Alfa-2 makroglobulin kapan tepkimesi üzerine bir çalışma
A Study on trapping reaction of alpha-2 macroglobulin
- Tez No: 59691
- Danışmanlar: PROF. DR. İNCİ ÖZER
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Alfa-2-makroglobulin, proteaz inhibisyonu, protein fluoresans rv, Alpha-2-macroglobulin, protease inhibitor, protease fluorescence. VI
- Yıl: 1997
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 64
Özet
ÖZET Alfa-2-makroglobulin (a-2-M) geniş spektrumlu proteaz inhibitörü olarak etkiyen ; 725 kDa boyutunda, tetramerik bir plazma glikoproteinidir. Inhibisyon, proteaz etkisiyle a-2-M'in yem bölgesinin kınlması; kırılma sonrasında inhibitor konformasyonunun değişmesi; bu değişim paralelinde kırılmaya neden olan proteazm a-2-M'e enterne olarak devre dışı bırakılması nedeniyle gelişir. Bu çalışmada a-2-M-tripsin tepkimesi tripsin substratı olan N-benzoil arginin etil ester ( BAEE) ile yavaşlatılmış; konformasyon değişikliği protein fluoresansı üzerinden izlenmiştir. Triptofan uyaranı (X= 280 nm) sonucunda alınan fluoresans sinyalinin (X=320 nm) enzim varlığında zamanla arttığı; artışın 2° kinetiğe uyduğu görülmüştür. Denk [a-2-M] ve [E ]; değişken [BAEE] varlığında gözlenen fluoresans artışlarının aşağıdaki denkleme göre değerlendirilmesiyle, a-2-M'deki 1 1 F»-Ft F.-Fo + k r_K^ - 1 1 L Kbaee+BAEE J yem bölgesinin tripsin tarafindan kırılmasıyla ilgili hız sabiti ( k ), 2.1± 0.5x1 07 M'1 sn1 düzeyinde bulunmuştur ( 20 mM potasyum fosfat, pH=7, tamponunda; 25 °C de). Belirlenen hız sabiti ile rapor edilen değerler arasındaki benzerlik (l-2xl07 M"1 sn-1) inhibitörde meydana gelen konformasyon değişikliğinde hız belirleyici kademenin yem bölge kırılması olduğunu doğrulamaktadır. Bunu sınamak amacıyla, tripsin aktivitesi N-a-p-Tosil-L-Lizin klorometil keton ile giderildi. a-2-M, hazırlanan farklı spesifik aktiviteye sahip tripsin popülasyonlan ile titre edildi. Çalışma sonunda a-2-M'e enterne aktivitenin aynı limit düzeye ulaştığı; aktif enzim bağlama stoikiyometrisinin değişmediği görüldü. Böylece ancak aktif enzimin a-2-M'e enterne edilebildiği; aynı enzim için rapor edilen bağlanma stoikiyometrisindeki değişkenliklere a-2-M preparatlanndaki safsızlıklar veya denature a-2-M'in neden olduğu sonucuna varıldı.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT Alpha- 2 macroglobulin ( a-2-M), a 725 kDa tetrameric plasma glycoprotein, is a prtinase inhibitor which act on a wide spectrum of proteases. The inhibitory process start with proteolytic cleavage of a bait region in a-2-M. This leads to a change in conformation and thereby to the entrapment of the protease in the inhibitor. The entrapped protease is inactive towards macromoleculer substrates. The present study concerns the reaction between a-2-M and trypsin. The system was slowed down by use of the tyripsin substrate, N- benzoil- L- arginine ethyl ester (BAEE) and the reaction was monitared though changes in protein fluorecence. The enzyme was found to cause a time - dependent increase in intrinsic fluorecence (excitation at 280 nm; emission at 320 nm). The change was found conform to 2° kinetics. Data obtained at [a-2-M] = [E] and variable [BAEE] were analyzed according to equation, 1 1 + k x oe“”Xt *co *“ *o [Kbaee I Kbaee+BAEE J The second order rate constant, k, relating the conformational change was found to be 2.1 ± 0.5 x 10 7 M”1 sec'1 ( 20 mM potassium phosphate, pH 7 ; 25°C). Agreement between k and the preoviousyl reported rate constant based on indirect observations (l^xlO'M1 sec"1) confirms that the rate limiting step in the conformational change must be bait - region cleavage. The trapping reaction was also studied to determine if catalytically inert enzyme could be passively incorporated into a-2-M. To test this, trypsin was inactivated with N-a-p-Tosyl-L-Lysine chloromethyl ketone and a-2-M was titrated with trypsin populations which had different spesific activities. The level of activity internalized by a-2-M was found to approach a constant limit determined by [a-2-M]. Active enzyme binding stoicbiometry was independent of the specific activity of the trypsin preparations. It was concluded that only active enzyme could be internalized and that variations in E : a-2-Mbinding stoichiometry must be caused by the presence of impurities or denatured inhibitor species in a-2-M preparations.
Benzer Tezler
- Amfizemde alfa-1-protez inhibitörü varyantlarının incelenmesi
Determination of alfa-1-protease inhibitor variants in patients with pulmonary emphysema
ÖZDEN ÜNAL
- Amfizemde alfa-1-proteaz inhibitörünün kapasitesinin incelenmesi
Investigation of alpha-1-protease inhibitory capacity in emphys
ZUHAL ADLI
- Botulinum toksininin ve nikotinin sıçan karın derisi perforatör flebinde viyabiliteye ve anjiyogeneze etkisi
Effects of botulinm toxin and nicotine on rat abdominal perforator flap viability and anioenesis
ENGİN YOSMA
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2017
Plastik ve Rekonstrüktif CerrahiOndokuz Mayıs ÜniversitesiPlastik ve Rekonstrüktif Cerrahi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AHMET DEMİR
- Alfa-2-makroglobulin saflaştırılması; proteinaz varlığında alfa-2-makroglobulinin diğer inhibitörlerle interaksiyonunun incelenmesi
Purification of alpha-2-macroglobulin, investigation of the interaction of alpha-2-M with the other inhibitors in the presence of proteinase
OYA ORTAPAMUK
- Behavior of alpha-2-macroglobulin unique peptides in biological samples
Biyolojik numunelerde alfa-2-makroglobülin özgün peptitlerinin davranışı
PELİN YILDIZ
Yüksek Lisans
İngilizce
2021
KimyaOrta Doğu Teknik ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ SÜREYYA ÖZCAN KABASAKAL