Farklı Aspergillus türü funguslarda selüloz ve hemiselüloz parçalayıcı enzim aktivitelerinin incelenmesi
Screening of cellulose and hemicellulose enzyme activities in different A456160spergillus species
- Tez No: 456160
- Danışmanlar: PROF. DR. AYŞE DİLEK AZAZ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biyoloji, Mikrobiyoloji, Biochemistry, Biology, Microbiology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2016
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Balıkesir Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 128
Özet
Bu çalışmada, Katı Substrat Fermentasyon (KSF) yöntemiyle yetiştirilmiş, Aspergillus caelatus NRRL 26107 ve Aspergillus oryzae NRRL 5590' dan β-glukosidaz enzimi saflaştırılmış ve biyokimyasal karakterizasyonu yapılmıştır. Birçok biyoteknolojik uygulamalarda ticari öneme sahip, β-glukosidaz enzimi, öncelikli olarak buğday samanının KSF ortamında kullanılmasıyla yetiştirilen A.caelatus (KSF ortamının nemlendirme sıvısı pH 7,0 NaH2PO4, optimum sıcaklık 30oC ve inkübasyon süresi 7 gün) ve A.oryzae (KSF ortamının nemlendirme sıvısı pH 6,5 NaH2PO4 tamponu ile nemlendirilerek, optimum sıcaklık 25oC ve inkübasyon süresi 7 gün) suşlarından elde edilmiştir. β-glukosidaz enzimi, amonuyum sülfat çöktürmesi ve Sepharose-4B-L-Tyrosine-1-Napthylamine kullanılarak Hidrofobik Etkileşim Kromatografisi ile iki basamakta saflaştırılmıştır. Çalışmamızda, β-glukosidaz enzim aktivitesi, p-nitrofenil-β-D-glukopiranosit (pNPG) substratı kullanılarak belirlenmiştir. A.caelatus β-glukosidaz (Acβ) enzimi %6,330 verimle 31,196 kat; A.oryzae β-glukosidaz enzimi (Aoβ) ise %4,350 verimle 5,855 kat saflaştırılmıştır. SDS-PAGE ve Native-PAGE ile Acβ ve Aoβ enzimlerinin molekül ağırlıkları sırasıyla 30 kDa ve 31 kDa olarak belirlenmiş olup monomerik yapıda oldukları tespit edilmiştir. Acβ ve Aoβ enzimlerin optimum pH değerleri sırasıyla 6,00 ve 5,25; optimum sıcaklık değerleri ise 65°C olarak saptanmıştır. Acβ enzimin Km ve Vmax değerleri sırasıyla 0,19 mM ve 322,58 EU; Aoβ enziminin ise 0,363 mM ve 454,54 EU olarak belirlenmiştir. Ayrıca β-glukosidaz inhibitörlerinden olan D(+)glukoz ve δ-glukonolaktonun enzimler üzerindeki etkisi araştırılmıştır. Acβ enzimi D(+)glukoz ve δ-glukonolakton inhibitörü sırasıyla yarışmasız ve yarışmalı olarak, Aoβ enzimini ise yarışmalı olarak inhibe ettikleri belirlenmiştir. Acβ enzimin D(+)glukoz inhibitörü ile IC50 ve Ki değerleri 7,65x10-2mM ve 1,42x10-1±7,31x10-2;δ-glukonolakton inhibitörü ile 7,31x10-4 mM ve 2,98x10-5±1,35x10-5 olarak; Aoβ enziminin IC50 ve Ki değerleri ise D(+)glukoz inhibitörü ile 8,80x10-2mM ve 9,58x10-4±8,02x10-5; δ-glukonolakton inhibitörü ile 4,00x10-4 mM ve 2,99x10-5±9,00x10-8, olarak hesaplanmıştır.
