In Vitro evaluation of poly(2-((2-aminoethyl)amino)ethyl methacrylate) as a potential siRNA delivery agent
Potansiyel bir siRNA taşıyıcı ajan olarak poli(2-((2-aminoetil)amino)etil metakrilat)'ın in vitro değerlendirilmesi
- Tez No: 418398
- Danışmanlar: PROF. DR. ESMA VOLGA BULMUŞ ZAREIE, PROF. DR. VOLKAN SEYRANTEPE
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Polimer Bilim ve Teknolojisi, Biotechnology, Polymer Science and Technology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2015
- Dil: İngilizce
- Üniversite: İzmir Yüksek Teknoloji Enstitüsü
- Enstitü: Mühendislik ve Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Bu tezin amacı poli(2-((2-aminoethil)amino)ethil metakrilat) (P(AEAEMA)) 'ın siRNA taşıma potansiyelinin belirlenmesidir. Bu amaçla, amin içeren monomer 2-((tert-butoksikarbonil) (2-((tert-butoksikarbonil) amino) etil) amino) etil metakrilat (BocAEAEMA) sentezlendi. Daha sonra tersinir katılma ayrışma zincir transfer (RAFT) polimerizasyonu ile BocAEAEMA'nın homo ve blok kopolimer yapıları hazırlandı. Elde edilen polimerler P(AEAEMA)19, P(AEAEMA)41 ve P(PEGMA)12-b-P(AEAEMA)32- GPC ve NMR ile karakterize edildi. Polimerlerin sitotoksik etkileri Skov-3-luc yumurtalık kanseri hücre hattı kullanılarak MTT deneyi ile araştırıldı. MTT sonuçları polimerlerin 24 saat boyunca hücrelere toksik etkisinin olmadığını gösterdi. Polimerlerin siRNA ile kompleks oluşturabilme yetenekleri jel elektroforezi ile araştırıldı. P(AEAEMA)19, P(AEAEMA)41 ve P(PEGMA)12-b-P(AEAEMA)32'ın siRNA ile sırasıyla 5, 2 ve 2 N/P oranlarında etkin kompleksler oluşturabildiği anlaşıldı. Jel elektroforezi analizleri P(AEAEMA)41 ve P(PEGMA)12-b-P(AEAEMA)32'ın siRNA'yı en az 6 saate kadar serum bileşenlerinden koruyabildiğini gösterdi. Blok kopolimerin homopolimere kıyasla siRNA'yı daha uzun sürelerde (24 saat) koruyabildiği tespit edildi. Poliplekslerin boyutu ve yüzey yükleri DLS ile araştırıldı. Denenen bütün N/P oranlarında P(AEAEMA)41-siRNA komplekslerinin 110 nm den küçük olduğu belirlendi. Buna karşın P(PEGMA)12-b-P(AEAEMA)32-siRNA kompleksleri (N/P oranı 2 olan kompleks hariç) agregasyon eğilimi gösterdi. Bütün poliplekslerin pozitif zeta potansiyele sahip olduğu tespit edildi. Son olarak, polimerlerin siRNA'yı transfekte etme yeteneklerini belirleyebilmek için Lusiferaz Deneyi ticari bir transfeksiyon ajanı -lipofectamine RNAimax- kullanılarak optimize edildi. Bu deneylerden elde edilen bulgular, gelecek çalışmalarda polimerlerin transfeksiyon yeteneklerini belirlemek için kullanılmak üzere kaydedildi.
