Geri Dön

Farklı embriyo dondurma yöntemlerinin, embriyonik kök hücre belirteçlerinden NANOG, OCT4, SOX2 VE SSEA4 ekspresyonu üzerine etkileri

The effects of different cryopreservation techniques on the expression of Nanog, Oct4, Sox2 and SSEA-4

  1. Tez No: 445583
  2. Yazar: HATİCE İSAN
  3. Danışmanlar: PROF. DR. RANAN GÜLHAN AKTAŞ
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Histoloji ve Embriyoloji, Histology and Embryology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2016
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Maltepe Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Klinik Embriyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 81

Özet

Çalışmamızda; blastosist safhasındaki embriyoların klasik vitrifikasyon ve katı yüzey dondurma tekniği (SSV)yöntemleri ile dondurularak çözülmesinin ardından canlılık oranları ile embriyonik kök hücre belirteçlerinden Nanog, Oct4, Sox2 ve SSEA4 ekspresyonları açısından karşılaştırılmalı olarak değerlendirilmesi amaçlanmıştır. B6C3F1 (C57BL/6J X C3H/HeN) dişi farelerden elde edilen pronükleer safhada (PN) embriyolar blastosist safhasına kadar kültüre edilmiştir. Bu embriyolardan 3 deney grubu (kontrol- SSV-vitrifikasyon) oluşturulmuştur. Dondurup çözme işleminin ardından 3 deney grubundaki blastosistler; morfolojik özellikleri ve embriyonik kök hücre belirteçlerinden Nanog, Oct4, Sox2, SSEA-4 ekspresyonları açısından değerlendirilmiştir. Embriyoların morfolojileri; faz kontrast mikroskopta incelenmiştir. Embriyonik kök hücre belirteçlerinin lokalizasyonu konfokal mikroskoplar kullanılarak araştırılmıştır. Zenn görüntü analiz programı ile belirteçlerdeki değişim sayısal olarak analiz edilmiştir. Tüm sonuçların istatistiksel değerlendirilmesi SPSS 20.0 yazılımı kullanılarak gerçekleştirilmiştir. SSV dondurma yöntemi ile dondurulup çözündürülen 68 adet blastosistin 49 adedi (%72), klasik vitrifikasyon dondurma yöntemi kullanılarak dondurulup çözündürülen 71 adet blastosistten 48 adedi (%68) canlılığını sürdürmüştür. Blastosistlerin dondurulmasında uygulanan SSV yönteminin, klasik vitrifikasyon yöntemine göre, çözündürme sonrası canlılık açısından daha avantajlı bir yöntem olduğu gözlemlenmiştir. Embriyonik kök hücre belirteçlerinden olan; Nanog, Oct4, Sox2 ve SSEA4 ekspresyon düzeyleri kontrol grubuyla karşılaştırıldığında; SSV ve klasik vitrifikasyon gruplarında azalma olduğu görülmüştür. Ekspresyondaki azalma her dört kök hücre belirteci için ayrı ayrı incelendiğinde; klasik vitrifikasyon grubunda azalmanın daha belirgin olduğu dikkati çekmiştir. Nanog ve Sox2 ekspresyonu değerlendirildiğinde kontrol grubundan, klasik vitrifikasyon grubuna doğru ortalamalarda azalış gözlenmiştir;ancak kontrol ve SSV grupları arasında anlamlı bir fark bulunamamıştır. Tüm kök hücre belirteçleri içerisinde; dondurup çözme işleminin ardından her iki grupta da en fazla etkilenen belirtecin SSEA-4 olduğu görülmüştür. Tüm bu sonuçlar; SSV tekniğinin de klasik vitrifikasyon yöntemine alternatif bir metod olarak düşünülmesi gerektiğini göstermektedir. Bu yöntemin klinikte hastalarda kullanımının tartışılabilmesi için ileri çalışmalara ihtiyaç vardır.

Özet (Çeviri)

The current study aims comparative examination of the effects of classical vitrification and SSV techniques on the expression of main stem cell markers, Nanog, Oct4, Sox2 and SSEA4, on blastocysts. Embryos at pronuclear (PN) stage were extracted from female B6C3F1 (C57BL/6J X C3H/HeN) mice. Those embryos were cultured until blastocyst stage. Healthy blastocysts were divided into three experimental groups : Control, SSV and classical vitrification groups. After freeze and thaw process; all embryos were examined under phase contrast microscope. Then, they were labeled with the antibodies specific for Nanog, Oct4, Sox2 or SSEA-4. Zenn image analysis ssytem was used for examination of the results. Statistical analysis was done by using SPSS 20.0. 49 out of 68 embryos (%72) were survived in SSV groups after thawing; while 48 out of 71 embryos (%68) exsisted after classical vitrification. Survival of the embryos after SSV group was higher than the classical vitrifiaction group. Nanog, Oct4, Sox2 ve SSEA4 expression were lowered when compared with the control. Only change at Nanog and Sox2 levels were not statistical meaningful. The most change was seen in the embryos labeled with SSEA4. Those results show that SSV method should also be considered as an alternative technique to the classical vitrification method. Further studies are needed to analyse if this method can also be used in clinics for therapy.

Benzer Tezler

  1. In vıtro sığır blastosist üretimi üzerine tanımlanmış medyumların etkisi ve blastosistlerin farklı kriyoprezervasyon teknikleri ile dondurulması

    In vıtro sığır blastosist üretimi üzerine tanımlanmış medyumların etkisi ve blastosistlerin farklı kriyoprezervasyon teknikleri ile dondurulması

    TOLGA AKKOÇ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2012

    BiyoteknolojiNamık Kemal Üniversitesi

    Zootekni Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. M. İHSAN SOYSAL

    PROF. DR. HAYDAR BAĞIŞ

  2. Dondurulmuş embriyo transferi sonuçlarının farklı endikasyonlara göre değerlendirilmesi

    Evaluation of frozen embryo transfer results with regard to different indications

    BÜŞRA KAĞITLI

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    Histoloji ve EmbriyolojiBiruni Üniversitesi

    Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MERİÇ KARACAN

  3. İn vivo olarak elde edilen saanen keçisi embriyolarının farklı kriyoprotektanlar kullanılarak yavaş yöntemle dondurulması

    Freezing of in vivo derived saanen goat embryos with use of different cryoprotectants during slow freezing

    SAKİNE ÜLKÜM ÇİZMECİ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    Veteriner HekimliğiSelçuk Üniversitesi

    Doğum ve Reprodüksiyon Hastalıkları (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MEHMET GÜLER

  4. Dondurulmuş çözülmüş ve taze embriyo transferinin embriyo canlılığı ve gebelik sonuçlarına etkisi

    The effect of frozen and fresh embrio transfer on embryo vitality and pregnancy results

    SEVİL ÜNAL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    Histoloji ve EmbriyolojiBiruni Üniversitesi

    Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. TÜLAY İREZ

  5. Erkek infertilitesinde farklı antioksidan maddelerin sperm kriyoprezervasyon yöntemleri üzerine etkisi

    Effects of different antioxidants on sperm cryopreservation techniques

    ARIN KERPİÇCİ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    BiyolojiYeni Yüzyıl Üniversitesi

    Klinik Embriyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ÖZEN BANU ÖZDAŞ