Geri Dön

İnsan embriyonik böbrek hücrelerinde RIC-8b proteininin golgi organeli fonksiyonları üzerine etkisi

The effect of RİC-8B protein on golgi organelle functions in human embryonic kidney cells

  1. Tez No: 440456
  2. Yazar: MUSTAFA BARAN
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. RAMAZAN KOZAN, YRD. DOÇ. DR. ÜMİT ŞENER
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Fizyoloji, Physiology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2016
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: İstanbul Medeniyet Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Fizyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 76

Özet

GİRİŞ: Heterotrimerik G-protein ile kenetli reseptörler (GPKR), G-proteinleri ile etkileşerek hücre dışı sinyalleri hücre içine iletirler. Bu sayede hücresel sinyalin spesifikliği ve etkinliğinde düzenleyici rol oynarlar. Stoplazmadaki guanin nükleotidi değişim faktör (GEF) proteinleri olarak bilinen yardımcı proteinler Gα alt biriminde nükleotit değişimine sebep olurlar. Bu etki G-protein aktivasyonunu arttırır. Reseptörden bağımsız GEF proteini olan Ric-8B (Kolinesteraz inhibitörüne dirençli), GDP-bağlı Gα alt birimiyle etkileşerek nükleotit aktivitesini uyarır. Bu projede, G-proteinlerinin Golgi organelinin fonksiyonları üzerine olan etkisinde Ric-8B'nin rolünüN açıklanması amaçlandı. MATERYAL-METOD: Ric-8B'nin etkilerini gözlemlemek için insan embriyonik böbrek kültür hücreleri (HEK-293) kullanıldı. Ayrıca, Golgi'yi parçalayarak protein salgılanmasını büyük oranda bozan ve fungal bir metabolit olan Brefeldin A (BFA)'nın optimizasyonu yapıldı (5 µg/mL 15 dk). Golgi'nin yapısal fonksiyonlarını değerlendirmek için ST-GFP deney sisteminde; kontrol, ST-GFP+BFA, ST-GFP+Ric-8B ve ST-GFP+BFA+Ric-8B grubu olmak üzere dört grup oluşturuldu. Golgi'nin fonksiyonel etkilerini değerlendirmek için VSV-G-GFP deneylerinde; kontrol ve VSV-G-GFP+Ric-8B grubu olmak üzere iki grup oluşturuldu. Böylece, Ric-8B varlığında floresan protein ekleri ile işaretlenmiş ve Golgi kompartımanına özgü bir marker proteini olan ST-GFP'nin hücre içi lokasyonunun nasıl değiştiği takip edildi. İmmünohistokimyasal görüntüleme ile intakt ve dağılmış hücre sayım işlemleri yüksek çözünürlüklü floresan mikroskop yardımıyla yapıldı. BULGULAR: HEK-293 hücreleri BFA'ya maruz bırakıldığında (5 µg/mL, 15 dk.) Golgi'nin kompleks yapısı birbirinden ayrılarak kümelenmiş Golgi yığınları gözlendi. ST-GFP+BFA uygulanan grupta hücrelerin ancak %5'inde ST-GFP proteini perinükleer lokalizasyon gösterirken, ST-GFP+BFA+Ric-8B grubunda ise bu oran %43'e çıkmıştır (p

Özet (Çeviri)

AIM: Heterotrimeric G-protein coupled receptors (GPCR ) transmit extracellular signals to the cell by interacting with G-proteins. In this way they regulate specificity and efficiency of cellular signaling patways in cells. There are accessory proteins in sitoplasm called guanine nucleotide exchange factors (GEFs), that induce the nucleotide exchange at Gα subunits, thus promoting G-protein activation. Ric-8B (Resistance to Cholinesterase Inhibitor) is newly identified protein which interact with the GDP-bound form of Gα subunits and stimulate their nucleotide activity, acting as receptor-independent GEFs. In this project, we aimed to unclose G-proteins effect on Golgi organelle functions in the presence of Ric-8B. METHOD: HEK-293 cells were used to observe the effect of Ric-8B. Additionally, BFA, which is a fungal metabolite that seriously cripple protein secretion by disrupting the Golgi complex was optimized at 5 μg/mL 15 minutes. To assess the structural function of the Golgi, we created 4 groups for ST-GFP experiments: Control, ST-GFP+BFA, ST-GFP+Ric-8B , and ST-GFP+BFA+Ric-8B groups. To evaluate the functional effects of the Golgi we created control and VSV-G-GFP+Ric-8B groups for VSV-G-GFP experiments. In this way we followed the location of fluorescein tagged marker protein of Golgi complex (ST-GFP) in the presence of Ric-8B. Intact and dispersed Golgi structures in cells were performed with high-resolution fluorescence microscopy. RESULTS: Treatment of HEK-293 cells with BFA seriously disrupted the Golgi complex (at 5 µg/mL 15 min.) disassembled the complex including the collapse of the Golgi stacks. In ST-GFP+BFA group, only in 5% of cells ST-GFP protein showed perinuclear localization, while ST-GFP+BFA+Ric-8B group this rate increased to 43% (p

Benzer Tezler

  1. Elektromanyetik alan uygulamasının (Wİ-Fİ 2.4 GHZ) insan embriyonik böbrek hücrelerinde (HEK293) apoptoz ve oksidatif stres değerleri üzerine selenyum ve çinkonun etkisi

    Effects of selenium and zinc to the apoptosis and oxidative stress values on electromagnetic field application (Wİ Fİ 2.4 GHZ) in human embryonic kidney cells (HEK293)

    NURAL PASTACI ÖZSOBACI

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    Biyofizikİstanbul Üniversitesi

    Biyofizik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. DERVİŞ ÖZÇELİK

  2. Coiled coil domain containing protein 124'ün post-translasyonel modifikasyonlarının hücresel moleküler etkileşimler üzerine etkileri

    The effects of post-translational modifications of coiled coil domain containing protein 124 on cellular molecular interactions

    GAMZE ÇAKIRCA

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    BiyolojiGebze Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. UYGAR HALİS TAZEBAY

  3. COVİD-19'a karşı prefüzyon yapıda kararlı trimerik spike proteini kodlayan dna aşısının geliştirilmesi

    Development of the dna vaccine encoding a prefusion-stabilized trimeric spike protein against COVİD-19

    AYTÜL GÜL

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    BiyomühendislikEge Üniversitesi

    Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ELİF ESİN HAMEŞ

    PROF. DR. MERT DÖŞKAYA

  4. Toxoplasma gondii'nin her üç dönemine etkili DNA aşı stratejisinin geliştirilmesi

    Development of a DNA vaccine strategy effective against all three stages of Toxoplasma gondii

    CEREN GÜL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    BiyoteknolojiEge Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MERT DÖŞKAYA

    DOÇ. DR. AYSU DEĞİRMENCİ DÖŞKAYA

  5. Optimization of internal tagging of inhibitory G-proteins for investigating their interactions with dopamine receptor D2 via fret method

    İnhibitör G proteinlerinin dopamin reseptörü D2 ile etkileşiminin fret metoduyla incelenmesi için internal işaretlenmelerinin optimizasyonu

    GİZEM ÖZCAN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2016

    BiyokimyaOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ÇAĞDAŞ DEVRİM SON

    YRD. DOÇ. DR. SALİH ÖZÇUBUKÇU