Geri Dön

Probiyotik Bifidobacterium breve 'nin bağışıklık düzenleyici tır proteinin tanımlanması, klonlanması ve rekombinant üretimi

Identification, cloning and recombinant expression of immune modulatory tir protein from probiotic Bifidobacterium breve

  1. Tez No: 592413
  2. Yazar: DİCLE DİLARA AKPINAR
  3. Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ BURCU KAPLAN TÜRKÖZ
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Gıda Mühendisliği, Food Engineering
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2019
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Ege Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Gıda Mühendisliği Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 202

Özet

Bağışıklık düzenleyici özelliğe sahip probiyotikler üzerine yapılan çalışmalar, probiyotiklerin ürettikleri moleküllerle bağışıklık sistemini etkileyebildiklerini göstermiştir. Bu etkileşimde hücre yüzeyinde bulunan Toll benzeri reseptörlerin (TLR) de rol aldığı düşünülmektedir. Çeşitli bakteriyel TIR domain proteinleri, yapısal olarak insan TIR domain proteinlerini taklit ederler ve sinyal iletimini değiştirerek bağışıklık cevabını yönlendirirler. Probiyotiklerin TIR domain yapısında proteinlere sahip olabileceği düşünülerek yapılan biyoinformatik taramalarda Bifidobacterium breve 'nin genomunda olası TIR domaini dizisine ulaşılmıştır. Bu tezde, probiyotik Bifidobacterium breve 'nin olası TIR domain proteinin (BbTIR) klonlanması, rekombinant üretimi ve saflaştırılması amaçlanmıştır. Biyoinformatik yöntemlerle, çoklu dizi hizalamalarla BbTIR 'ın korunan TIR domain desenleri içerdiği doğrulanmıştır. PZR ile çoğaltılan bbtir, pETM11-SUMO3GFP ve pET151/D-Topo plazmidlerine klonlanmıştır. Farklı ekspresyon hücrelerinden ve farklı sıcaklıklarda rekombinant protein üretimi için optimum koşullar belirlenmiştir. 6his-BbTIRV1 ve 6his-BbTIRV2 proteinlerinin üretimi için optimum üretim koşulları 1 mM IPTG ile Rossetta 2 hücrelerinden sırasıyla 20 ̊C geceboyu ve 25 ̊C 6 saat indüksiyon olarak belirlenmiştir. Rekombinant proteinler, kırılma ürünü olduğu düşünülen ve TIR domain moleküler ağırlığına denk gelen bir proteinle beraber nikel afinite kromotograsisi ile saflaştırılmıştır. Jel filtrasyon kromotografisi ile oligomerik yapısı incelenmiş ve 50 mM Tris pH 8.0, 150 mM NaCl, %10 gliserol, 10 mM DTT tamponuyla yapılan jel filtrasyon kromotografisi ile protein monomerik formda elde edilmiştir. Elde edilen deneysel sonuçlar, biyoinformatik analizler; çoklu dizi hizalamaları ve protein yapısı modelleri ile desteklenmiş ve probiyotik bakteri TIR domain proteinlerinin yapısal olarak TIR domain protein özelliklerine sahip oldukları bu tez çalışması ile gösterilmiştir.

Özet (Çeviri)

Studies on probiotics which have immunomodulatory properties, show that probiotics produce molecules which can affect the immune system. In this interaction, Toll like receptors (TLR) on cell surface are also thought to play a role. Several bacterial TIR domain proteins structurally mimic the human adaptor TIR domain proteins and they manipulate the immune response by altering the signal transduction. Following these, the presence of probiotic TIR domain proteins was searched using bioinformatics tools. A putative TIR domain sequence in the genome of Bifidobacterium breve was found. In this thesis, cloning, recombinant production and purification of putative TIR domain protein from B. breve (BbTIR) was investigated. It has been confirmed by bioinformatics methods that BbTIR contains conserved TIR domain patterns by multiple sequence alignments. bbtir gene was cloned into pETM11-SUMO3GFP and pET151/D-TOPO vectors. Protein expression from different cells and induction conditions were tested for optimum recombinant protein production. 6his-BbTIRV1 and 6his-BbTIRV2 protein was achieved from Rosetta 2 cells at 20 ̊C with overnight and 25 ̊C for 6 hours with 1 mM IPTG induction respectively. The recombinant proteins were purified by nickel affinity chromatography together with a protein which is thought to be a cleavage product and is equal to the moleculer weight of the TIR domain. The oligomeric structure was examined by gel filtration chromatography and protein was obtained in monomeric form in 50 mM Tris pH 8.0, 150 mM NaCl, 10% glycerol, 10 mM DTT buffer. Experimental results were supported by alignments and protein structure models from bioinformatics analyzes verifying the presence of probiotic TIR domain proteins with TIR domain structures.

Benzer Tezler

  1. Bifidobacterium cinsi bakterilerin bazı probiyotik özelliklerinin belirlenmesi

    Determination of some probiotic properties of bifidobacterium genus bacteria

    GÜLÇİN ALP

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2008

    BiyolojiGazi Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. BELMA ASLIM

  2. Lactobacillus, Propionibacterium ve Bifidobacterium cinslerine ait farklı türlerin konjuge linoleik asit üretimlerinin probiyotik açıdan önemi

    Probiotic importance of conjugated linoleic acid production from different strains of Lactobacillus, Propionibacterium and Bifidobacterium genus

    SEMA YİYİT DOĞAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    BiyolojiGazi Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. BELMA ASLIM

  3. Lactobacillus ve bifidobacterium cinsi bakterilerin beta-glukozidaz enzim aktivitesi ve izoflavon hidrolizi

    Beta-glycosidase enzyme activities of lactobacillus and bifidobacterium genus and hydrolysis of isoflavone

    BERAT ÇINAR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2012

    BiyoteknolojiGazi Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ZEHRA NUR YÜKSEKDAĞ

  4. Bazı muhtemel probiyotik türlerin inulin varlığında antioksidan aktivite ve immünolojik özelliklerinin araştırılması

    Investigation of antioxidant activity and immunological properties of promising probiotic cultures in the presence of inuline

    HANİFE AYŞEGÜL MENDİ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    BiyolojiGazi Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. BELMA ASLIM

  5. Deneysel parkinson oluşturulmuş ratlarda Saccharomyces boulardii ve bakteriyel kökenli probiyotiklerin etkisinin araştırılması

    Investigation of the effect of saccharomyces boulardii and bacterial origin probiotics in experimental parkinson's disease induced rats

    EDA DUYGU İPEK

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2020

    AnatomiAydın Adnan Menderes Üniversitesi

    Anatomi Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. HULKİ BAŞALOĞLU