Sülforafan'ın n9 fare mikroglia hücrelerinde nlrp3 inflamazom aktivasyonuna ve inflamazom ile indüklenen hücre ölümüne etkisi
The effects of sulforaphane on nlrp3 inflammasome activation and inflammasome activated cell death in n9 murine microglial cells
- Tez No: 466331
- Danışmanlar: PROF. DR. KEMAL KÜRŞAD GENÇ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Genetik, Moleküler Tıp, Genetics, Molecular Medicine
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2017
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Sinir Bilimi Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Temel Sinirbilimler Bilim dalı
- Sayfa Sayısı: 73
Özet
NLRP3 inflamazomu, kaspaz-1 proteinini aktif eden ve proinflamatuar sitokinler olan IL-1β ve IL-18'i cevap olarak salgılanmasına neden olan bir multiprotein kompleksidir. Sülforafan ise anti-inflamatuvar ve anti-oksidan etkileri bilinen bir izotiyosiyanattır. Bu çalışmadaki amaç, Sülforafanın mikroglial hücrelerde inflamazom aktivasyonuna ve inflamazom aktivasyonu ile indüklenen hücre ölümüne etkisinin incelenmesidir. Bu çalışmada N9 fare mikroglia hücre hattı kullanılmıştır. Hücre ölümü Laktat Dehidrojenaz (LDH) ve [2-(4-iyodofenil)-3-(4-nitrofenil)-5-(2,4-disülfofenil)-2H-tetrazolyum tuzu redüksiyonu (WST) testleri ile, apoptoz ise Cell Death ELISA kiti ve Akım sitometresi ile değerlendirilmiştir. Kaspaz-1 aktivitesi, Ac-DEVD-pNA substratı ile analiz edilmiştir. İnflamatuar sitokinlerin (IL-1β ve IL-18) protein seviyeleri ELISA yöntemi ile, sitokinlerin ve NLRP3 hedef genlerinin mRNA seviyeleri ise qPCR yöntemi kullanılarak analiz edilmiştir. Kapsaz-1, NLRP3 ve IL-1β protein seviyeleri Westernblotting yöntemi ile belirlenmiştir. Çalışmamızda inflamazom aktivasyonu parametrelerinden olan sitokin salınımlarına bakıldı, LPS ve ATP ile IL-1β ve IL-18'de gözlenen artış, SFN preinkübasyonu ile istatistiksel olarak anlamlı şekilde azalma gösterdi. Daha sonra bu sitokinler ve NLRP3 inflamazom kompleksinin mRNA düzeyinde bakıldığında benzer sonuçlar gözlendi. Aynı yolakta bulunan kaspaz-1 proteininin seviyesi de LPS ve ATP ile artış gösterirken SFN ile bu artışta azalma gözlendi. İnflamazom aktivasyonu parametrelerinden olan ROS miktarı ve mitokondrial bütünlük bozunması, ölçüldüğünde LPS ve ATP ile artan ROS miktarında SFN'nin baskılayıcı etkileri gözlendi. LPS ve ATP hücre ölümünü arttırırken, SFN ön uygulaması, hücre ölümünü azaltıcı etki gösterdi. Oluşan hücre ölümünün apoptotik olmadığı ve piroptotik hücre ölümünün SFN ile azaldığı gözlendi. Son olarak NLRP3 kompleksinin oluşmasında ASC molekülünün speck oluşumlarının LPS ve ATP ile arttığı ve bu artışın SFN ile azaldığı gösterildi.
Özet (Çeviri)
NLRP3 inflammation is a multiprotein complex that activates caspase-1 protein and causes secretion of IL-1β and IL-18, which are proinflammatory cytokines, in response. Sulforaphane is an isothiocyanate known to have anti-inflammatory and anti-oxidant effects. The aim of this study is to investigate the effect of sulforafane on inflammasome activation in inflammasome activated microglial cells and cell death induced by inflammasome and the mechanism of this effect. N9 murine microglia cell line was used in this study. Cell death was assessed by Lactate Dehydrogenase (LDH) and [2-(4-iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H- tetrazolium salt reduction (WST), ELISA kit and flow cytometer. Caspase-1 activity was analyzed by Ac-DEVD-pNA substrate. Protein levels of inflammatory cytokines (IL-1β and IL-18) were analyzed by ELISA and mRNA levels of cytokines and NLRP3 target genes were analyzed using the qPCR method. In our study, cytokine secretion was first measured in the parameters of inflammatory activation, and the increase in IL-1β and IL-18 with LPS and ATP was reduced by SFN preincubation. A similar result was observed when mRNA levels of these cytokines and NLRP3 inflammasome complex were examined. At the same time, the level of caspase-1 protein in the pathway was increased by LPS and ATP, while this decrease was further observed by SFN. The amount of ROS and mitochondrial integrity depolarization, when measured, had constructive effects on SFN. Finally, the formation of the NLRP3 complex has been shown to be enhanced by LPS and ATP and by increased SFN in the ASC molecule.
Benzer Tezler
- Sülforafan'ın mikroglial hücrelerde aktivasyonla indüklenen hücre ölümüne etkisi
The effect of sulphoraphane on activation induced cell death of microglial cells
ERDEN EREN
Yüksek Lisans
Türkçe
2014
BiyolojiDokuz Eylül ÜniversitesiSinir Bilimi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. KEMAL KÜRŞAD GENÇ
- The investigation of In Vitro anticancer effect of the combination of sulforaphane and doxorubicin
Sülforafan ve doksorubisin kombinasyonunun In Vitro antikanser etkilerinin araştırılması
SONDOS HASAN HLALI
Yüksek Lisans
İngilizce
2024
Eczacılık ve FarmakolojiAnadolu ÜniversitesiFarmakoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MİRİŞ DİKMEN
- Bazı teknolojik işlemlerin turpgil sebzelerinin sülforafan içeriklerine etkisi
Effect of some technological processes on the sulforophane contents of brassica vegetables
ZÜHAL OKCU
Doktora
Türkçe
2010
Gıda MühendisliğiAtatürk ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FEVZİ KELEŞ
- Organofosfat zehirlenmelerinde kurkumin, sülforafan ve intralipidin etkilerinin değerlendirilmesi
Evaluation the effects of curcumin,sulforaphane and intralipid treatment in organophosphate poisoning
ASLI YASEMEN SAVAŞ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2015
İlk ve Acil YardımGaziosmanpaşa ÜniversitesiAcil Tıp Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. NURŞAH BAŞOL
- Lahana tohumundan ekstrakte edilen ve saflaştırılan sülforafanın mikroenkapsülasyonu ve stabilitesinin belirlenmesi
Microencapsulation of purified sulforaphane extracted from cabbage seeds and determination of its stability
HAYRİYE BESTE ÖNER
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
Gıda MühendisliğiEge ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FİGEN ERTEKİN