Geri Dön

Türkiye kaynaklı peynir örneklerinden izole edilen Enterococcus cinsi üyelerinin biyofilm oluşturma özelliklerinin araştırılması

Determination biofilm producing characteristics of Enterococcus strains isolated from turkey originated cheese samples

PDF İndir

  1. Tez No: 456446
  2. Yazar: MARYAM DIANI
  3. Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. NEFİSE AKÇELİK
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2016
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Ankara Üniversitesi
  10. Enstitü: Biyoteknoloji Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Biyoteknoloji Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

Çalışmamızda ilk olarak peynir izolatı olan 15 adet Enterococcus faecalis ve 33 adet Enterococcus faecium izolatları ile, Enterococcus faecalis ATCC29212 ve Enterococcus faecalis OG1RF kontrol suşularının biyofilm oluşum özellikleri incelenmiştir. E. faecalis izolatların %26.6' si biyofilm üreticisi iken geri kalan izolatların biyofilm üretim özelliğine sahip olmadığı belirlenmiştir. Bunun yanında, E. faecium izolatlarının %33'sının biyofilm üreticisi olduğu belirlenmiştir. 48 Enterokok izolatının MIC değerleri incelendiğinde kanamisin antibiyotiğine karşı 48 izolatın tamamı dirençli bulunurken, izolatların %83.3' ü vankomisin antibiyotiğine karşı direnç profili sergilemiştir. Ayrıca biyofilm üreticisi olan izolatların tamamı planktonik formdayken gentamisine karşı duyarlı olmalarına karşın biyofilm ürettikleri durumlarda gentamisine yüksek düzeyde (32000 mg/L) dirençli hale geçmişlerdir. Benzer şekilde, izolatlar biyofilm oluşturduklarında vankomisin antibiyotiğine dirençlerinin 16000 mg/L'ye kadar yükselmiştir. Hidrofobisite sonuçlarına göre izolatların biyofilm oluşturma düzeyleri ve hidrofobisite yeteneği arasında anlamlı bir ilişkiye rastlanmamıştır. İzolatların jelatinaz üretim denemesi sonucuna göre E. faecalis izolatları içerisinde dört (64, 72, 78, 140 kodlu izolatlar) güçlü proteaz (+++), ve üç (ATCC 29212, 79, 81 kodlu suşlar) negatif proteaz (-) ve kalan dokuz suş zayıf proteaz (+) özelliğinde suş saptanmıştır. E. faecium izolatlarında ise bir suş (14 kodlu izolat) proteaz negatif bulunurken, diğer 32 izolatın tamamının zayıf proteaz (+) olduğu belirlenmiştir. İzolatların değişik glukoz konsantasyonda biyofilm üretimleri incelendiğinde; %0.1 ve %1.5'lik glukoz içeren TSB besi ortamında %0.5'lik glukoz içeren TSB besi ortamına göre daha yüksek miktar biyofilm ürettikleri görülmüştür. Morfotiplendirme denemesinde Enterokok izolatları tarafından üretilen biyofilmlerin tamamının aynı morfotipte olduğu bulunmuştur. esp geni araştırılması sonucunda 48 suş arasında toplam 4 suş esp genini sahip olduğu belirlenmiştir. esp geni bakımından pozitif bulunan iki E. faecalis izolatı (81 ve 119 kodlu izolatlar) ve iki E. faecium (60 ve 134 kodlu izolatlar) izolatları arasında biyofilm üreticisi olmadığı ve biyofilm üreticisi E. faecalis ve E. faecium izolatları arasında hiçbirinin esp genini içermediği tespit edilmiştir. Enterokokların yüzey proteini kodlayan esp geninin biyofilm üreticisi olmayan S. Typhimurium LT2'suşuna aktarımı sonucunda, bu genin S. Typhimurium LT2 suşunda ifade edildiği qRT-PCR denemesi ile gösterilmiştir. Ayrıca bu bulgu, esp geninin Gram pozitif bakteri proteini olmasına rağmen Gram negatif bir bakteride ifade olması ve daha önce biyofilm üreticisi değilken, orta düzeyde biyofilm üreticisine dönüşmesi bakından da önem taşımaktadır.

Özet (Çeviri)

In this project, firstly, biofilm producing abilities of cheese originated 15 Enterococcus faecalis and 33 Enterococcus faecium strains, and also Enterococcus faecalis ATCC29212 and Enterococcus faecalis OG1RF control strains was investigated. 26.6% of E. faecalis isolates was biofilm producer while, the rest of were not able to produce biofilm. Besides these findings, 33% of E. faecium isolates was determined as biofilm producers. Considering the MIC value of 48 enterococci isolate, all of tested 48 strains were resistant against Kanamycin antibiotic and 83.3% of them were also exhibited resistance profile against Vancomycin. In addition, despite of the entire biofilm producer strains were resistant against Gentamicin antibiotic, they improved higher levels of Gentamicin resistance (32,000 mg / L) after they form biofilm structure. Similarly, when isolates form biofilm, their resistance level to Vancomycin antibiotic had risen up to 16000 mg/L. According to results of hydrophobicity assay, there was no any significant relation was found between hydrophobicity and biofilm production of the strains. While considering results of gelatinase production experiments, we found four of E. faecalis isolates (64, 72, 78, 140 coded isolates) were strong protease (+++) and three of E. faecalis isolates (ATCC 29212, 79, 81 coded strains) were negative protease (-) and the remaining nine strains were detected as weak protease (+) property. Among E. faecium isolates, only one strain (14 coded isolates) was found as negative proteases while the other 32 isolates was determined as weak protease (+). While we examined the biofilm producing abilities of strains at different glucose concentrations, we found that while strains grown in TSB medium supplemented with 0.1% and 1.5% glucose they produced higher levels of biofilm compared to 0.5% glucose. All strains were found to be in the same morphotype. As a result of the investigation for the presence of esp gene among strains, this gene was determined in four of the isolates. We found that, none of the two E. faecalis isolates (81 and 119 coded isolates) and two E. faecium (60 and 134 coded isolates) isolates who contains esp gene were biofilm producer, while none of the biofilm producer strains were contains esp gene. Following the clonning esp gene, encoding Enterococci surface protein, to non-biofilm producer S. Typhimurium LT2 strains, we shown by qRT-PCR that this gene is expressed in S. Typhimurium LT2. Also, these findings are important because esp gene is belong to a Gram positive organism and can expressed in a Gram negative organism and this organism become intermediate level biofilm producer following the transforming this gene

Geri Dön