İnsan embriyonik böbrek hücrelerinde RIC-8b proteininin golgi organeli fonksiyonları üzerine etkisi
The effect of RİC-8B protein on golgi organelle functions in human embryonic kidney cells
- Tez No: 440456
- Danışmanlar: DOÇ. DR. RAMAZAN KOZAN, YRD. DOÇ. DR. ÜMİT ŞENER
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Fizyoloji, Physiology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2016
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Medeniyet Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Fizyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 76
Özet
GİRİŞ: Heterotrimerik G-protein ile kenetli reseptörler (GPKR), G-proteinleri ile etkileşerek hücre dışı sinyalleri hücre içine iletirler. Bu sayede hücresel sinyalin spesifikliği ve etkinliğinde düzenleyici rol oynarlar. Stoplazmadaki guanin nükleotidi değişim faktör (GEF) proteinleri olarak bilinen yardımcı proteinler Gα alt biriminde nükleotit değişimine sebep olurlar. Bu etki G-protein aktivasyonunu arttırır. Reseptörden bağımsız GEF proteini olan Ric-8B (Kolinesteraz inhibitörüne dirençli), GDP-bağlı Gα alt birimiyle etkileşerek nükleotit aktivitesini uyarır. Bu projede, G-proteinlerinin Golgi organelinin fonksiyonları üzerine olan etkisinde Ric-8B'nin rolünüN açıklanması amaçlandı. MATERYAL-METOD: Ric-8B'nin etkilerini gözlemlemek için insan embriyonik böbrek kültür hücreleri (HEK-293) kullanıldı. Ayrıca, Golgi'yi parçalayarak protein salgılanmasını büyük oranda bozan ve fungal bir metabolit olan Brefeldin A (BFA)'nın optimizasyonu yapıldı (5 µg/mL 15 dk). Golgi'nin yapısal fonksiyonlarını değerlendirmek için ST-GFP deney sisteminde; kontrol, ST-GFP+BFA, ST-GFP+Ric-8B ve ST-GFP+BFA+Ric-8B grubu olmak üzere dört grup oluşturuldu. Golgi'nin fonksiyonel etkilerini değerlendirmek için VSV-G-GFP deneylerinde; kontrol ve VSV-G-GFP+Ric-8B grubu olmak üzere iki grup oluşturuldu. Böylece, Ric-8B varlığında floresan protein ekleri ile işaretlenmiş ve Golgi kompartımanına özgü bir marker proteini olan ST-GFP'nin hücre içi lokasyonunun nasıl değiştiği takip edildi. İmmünohistokimyasal görüntüleme ile intakt ve dağılmış hücre sayım işlemleri yüksek çözünürlüklü floresan mikroskop yardımıyla yapıldı. BULGULAR: HEK-293 hücreleri BFA'ya maruz bırakıldığında (5 µg/mL, 15 dk.) Golgi'nin kompleks yapısı birbirinden ayrılarak kümelenmiş Golgi yığınları gözlendi. ST-GFP+BFA uygulanan grupta hücrelerin ancak %5'inde ST-GFP proteini perinükleer lokalizasyon gösterirken, ST-GFP+BFA+Ric-8B grubunda ise bu oran %43'e çıkmıştır (p
Özet (Çeviri)
AIM: Heterotrimeric G-protein coupled receptors (GPCR ) transmit extracellular signals to the cell by interacting with G-proteins. In this way they regulate specificity and efficiency of cellular signaling patways in cells. There are accessory proteins in sitoplasm called guanine nucleotide exchange factors (GEFs), that induce the nucleotide exchange at Gα subunits, thus promoting G-protein activation. Ric-8B (Resistance to Cholinesterase Inhibitor) is newly identified protein which interact with the GDP-bound form of Gα subunits and stimulate their nucleotide activity, acting as receptor-independent GEFs. In this project, we aimed to unclose G-proteins effect on Golgi organelle functions in the presence of Ric-8B. METHOD: HEK-293 cells were used to observe the effect of Ric-8B. Additionally, BFA, which is a fungal metabolite that seriously cripple protein secretion by disrupting the Golgi complex was optimized at 5 μg/mL 15 minutes. To assess the structural function of the Golgi, we created 4 groups for ST-GFP experiments: Control, ST-GFP+BFA, ST-GFP+Ric-8B , and ST-GFP+BFA+Ric-8B groups. To evaluate the functional effects of the Golgi we created control and VSV-G-GFP+Ric-8B groups for VSV-G-GFP experiments. In this way we followed the location of fluorescein tagged marker protein of Golgi complex (ST-GFP) in the presence of Ric-8B. Intact and dispersed Golgi structures in cells were performed with high-resolution fluorescence microscopy. RESULTS: Treatment of HEK-293 cells with BFA seriously disrupted the Golgi complex (at 5 µg/mL 15 min.) disassembled the complex including the collapse of the Golgi stacks. In ST-GFP+BFA group, only in 5% of cells ST-GFP protein showed perinuclear localization, while ST-GFP+BFA+Ric-8B group this rate increased to 43% (p
Benzer Tezler
- Zearalenonun lipotoksisite üzerine etkilerinin insan böbrek hücrelerinde araştırılması
Investigation of the effects of zearalenone on lipotoxicity in human kidney cells
MÜBERRA ÖZCAN
Doktora
Türkçe
2025
Farmasötik Toksikolojiİstanbul ÜniversitesiFarmasötik Toksikoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SİBEL ÖZDEN
DOÇ. ECEM FATMA KARAMAN
- Elektromanyetik alan uygulamasının (Wİ-Fİ 2.4 GHZ) insan embriyonik böbrek hücrelerinde (HEK293) apoptoz ve oksidatif stres değerleri üzerine selenyum ve çinkonun etkisi
Effects of selenium and zinc to the apoptosis and oxidative stress values on electromagnetic field application (Wİ Fİ 2.4 GHZ) in human embryonic kidney cells (HEK293)
NURAL PASTACI ÖZSOBACI
- Amniyon sıvısı kaynaklı eksozomların serviks kanseri üzerine etkisinin araştırılması
Investigation of the effects of amniotic fluid-derived exosomes on cervical cancer
AYŞE KÜBRA TİRYAKİ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2025
Kadın Hastalıkları ve DoğumGaziantep ÜniversitesiKadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ÖZCAN BALAT
- Coiled coil domain containing protein 124'ün post-translasyonel modifikasyonlarının hücresel moleküler etkileşimler üzerine etkileri
The effects of post-translational modifications of coiled coil domain containing protein 124 on cellular molecular interactions
GAMZE ÇAKIRCA
Doktora
Türkçe
2024
BiyolojiGebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. UYGAR HALİS TAZEBAY
- COVİD-19'a karşı prefüzyon yapıda kararlı trimerik spike proteini kodlayan dna aşısının geliştirilmesi
Development of the dna vaccine encoding a prefusion-stabilized trimeric spike protein against COVİD-19
AYTÜL GÜL
Doktora
Türkçe
2023
BiyomühendislikEge ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ELİF ESİN HAMEŞ
PROF. DR. MERT DÖŞKAYA