Geri Dön

Improvement of holdase activity of a small heat shock protein from extremely acidophilic archaea

Aşırı derecede asidofilik arkeadan elde edilen küçük ısı şoku proteininin holdaz aktivitesinin geliştirilmesi

PDF İndir

  1. Tez No: 548936
  2. Yazar: YAĞMUR KAÇER
  3. Danışmanlar: PROF. DR. SEMRA KOCABIYIK, PROF. DR. GÜZİN CANDAN GÜLTEKİN
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2019
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 128

Özet

Bu çalışmada, bilinen en asidofilik organizma olan arkeabakteri Picrophilus oshimae'nin moleküler bir küçük ısı şoku protein geni (po-sHSP20) ilk kez E.coli'de klonlanmış ve genin yüksek düzeyde anlatımı yapılmıştır. Yüksek ısıya dayanıklı olan rekombinant po-sHSP20 proteini, afinite kromotagrafisi ile homojen bir şekilde saflaştırılmıştır. po-sHSP20'nin Boyut Dışlama Kromatografisi ile yapılan oligomerik yapı analizi proteinin çoğunlukla 12-mer, 18-mer ve bazı dimerik/monomerik birimler halinde bulunduğunu göstermiştir. po-sHSP20'nin yüksek oranda korunmuş K99 grubu glutamik asit ve glisinle değiştirilmiştir. Mutant proteinlerin E.coli'de anlatımı başarıyla gerçekleşmiştir. po-sHSP20 varyantlarının şaperon aktiviteleri, domuz kalbi sitrat sentaz enzimi substrat olarak kullanılarak çalışılmıştır. K99E and K99G varyantları sitrat sentazın 47ºC'de ısı kaynaklı inaktivasyonunu yabanıl tipe göre daha iyi önlemişlerdir (sırasıyla, 2.3 ve 2 kat). Tüm şaperon varyantları sitrat sentazın ısı kaynaklı kümelenmesini, 1:7 ve 1:35 molar oranlarında önleyebilmiştir. po-sHSP20'nin 3 boyutlu model yapısının analizi, monomerin alfa kristalin bölgesi ile α-heliks N-terminal ve sarmal C-terminal bölgeleri bulunduğunu göstermiştir. Dimerleşme bir monomerin β6 ipliği ile diğer monomerin β2 ipliği arasındaki etkileşimle olmaktadır. Model yapı analizlerine göre, K99G and K99E mutasyonları sonucu K99 grubunun yer aldığı moleküller arası hidrojen bağı ile birlikte bazı molekül içi hidrojen ve hidrofobik bağlar kaybolmuştur.

Özet (Çeviri)

In this study, a small heat shock protein gene (po-sHSP20) of archaeon Picrophilus oshimae which is the most thermoacidophilic organism known, was cloned and overexpressed in E.coli for the first time. The recombinant po-sHSP20 protein that was resistant to high temperature was purified to homogeneity by affinity chromatography. Oligomeric structure analysis of the po-sHSP20 by Size Exclusion Chromatography showed that it exists mostly as 12- and 18-mer oligomers with some dimeric/monomeric units under physiological conditions. Highly conserved K99 residue of the po-sHSP20 was substituted by glutamic acid and glycine. Mutant proteins were successfully expressed in E.coli. Chaperone activities of the po-sHSP20 variants were studied by using pig heart citrate synthase as the client protein. The K99E and K99G variants better protected citrate synthase (2.3- and 2-fold, respectively) from heat inactivation at 47ºC, as compared to wild-type. All chaperone variants could prevent thermal aggregation of citrate synthase at a molar ratio of 1:7 and 1:35. The analysis of the 3D model structure of the po-sHSP20 showed that its monomer consists of an alpha crystallin domain flanked by an N-terminal α-helix and C-terminal coiled structure. Dimerization occurs via interactions of β6-strand of one monomer with β2-strand of other monomer. According to model structure analyses of K99G and K99E mutations resulted in loss of the intermolecular hydrogen bond, together with the some intramolecular hydrogen and hydrophobic bonds that K99 residue participates.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    413662

    Uluslararası Hukukun etkisiyle Türk hukukunda adil yargılanma hakkının gelişimi

    Improvement of being tried equally in Turkish Law with the effect of International Law

    İNANÇ ALTINTAŞ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    HukukUfuk Üniversitesi

    Uluslararası İlişkiler Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. CAVİD ABDULLAHZADE

  2. Tez No

    416570

    Improvement of water sensitivity, mechanical properties and utilization of hemicellulose based polymeric materials

    Hemiselüloz temelli polimerik malzemelerin su hassasiyetinin, mekanik özelliklerinin ve kullanım alanlarının geliştirilmesi

    MERVE AKKUŞ

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2015

    BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. UFUK BÖLÜKBAŞI

    PROF. DR. NECATİ ÖZKAN

  3. Tez No

    416620

    Improvement of expansive soils by using phosphogypsum

    Fosfojips kullanarak şişen zeminlerin stabilizasyonu

    İLYAS ÖZKAN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2015

    İnşaat MühendisliğiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    İnşaat Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ERDAL ÇOKÇA

  4. Tez No

    416842

    Stenotaphrum secundatum (Walt.) Kuntze türünde gama ışınlaması yöntemiyle çim kalitesinin iyileştirilmesi

    Improvement of turfgrass quality by gamma ray irradiation in Stenotaphrum secundatum (Walt.) Kuntze

    MERT ÇAKIR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    Peyzaj MimarlığıAkdeniz Üniversitesi

    Peyzaj Mimarlığı Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. SONGÜL SEVER MUTLU

  5. Tez No

    416978

    Betonarme dolgu duvarlarla kısa kolon davranışının iyileştirilmesi

    Improvement of short column effect in reinforcement concrete shear walls

    HAMID ALLAHGHOLIPOUR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    İnşaat MühendisliğiGazi Üniversitesi

    İnşaat Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SİNAN ALTIN

Geri Dön