Geri Dön

In Vitro evaluation of poly(2-((2-aminoethyl)amino)ethyl methacrylate) as a potential siRNA delivery agent

Potansiyel bir siRNA taşıyıcı ajan olarak poli(2-((2-aminoetil)amino)etil metakrilat)'ın in vitro değerlendirilmesi

PDF İndir

  1. Tez No: 418398
  2. Yazar: AYKUT ZELÇAK
  3. Danışmanlar: PROF. DR. ESMA VOLGA BULMUŞ ZAREIE, PROF. DR. VOLKAN SEYRANTEPE
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoteknoloji, Polimer Bilim ve Teknolojisi, Biotechnology, Polymer Science and Technology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2015
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: İzmir Yüksek Teknoloji Enstitüsü
  10. Enstitü: Mühendislik ve Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 78

Özet

Bu tezin amacı poli(2-((2-aminoethil)amino)ethil metakrilat) (P(AEAEMA)) 'ın siRNA taşıma potansiyelinin belirlenmesidir. Bu amaçla, amin içeren monomer 2-((tert-butoksikarbonil) (2-((tert-butoksikarbonil) amino) etil) amino) etil metakrilat (BocAEAEMA) sentezlendi. Daha sonra tersinir katılma ayrışma zincir transfer (RAFT) polimerizasyonu ile BocAEAEMA'nın homo ve blok kopolimer yapıları hazırlandı. Elde edilen polimerler P(AEAEMA)19, P(AEAEMA)41 ve P(PEGMA)12-b-P(AEAEMA)32- GPC ve NMR ile karakterize edildi. Polimerlerin sitotoksik etkileri Skov-3-luc yumurtalık kanseri hücre hattı kullanılarak MTT deneyi ile araştırıldı. MTT sonuçları polimerlerin 24 saat boyunca hücrelere toksik etkisinin olmadığını gösterdi. Polimerlerin siRNA ile kompleks oluşturabilme yetenekleri jel elektroforezi ile araştırıldı. P(AEAEMA)19, P(AEAEMA)41 ve P(PEGMA)12-b-P(AEAEMA)32'ın siRNA ile sırasıyla 5, 2 ve 2 N/P oranlarında etkin kompleksler oluşturabildiği anlaşıldı. Jel elektroforezi analizleri P(AEAEMA)41 ve P(PEGMA)12-b-P(AEAEMA)32'ın siRNA'yı en az 6 saate kadar serum bileşenlerinden koruyabildiğini gösterdi. Blok kopolimerin homopolimere kıyasla siRNA'yı daha uzun sürelerde (24 saat) koruyabildiği tespit edildi. Poliplekslerin boyutu ve yüzey yükleri DLS ile araştırıldı. Denenen bütün N/P oranlarında P(AEAEMA)41-siRNA komplekslerinin 110 nm den küçük olduğu belirlendi. Buna karşın P(PEGMA)12-b-P(AEAEMA)32-siRNA kompleksleri (N/P oranı 2 olan kompleks hariç) agregasyon eğilimi gösterdi. Bütün poliplekslerin pozitif zeta potansiyele sahip olduğu tespit edildi. Son olarak, polimerlerin siRNA'yı transfekte etme yeteneklerini belirleyebilmek için Lusiferaz Deneyi ticari bir transfeksiyon ajanı -lipofectamine RNAimax- kullanılarak optimize edildi. Bu deneylerden elde edilen bulgular, gelecek çalışmalarda polimerlerin transfeksiyon yeteneklerini belirlemek için kullanılmak üzere kaydedildi.