Özet (Çeviri)
The aim of this thesis is to investigate poly(2-((2-aminoethyl)amino)ethyl methacrylate) (P(AEAEMA)) as a potential siRNA carrier. For this purpose, an amine containing monomer 2-((tert-butoxycarbonyl) (2-((tert-butoxy carbonyl) amino) ethyl) amino) ethyl methacrylate (BocAEAEMA) was synthesized. Reversible addition-fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization was performed to prepare homo- and block co-polymers of BocAEAEMA. The synthesized polymers -P(AEAEMA)19, P(AEAEMA)41 and P(PEGMA)12-b-P(AEAEMA)32- were characterized via NMR and GPC. The cytotoxicity of the polymers was investigated in vitro using ovarian cancer cell line (Skov-3-luc) via MTT assay. The polymers did not show any toxic effect on cells in 24 h. The ability of the BocAEAEMA polymers to form polyplexes with siRNA was investigated via gel electrophoresis. P(AEAEMA)19, P(AEAEMA)41 and P(PEGMA)12-b-P(AEAEMA)32 could efficiently form complexes with siRNA at an N/P ratio of 5, 2, and 2 respectively. Gel electrophoresis analysis revealed that P(AEAEMA)41 and P(PEGMA)12-b-P(AEAEMA)32 could protect siRNA against serum components at least for 6 h. Block copolymer, when complexed with siRNA at an N/P ratio of 10, could protect siRNA longer (24 h) when compared with the homopolymer. The size and surface charge of the polyplexes were investigated by DLS. The diameter of the P(AEAEMA)41-siRNA complexes was found to be lower than 110 nm at all N/P ratios tested. In contrast, P(PEGMA)12-b-P(AEAEMA)32-siRNA complexes (except the complex prepared at the N/P ratio of 2), displayed aggregation tendency. All polyplexes displayed positive zeta potential. The zeta potential of the homopolymer was found to be higher than the copolymer at the N/P ratio of 2. Finally, in order to determine siRNA transfection ability of the polymers, luciferase assay was optimized using a commercial transfection reagent lipofectamine RNAimax. The optimized assay conditions will be used in future studies to determine the transfection efficiency of the polymers.
Benzer Tezler
- Hedeflendirilmiş ve antibakteriyel nanosistemlerin üretimi ve biyolojik aktivitesinin değerlendirilmesi
Production of targeted and antibacterial nanosystems and evaluation of their biological activity
İREM ÇOKSU
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
BiyomühendislikYıldız Teknik ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SERAP DERMAN
- In vitro evaluation of comb-type poly(Ethylene Glycol)-cell interactions and comparison with linear poly(Ethylene Glycol)
Tarak tipi poli(Etilen Glikol)-hücre etkileşimlerinin in vitro değerlendirilmesi ve lineer poli(Etilen Glikol) ile karşılaştırılması
TUĞBA TOKER
Yüksek Lisans
İngilizce
2012
Biyoteknolojiİzmir Yüksek Teknoloji EnstitüsüBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. VOLGA BULMUŞ
DOÇ. DR. YUSUF BARAN
- N-(4-asetilfenil)-2-(ariltiyo)asetamit ve N'-(3-hidroksi-4-metoksibenziliden)-2-(4-tosilpiperazin-1-il)asetohidrazit türevlerinin pankreas kanserinde antikanser etkilerinin parp inhibitörleri ile karşılaştırılması
A comparison of anticancer effects n-(4-acetylphenyl)-2-(arylthio)acetamide and n'-(3-hydroxy-4-metoxybenzilidene)-2-(4-tosylpiperazine-1-YL)acetohydrazide derivatives in pancreatic cancer with PaRP inhibitors
ŞENNUR GÖRGÜLÜ
Doktora
Türkçe
2019
Eczacılık ve FarmakolojiAnadolu ÜniversitesiFarmakoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MİRİŞ DİKMEN
- Kolorektal kanserlerin lokal tedavisinde oral uygulanabilen nanopartiküler ilaç taşıyıcı sistem geliştirilmesi ve in vitro/in vivo değerlendirilmesi
Formulation of orally administered nanoparticulate drug delivery system in the local treatment of colorectal cancer and in vitro/in vivo evaluation
SEDAT ÜNAL
Doktora
Türkçe
2020
Eczacılık ve FarmakolojiHacettepe ÜniversitesiFarmasötik Teknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. EREM BİLENSOY
- Sefotetan içeren radyoişaretli biyouyumlu polimerik nanopartikül sentezi ve In Vitro değerlendirilmesi
Synthesis of cefotetan loaded radiolabeled biocompatible polymeric nanoparticle and In Vitro evaluation
SAİM EMRE AKBULUT