Özet (Çeviri)
In this study, purification and biochemical characterization of β-glucosidase enzyme purified from Aspergillus caelatus NRRL26107 and Aspergillus oryzae NRRL5590 growth in solid state fermentation (SSF) was performed. β-glucosidase enzyme that has many biotechnological applications, was primarily obtained from A.caelatus (SSF conditions moistening NaH2PO4 pH 7.0, temperature 30°C and incubated 7 days) and A.oryzae (SSF conditions moistening NaH2PO4 pH 6.5, temperature 25°C and 7 days) grown in SSF using wheat straw. β-glucosidase enzyme was purified using two-step procedures, namely ammonium sulfate precipitation and Sepharose-4B-L-Tyrosine-1-Napthylamine Hydrophobic Interaction Chromatography. In our study, activity of β-glucosidase enzyme was determined by using para-Nitrophenyl-beta-D-glucopyranoside (pNPG) substrate. The purification rate was found 31.196 fold with yield of 6.330% for the obtained β-glucosidase from A.caelatus (Acβ) and 5.5855, 4.350% yield for the obtained β-glucosidase from A.oryzae (Aoβ). Molecular weights of Acβ and Aoβ enzymes were determined 30kDa and 31kDa, respectively, using SDS and Native PAGE analysis, and found to be in monomeric structure. Optimum pH values of Acβ and Aoβ enzymes were 6.00 and 5.25, respectively, optimum temprature values were determined as 65°C. The Km and Vmax values of Acβ enzyme were determined as 0.19mM and 322.58EU, respectively; while for the Aoβ enzyme 0.363mM and 454.545EU. The effect of the D(+)glucose and δ-glukonolactone which is a β-glukosidaz inhibitors on enzymes were also investigated by using pNPG. While D(+)glucose and δ-gluconalactone inhibitors were inhibited Acβ enzyme noncompetitively and competatitively, inhibited Aoβ enzyme competitively. The IC50 and Ki values of Acβ enzyme for D(+)glucose inhibitor were determined 7.65x10-2mM and 1.42x10-1±7.31x10-2, for the δ-gluconalactone 7.31x10-4mM and 2.98x10-5±1.35x10-5 respectively. The IC50 and Ki values of Aoβ enzyme for D(+)glucose were determined as 8,80.10-2mM and 9.58x10-4±8.02x10-5, whereas for the δ-gluconalactone 4.00x10-4mM and 2.99x10-5±9.00x10-8, respectively.
Benzer Tezler
- Piyasada satışa sunulan hayvan yemlerinden izole edilen Aspergillus türlerinde ribotoksin üretiminden sorumlu gen bölgesinin araştırılması
Researching of gene region responsible for ribotoxin production in Aspergillus species isolated from animal feed in the market
BAHAR MİDİLLİ
- Tokat koşullarında yetiştirilen üzüm çeşitlerinde endofitik fungusların belirlenmesi ve moleküler yöntemle karakterizasyonu
Identification and molecular characterization of endophytic fungi in grape cultivars grown under ecological conditions of Tokat province
ARİFE YAĞCI
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
ZiraatTokat Gaziosmanpaşa ÜniversitesiBahçe Bitkileri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. RÜSTEM CANGİ
DOÇ. DR. DAVUT SONER AKGÜL
- Denizel funguslardan biyoaktif metabolit üretimi
Bioactive metabolite production from marine fungi
ŞABAN ORÇUN KALKAN
- Eısenıa fetıda türü toprak solucanlarından elde edilen farklı ekstraktların bitki patojenleri üzerindeki antibakteriyel ve antifungal aktivitelerinin araştırılması eısenıa fetıda türü toprak solucanlarından elde edilen farklı ekstraktların bitki patojenleri üzerindeki antibakteriyel ve antifungal aktivitelerinin araştırılması
The research of antibacterial and antifungal activity on plant pathogens of different extracts obtained from eisenia fetida type earthworms
UĞUR TUTAR
- Patlıcan kök fungusları ve rizosfer bakterileri arasındaki antibiosis ilişkinin belirlenmesi
Determination of antibiosis relationship between eggplant root fungi and Rhizosphere bacteria
GÖKÇEN ERSÖZ