The investigation of the clotrimazole induced apoptosis mechanism in saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces cerevisiae da klotrimazol indüklü apoptozis mekanizmasının aydınlatılması
- Tez No: 491054
- Danışmanlar: PROF. DR. LEMAN TARHAN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2017
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 224
Özet
Klotrimazol, son zamanlarda antineoplastic ajan olarak kullanımı araştırılmakta olan antifungal bir ilaçtır. Sunulan tez kapsamında, öncelikli hedef klotrimazolün ökaryotik model Saccharomyces cerevisiae BY4742 maya hücresi üzerindeki sitotoksik ve apoptotic etkilerinin aydınlatılmasıdır. S. cerevisiae, kolay kültürlenebilmesi ve genetic olarak modifiye edilebilmesi nedeniyle özellikle insan hastalıklarının aydınlatılmasında giderek tercih edilen ve popular bir araç haline gelmiştir. Klotrimazolün, maya hücreleri üzerindeki sitotoksik etkisinin belirlenebilmesi amacıyla FUN-1 canlılık testinden yararlanılmıştır. İndüklenen ölümün apoptotik karakteri sırasıyla fosfatidil serin eksternalizasyonu ve DNA fragmentasyonunu gösteren Annexin V – PI ve DAPI – TUNEL ikili boyamaları ile belirlenmiştir. Klotrimazol ile muamele edilen BY4742 hücrelerinde mitokondriyal membran potansiyelinde meydana gelen değişimler, ilaç derişimi ve muamale süresine bağımlı olarak araştırılmıştır. Klotrimazol indüklü apoptotik hücre ölümünün maya kaspazı, apoptoz indükleyici faktör, endonukleaz G ve HtrA-like serine proteaz Nma111 olmak üzere mitokondriyal proteinlere bağımlılığı, ilgili gen bölgesinin çıkarıldığı mutant suşlar kullanılarak araştırılmıştır. Klotrimazole maruz bırakılan S. cerevisiae BY4742 maya hücrelerinin oksidan – antioksidan dengeleri meydana gelen hasarlarla beraber araştırılmıştır. Bu amaçla, hücre içi reaktif azot ve reaktif oksijen seviyeleri ile NADH ve NADPH oksidaz aktiviteleri belirlenmiştir. Antioksidan savunma sistemlerinden, superoksit dismutaz, katalaz ve glutatyon ilişkili enzim aktiviteleri ve ayrıca indirgenmiş – yükseltgenmiş glutatyon seviyeleri irdelenmiştir. Son olarak, klotrimazol indüklü oksidatif stres koşullarında önemli birer belirteç olan malondialdehid ve protein karbonil seviyeleri ölçülmüştür. Klotrimazol indüklü maya apoptozunun önemli oranda metakaspaz aktivitesi üzerinden yürüdüğü belirlenmiştir. Öte yandan, antioksidan savunma sisteminde anlamlı indüksiyonlar olmakla birlikte, maya hücresinin klotrimazol indüklü stres koşullarından korunmasında yeterli olmadığı görülmüştür.
Özet (Çeviri)
Clotrimazole is an antifungal drug whose potential antineoplastic usage has been taken into consideration recently. In the scope of this thesis, it was primarily aimed to highlight the cytotoxic and apoptotic effects of clotrimazole on eukaryotic model Saccharomyces cerevisiae BY4742 yeast cells. This organism has been gradually become a preferred and popular research tool, especially in exploring human disease over the years because it can be easily handled and genetically modified. To examine cytotoxic effect of clotrimazole on yeast cells, FUN-1 viability test was used. The apoptotic character of death was determined by Annexin V – PI and DAPI - TUNEL double stainings which indicate phosphatidylserine externalization and DNA fragmentation, respectively. The variations in mitochondrial membrane potentials in BY4742 cells treated with clotrimazole were investigated in a concentration and time dependent manner. The dependency of clotrimazole induced apoptotic death to certain mitochondrial proteins including yeast caspase, apoptosis inducing factor, endonuclease G and HtrA-like serine protease Nma111p was highlighted with the use of knockout mutant strains. Oxidant and antioxidant status together with the resulting damage in S. cerevisiae BY4742 yeast cells exposed to clotrimazole were researched. For this aim, the variations in intracellular reactive nitrogen and reactive oxygen levels and the activities of NADH and NADPH oxidases were measured. Among antioxidant defense system, the activities of superoxide dismutase, catalase, and glutathione related enzymes and the levels of reduced – oxidized glutathione were determined. Finally, as markers of clotrimazole induced oxidative stress conditions, malondialdehyde and protein carbonyl levels were investigated. These findings can be summarized as clotrimazole induced apoptotic cell death in yeast mainly depends on metacaspase acivity. On the other hand, although significant inductions have been observed in antioxidant defence system, it could not protect cells from clotrimazole based stress conditions.
Benzer Tezler
- Flukonazol dirençli Candida albicans suşlarında atım pompalarını kodlayan genlerin ekspresyon düzeylerinin gerçek zamanlı polimeraz zincir tepkimesi ile araştırılması
Investigation of the expression levels of efflux pumps encoding genes in fluconazole resistant Candida albicans strains by real-time polymerase chain reaction
SİNEM GÜLAT
Doktora
Türkçe
2013
MikrobiyolojiDokuz Eylül ÜniversitesiTıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MİNE DOLUCA
- Flukonazole dirençli candıda albıcans izolatlarında sitokrom p450 14?-demetilaz enziminde değişikliklere yol açan mutasyonların araştırılması
Investigation of mutations which cause alterations in cytochrome p450 14?-demethylase enzyme of fluconazole resistant candida albicans isolates
LERZAN MANASTIR
Doktora
Türkçe
2007
MikrobiyolojiDokuz Eylül ÜniversitesiMikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. MİNE YÜCESOY
- Organik bileşiklerin akuatik toksisitelerinin in siliko yöntemlerle araştırılması ve tahmini
Investigation and prediction of aquatic toxicity of organic compounds via in silico methods
ELİF MERVE EMİNOĞLU
Doktora
Türkçe
2024
KimyaMarmara ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SAFİYE ERDEM
PROF. DR. MELEK TÜRKER SAÇAN
- 2-aminotiyofenol ile beta-nitrostirenlerin verdiği yeni tipte nitroetan türevlerinin sentezi, reaksiyonları ve antimikrobiyal aktivitelerinin incelenmesi
Synthesis of new type nitroethane derivatives from 2-aminothiophenol and beta-nitrostyrenes, investigation their reactions and antimicrobial activity
MEHTAP GÖKÇE
Doktora
Türkçe
1996
Eczacılık ve FarmakolojiGazi ÜniversitesiFarmasötik Kimya Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. ERDOĞAN BERÇİN
- Fenil, furil ve benzotriazol sübstitüe eterlerin sentezi; biyolojik aktivitelerinin araştırılması
The synthesis of phenyl, furyl and benzotriazole substitüted ethers; investigation of their biological activities
MERAL BAYRAKTAR
Yüksek Lisans
Türkçe
2011
KimyaZonguldak Karaelmas ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ÖZDEN ÖZEL GÜVEN