Özet (Çeviri)

The aim of this thesis is to investigate poly(2-((2-aminoethyl)amino)ethyl methacrylate) (P(AEAEMA)) as a potential siRNA carrier. For this purpose, an amine containing monomer 2-((tert-butoxycarbonyl) (2-((tert-butoxy carbonyl) amino) ethyl) amino) ethyl methacrylate (BocAEAEMA) was synthesized. Reversible addition-fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization was performed to prepare homo- and block co-polymers of BocAEAEMA. The synthesized polymers -P(AEAEMA)19, P(AEAEMA)41 and P(PEGMA)12-b-P(AEAEMA)32- were characterized via NMR and GPC. The cytotoxicity of the polymers was investigated in vitro using ovarian cancer cell line (Skov-3-luc) via MTT assay. The polymers did not show any toxic effect on cells in 24 h. The ability of the BocAEAEMA polymers to form polyplexes with siRNA was investigated via gel electrophoresis. P(AEAEMA)19, P(AEAEMA)41 and P(PEGMA)12-b-P(AEAEMA)32 could efficiently form complexes with siRNA at an N/P ratio of 5, 2, and 2 respectively. Gel electrophoresis analysis revealed that P(AEAEMA)41 and P(PEGMA)12-b-P(AEAEMA)32 could protect siRNA against serum components at least for 6 h. Block copolymer, when complexed with siRNA at an N/P ratio of 10, could protect siRNA longer (24 h) when compared with the homopolymer. The size and surface charge of the polyplexes were investigated by DLS. The diameter of the P(AEAEMA)41-siRNA complexes was found to be lower than 110 nm at all N/P ratios tested. In contrast, P(PEGMA)12-b-P(AEAEMA)32-siRNA complexes (except the complex prepared at the N/P ratio of 2), displayed aggregation tendency. All polyplexes displayed positive zeta potential. The zeta potential of the homopolymer was found to be higher than the copolymer at the N/P ratio of 2. Finally, in order to determine siRNA transfection ability of the polymers, luciferase assay was optimized using a commercial transfection reagent lipofectamine RNAimax. The optimized assay conditions will be used in future studies to determine the transfection efficiency of the polymers.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    537558

    Evaluation of poly (2-ethyl-2-oxazoline) (petox)-based multifunctional carrier systems for breast cancer targeted therapy

    Meme kanseri hedefleme tedavisinde kullanılacak poli(2-etil-2-oksazolin) (petox) esaslı çok işlevsel taşıyıcı sistemlerin değerlendirilmesi

    ZEYNEP BÜŞRA BOLAT

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2019

    BiyomühendislikYeditepe Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. FİKRETTİN ŞAHİN

    PROF. DR. DİLEK TELCİ

  2. Tez No

    830375

    Farklı bitki ekstraktları yüklenmiş polimerik yara örtü malzemesi tasarımı ve üretimi

    Design and production of polymeric wound dressing loaded with different plant extracts

    CEM REŞAT ÜSTÜNDAĞ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    BiyomühendislikYıldız Teknik Üniversitesi

    Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MEHMET BURÇİN PİŞKİN

  3. Tez No

    323748

    Evaluation of cationic polymer vectors for non-viral gene delivery

    Katyonik polimerlerin gen taşıyıcı sistemler olarak değerlendirilmesi

    HATİCE İMRAN GÜNGÖRDÜ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2012

    Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GÜLAÇTI TOPÇU

  4. Tez No

    325704

    In vitro evaluation of comb-type poly(Ethylene Glycol)-cell interactions and comparison with linear poly(Ethylene Glycol)

    Tarak tipi poli(Etilen Glikol)-hücre etkileşimlerinin in vitro değerlendirilmesi ve lineer poli(Etilen Glikol) ile karşılaştırılması

    TUĞBA TOKER

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2012

    Biyoteknolojiİzmir Yüksek Teknoloji Enstitüsü

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. VOLGA BULMUŞ

    DOÇ. DR. YUSUF BARAN

  5. Tez No

    536730

    N-(4-asetilfenil)-2-(ariltiyo)asetamit ve N'-(3-hidroksi-4-metoksibenziliden)-2-(4-tosilpiperazin-1-il)asetohidrazit türevlerinin pankreas kanserinde antikanser etkilerinin parp inhibitörleri ile karşılaştırılması

    A comparison of anticancer effects n-(4-acetylphenyl)-2-(arylthio)acetamide and n'-(3-hydroxy-4-metoxybenzilidene)-2-(4-tosylpiperazine-1-YL)acetohydrazide derivatives in pancreatic cancer with PaRP inhibitors

    ŞENNUR GÖRGÜLÜ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    Eczacılık ve FarmakolojiAnadolu Üniversitesi

    Farmakoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MİRİŞ DİKMEN

Geri Dön