Klotho proteininin NHEJ tamir yolağındaki Ku70, Ku80 ve DNA-PK genlerinin ifadesi ve proteinlerinin işleyişi üzerine etkilerinin araştırılması
The investigation of effect of the klotho protein on the expression of NHEJ repair pathway genes Ku70, Ku80 and DNA-PK and on the working of their proteins.
- Tez No: 559360
- Danışmanlar: DOÇ. DR. AYDIN RÜSTEMOĞLU
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Tıbbi Biyoloji, Medical Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2019
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Tokat Gaziosmanpaşa Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 134
Özet
Yaşlanma, zaman içerisinde canlının çevre ile olan ilişkilerinde dengelerinin çevre lehine sonuçlandığı bir süreçtir. Bu sürecin ilerleyiş hızı canlının çevre ile olan etkileşimi ve kendi kalıtsal özelliklerine bağlı olarak değişir. Bu çalışmamızda, yaşlanma ile ilgili olduğu saptanan genetik faktörlerden Klotho ( Kl ) geni ele alınmıştır. Klotho geni ilk kez farelerde tanımlanan, insanda 13. kromozomun q kolunda yer alan ve plazma membranında ve golgi aparatında bulunan tip 1 tek geçişli transmembran glikoproteinini kodlayan bir gendir. Klotho'nun hücre içi moleküler mekanizmaları nasıl etkilediğine yönelik bazı çalışmalar bulunsa da, özellikle yaşlanma sürecinde de etkisi bilinen DNA çift zincir kırıklarının (DSB) onarım mekanizmalarında rolü aydınlatılamamıştır. Bu çalışmada Klotho'nun DSB onarımında görevli, özellikle de Homolog Olmayan Uç Birleştirme (NHEJ) onarımında görevli bazı genlerin ifadesini nasıl etkilediğini araştırmayı amaçladık. Çalışmada fare hipokampal kökenli hücre serisi olan HT22 hücreleri kullanılmıştır. DNA'da çift zincir kırığı oluşturduğu bilinen Endosülfan ile öncellikle IC50 dozu belirlenmiş, daha sonra bu doz kullanılarak farklı deney protokollerinde muamele edilen HT22 hücrelerinden RNA ve protein izolasyonu yapılmıştır. Elde edilen total RNA'dan cDNA oluşturulmuş ve daha sonra Ku70, Ku80, DNA-PK genlerinin ifadelerindeki değişimler RT-PCR ile belirlenmiştir. Protein seviyesindeki değişimler Western Blotlama yöntemleri ile belirlenmiştir. Elde edilen sonuçlar çalışılan genlerin ekspresyon seviyelerinin sadece endosülfanla muamele edilen hücrelerde önemli ölçüde yükseldiğini, ama Klotho proteini de verilen hücrelerde yükselişin olmadığını göstermiştir. Bu sonuçlar, Klotho'nün Endosülfanın zararlı etkisini minimize ettiğini ve NHEJ yolağını baskıladığını düşündürmektedir. Böylece literatürde ilk defa Klotho proteininin NHEJ tamir yolağındaki rolü araştırılmıştır.
Özet (Çeviri)
Aging is a process in which the balance of the organism's relations with the environment over time results in favor of the environment. The rate of progress of this process depends on the interaction of the organism with the environment and its inherited characteristics. In this study the Klotho (Kl) gene, which is one of the genetic factors associated with aging was discussed. The Klotho gene, which first described in the mice located in the q-arm of chromosome 13 in the human, and encodes the type 1 single-pass transmembrane glycoprotein located in the Golgi apparatus. Athough there are some studies suggesting how Klotho affects intracellular molecular mechanisms, the role of this protein on the DNA double strand brekage (DSB) repair mechanisms, which are also known to have an effect on the aging process, cannot be elucidate yet. In this study, we aimed to investigate how Klotho affects the expression of some genes, especially known to work in the non-homologous end joint (NHEJ) repair, one of the repair mechanisms in the DNA DSB repair. In the study, the mouse hippocampal cell lines HT22 cells were used. First, the IC50 dose of Endosulfan, which is known to produce double-chain fracture in DNA, was determined. Then, using this dose the HT22 cells were treated in different experimental protocols, and finally RNA and protein isolation was performed in those cells. From obtained total RNAs the cDNAs were generated, and then changes in the expressions of the Ku70, Ku80 and DNA-PK genes were determined by RT-PCR. Changes in protein level were determined by Western Blotting methods. The results showed that the expression levels of studied genes increased significantly only in endosulfan-treated cells, but was not increased in the cells which also treated with Klotho protein. These results suggest that Klotho minimizes the harmful effect of Endosulfan and suppresses the NHEJ pathway. Thus, for the first time in the literature, the role of Klotho protein in the NHEJ repair pathway was investigated.
Benzer Tezler
- Heterologous expression of mouse alpha klotho protein inphotosynthetic microalgae Chlamydomonas reinhardtii
Fare alfa klotho proteininin fotosentetik mikroalg Chlamydomonas reinhardtii'de heterolog ekspresyonu
RAMAZAN ÇAKMAK
Yüksek Lisans
İngilizce
2021
BiyoteknolojiKaradeniz Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ UĞUR UZUNER
- Hippokampal HT22 hücre serilerinde klotho proteininin P38 MAPK ifadesi üzerine etkisinin araştırılması
Investigation of the effects of klotho protein on P38 MAPK expression in hippocampal HT22 cell series
SADEGÜL TUNCER
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
Tıbbi BiyolojiTokat Gaziosmanpaşa ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AYDIN RÜSTEMOĞLU
- Polikistik over sendromlu hastalarda serum alfa-klotho seviyeleri ve klinik ile ilişkisi
Serum alfa-klotho levels in women with polycyctic ovary syndrome and its clinical importance
GİZEM SARIİZ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2018
Kadın Hastalıkları ve DoğumPamukkale ÜniversitesiKadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET BABÜR KALELİ
- Obez hastalarda klotho ve telomeraz ilişkisinin değerlendirilmesi
Assessment of klotho and telomerase association in obese patients
ESMA PEHLİVAN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2017
Endokrinoloji ve Metabolizma HastalıklarıEge Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. LÜTFİYE FÜSUN SAYGILI
- İnsan immünyetmezlik virüsü ile yaşayan bireylerde kronik inflamasyon belirteci olan klotho'nun diğer inflamasyon biyobelirteçleri ile karşılaştırılması
Comparison of klotho, a marker of chronic inflammation, with other biomarkers of inflammation in individuals living with human immunodeficiency virus
MERVE ÜSTÜNER DOĞAN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2023
İç HastalıklarıÇukurova ÜniversitesiEnfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. YEŞİM TAŞOVA