan CMT alt tipine (CMT4B) neden olmaktadır. MTMR2 proteininin nöronlar için hayati öneme sahip olan endositoz ve membran trafiğinde rol oynadığı bilinmektedir. Bu sebeple, GDAP1 ve MTMR2 genleri hastalığın davranışsal ve işlevsel çalışmaları için uygun adaylardır. Bu çalışmada bu genlerin sinek homologları olan CG4623 ve mtm genlerine odaklanarak CMT için Drosophila modelleri geliştirmeyi amaçladık. İlk bölümde, hastalığı genlerin anlatım düzeylerindeki değişimlerle modellemeyi amaçladığımız için, CG4623'ün yüksek ve düşük anlatımını ve mtm geninin yüksek anlatımını mRNA düzeyinde doğruladık. Negatif jeotaksis yöntemi ile de, progresif motor performans azalması görülen CMT fenotipinde olduğu gibi, değişen CG4623 anlatım seviyelerinin sineklerin tırmanma davranışını yaşa bağlı olarak etkilediği gösterildi. Ayrıca, CG4623'ün anlatım seviyesindeki değişikliklerin sağkalımda küçük fakat istatistiksel olarak anlamlı bir azalmaya yol açtığı belirlenmiştir. Bununla birlikte mtm'nin anlatım seviyesinin düşürülmesi pupada ölüme neden olmuştur. Bu çalışmada, protein düzeyinde anlatım seviyesini saptama olanağı sağlayan ve ileride işlevsel çalışmalarda kullanılabilecek olan poliklonal mtm antikoru da geliştirildi. Çalışmanın son bölümünde, CG4623 ve mtm genlerinin IMAGO yöntemi ile genomdan silinmesi için üretilmiş olan sineklerin doğrulanması amaçlandı. Çalışmalar hedef vektörün genoma yanlış entegrasyonu nedeniyle IMAGO sineklerinin ileri aşamalarda kullanılamayacağını göstermiştir. Bu çalışma ile, geliştirilen CMT modellerinin hastalık patogenezi ve bu genlerin hastalıktaki rollerinin aydınlatılması için gelecekte kullanılabileceği gösterilmiştir.

Özet (Çeviri)

Charcot–Marie–Tooth (CMT) disease is the most common inherited disorder of the peripheral nervous system. It is characterized by progressive distal sensory loss and weakness, muscle atrophy in hands and lower legs, and skeletal deformities. Up to date, approximately 40 genes have been associated with CMT. GDAP1 is one of the few CMT- causative genes in which recessive or dominant mutations lead to demyelinating, axonal or intermediate forms of the disease with ranging onset and/or severity. MTMR2 mutations cause autosomal recessively inherited CMT subtype, CMT4B1 that is a demyelinating form with high severity and early-onset. MTMR2 is known to have a role in endocytosis and membrane trafficking, which are crucial mechanisms for neurons. Therefore, both GDAP1 and MTMR2 are good candidates to study CMT from behavioral and functional aspects. In this study, we aimed to develop Drosophila models for CMT focusing on the fly homologues of these genes, CG4623 and mtm, respectively. In the first part, we verified up- and down-regulation of CG4623 and overexpression of mtm at the mRNA level as we aimed to model the disease by altering the expression levels of these genes. Negative geotaxis assay revealed that altering CG4623 expression levels affected the climbing behavior of the flies in an age-dependent manner recapitulating the CMT phenotype of progressive motor performance decline. In addition, expression level alterations of CG4623 yielded slightly lowered survival with statistical significance. However, RNAi knockdown of mtm resulted in pupal lethality. We have also generated a polyclonal antibody against mtm that allowed us to quantify expression at the protein level and could be further used in functional studies. Lastly, we aimed to verify the fly lines that were generated to knock-out CG4623 and mtm by IMAGO approach. However, our studies showed that IMAGO flies cannot be used in further studies as the targeting vector was integrated incorrectly to their genome. In the scope of this study, we showed that the CMT models that have been developed can be used in further studies to elucidate the CMT pathogenesis and understand the roles of these genes in disease.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    496432

    Molecular and physiological investigation of longevity in yeast

    Maya hücrelerinde uzun yaşamın moleküler ve fizyolojik yönden incelenmesi

    MEVLÜT ARSLAN

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2017

    Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ZEYNEP PETEK ÇAKAR

  2. Tez No

    472919

    Endoplazmik retikulum stres modeli oluşturulan insan meme kanseri (MCF-7) hücrelerinde linearolün endoplazmik retikulum stres markerleri üzerine etkilerinin araştırılması

    IInvestigate the effects of linearol on the endoplasmic reticulum markers by using the endoplasmic reticulum stress generated model of human breast cancer cells (MCF-7).

    HALİL TURHAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    BiyolojiAfyon Kocatepe Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. İBRAHİM HAKKI CİĞERCİ

  3. Tez No

    429127

    Sıçanlarda deneysel olarak oluşturulan alzheimer patogenezi üzerine fez1 gen ifadesi ve pinealektominin rolünün araştırılması

    Investi̇gati̇on of the fez1 gene expressi̇on and the role of pi̇nealectomy on the pathogenesi̇s of alzhei̇mer produced experi̇mentally i̇n rats

    MEHMET DEMİR

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    Fizyolojiİnönü Üniversitesi

    Fizyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SÜLEYMAN SANDAL

  4. Tez No

    548977

    Tiyazol sübstitüe ftalosiyaninlerin sentezi ve biyosensör özelliklerinin incelenmesi

    Synthesis of thiazole substituted phthalocyanines and investigation of their biosensor properties

    FARUK DEMİR

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    Kimyaİstanbul Teknik Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ZEHRA BAYIR

  5. Tez No

    414068

    Molecular analyses of the effects of clock gene SNPs on the biological clock

    Biyolojik saat genlerinde bulunan SNPlerin biyolojik saat üzerine etkilerinin moleküler düzeyde incelenmesi

    BERKE GÜRKAN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2015

    GenetikKoç Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. İBRAHİM HALİL KAVAKLI

    YRD. DOÇ. FUNDA ŞAR

    DOÇ. NURİ ÖZTÜRK

Geri Dön