Terapötik bir monoklonal antikorun ortogonal kromatografik metotlarla karakterizasyonunun yapılması
Characterization of a therapeutic monoclonal antibody by orthogonal chromatographic techniques
- Tez No: 610423
- Danışmanlar: PROF. DR. GAYE ÖNGEN ÖZGEN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2019
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ege Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 142
Özet
Biyoteknolojik ilaç sınıfının en büyük kolu monoklonal antikorlardır. Terapötik monoklonal antikorlar farmasötik alanda 1986 yılından beri kullanılmaktadır. Son 5 yılda 40'ın üzerinde terapötik monoklonal antikor FDA tarafından onaylanmıştır. Son 10 yılda biyoteknolojik ilaçların pazar payı hızla yükselmektedir. Patentli orijinal biyoteknolojik ilaçların patent sürelerinin bitmesi biyobenzer pazarını doğurmuştur. Biyobenzer monoklanal antikor adayları regulasyonlara uygun olarak çok iyi karakterize edilmesi gerekmektedir. Orijinal moleküle fizikokimyasal benzerlik klinik olarak biyobenzerin güvenlik ve etkinlik başarısını arttırmaktadır. Kromatografik yöntemler, monoklonal antikorun fizikokimyasal özellikleri ve karakterizasyonun belirlenmesinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Protein A, Ters faz kromatografisi, Hidrofobik etkileşim kromatografisi, Hidrofilik etkileşim kromatografisi, Boyut eleme kromatografisi ve Katyon değişim kromatografisi kullanılarak ortogonal yöntemler ile Belimumab terapötik monoklonal antikoru karakterizasyonu yapılmıştır. Belimumab monoklonal antikoru Hc bölgesi amino asit sekansı sonucunda Gln-Asp-Glu-Leu-Thr-Gln-Asp-Pro-Ala-Val peptidine sahip olduğu bulunmuştur. Amino asit kompozisyonu analizi ile Triptofan ve Sistein elde edilememiştir. Belimumab amino asit kompozisyonunda en az metiyonin amino asitine, en fazla serin amino asitine sahiptir. Protein A kromatografisi ile miktar tayini metotu geliştirilmiştir. Doğrusallık grafiği R2=0,9994 bulunmuştur. Ters faz kromatografi miktar tayini ve impürite metotları geliştirilmiştir. Ters Faz doğrusallık grafiği R2=0.9998 bulunmuştur. İmpurite metotunda yaklaşık %8 impurite bulunmuştur. Hidrofobik etkileşim kromatografisi ile okside örnekler ayrılmıştır. Hidrofilik etkileşim kromatografisi ile Glikan profili ve %35 ile en fazla G1Fa glikanı olduğu bulunmuştur. Katyon değişim kromatografisi ile yük varyantlarının %8-12 arasında değiştiği ve asidik varyantların bazik varyantlardan fazla olduğu bulunmuştur. Molekül ağırlığı Sec-malls sistemi ile 142-145 kDa arasında olduğu, kütle spektroskopisine göre 147.016 kDa olduğu bulunmuştur. Bu tez çalışması ile Belimumab orijinal monoklonal antikorun fizikokimyasal özellikleri ve karakterizasyon profili belirlenmiştir.
Özet (Çeviri)
Monoclonal antibodies are the largest class of biotechnological drugs. Therapeutic monoclonal antibodies have been used since 1986. FDA has approved more than fourty therapeuetic monoclonal antibodies in last five years. Market share of biopharmaceuticals has been increasing in pharma industry for ten years. Expiration of the original patents of biotechnological drugs has resulted in the emergence of biosimilars. Biosimilar candidate monoclonal antibodies should be characterized according to regulatory compliance. The more physicochemically biosimilar a candidate biosimilar is to the original molecule, the higher are the clinical safety, efficacy and success. Chromatographic techniques have widely been used for assessment of physicochemical properties and characterization of monoclonal antibodies. Belimumab, which is a therapeutic monoclonal antibody, was characterized with orthogonal methods by using protein A, reverse phase, hydrophobic interaction, hydrophilic interaction, size exclusion and cation exchange chromatography techniques. It was found that constant region in heavy chain (Hc) domain of monoclonal antibody Belimumab has the peptide sequence Gln-Asp-Glu-Leu-Thr-Gln-Asp-Pro-Ala-Val. Trp and Cys could not be obtained by amino acid composition analysis. The most abundant amino acids in Belimumab are methionine and cysteine is the least abundant ones. Antibody titer determination method was developed by Protein A chromatography and R2 was found 0.9994. Protein titer quantification and impurity testing methods were developed by reverse phase chromatography. According to impurity assay, percentage impurity value was found 8%. Oxidized groups were separated by hydrophobic interaction chromatography. Glycan profile was determined by hydrophilic interaction chromatography and it was found that amount of G1Fa 35%, which is the most abundant. According to the results of cation-exchange chromatography analysis, charge variants are within the range of 8-12% and there are more acidic variants than basic variants. Molecular weight was measured by SEC-MALS and mass spectrometry. Molecular weight was found between 142 kDa and 145 kDa by SEC-MALS and 147.016 kDa by mass spectrometry. In this thesis, physicochemical features and characterization profile of Belimumab monoclonal antibody were determined.
Benzer Tezler
- Terapötik bir monoklonal antikorun karakterizasyonu
Characterization of a therapeutic monoclonal antibody
BERNA HORUZ
- Development and scaling up of downstream purification processes of a therapeutic monoclonal antibody
Terapötik bir monoklonal antikorun alt akım saflaştırma proseslerinin geliştirilmesi ve ölçek büyütülmesi
EMRE BURAK ERKAL
Yüksek Lisans
İngilizce
2022
Bilim ve TeknolojiAcıbadem Mehmet Ali Aydınlar ÜniversitesiBiyomedikal Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ DENİZ DEMİRHAN
- Long-term stability and forced degradation studies of a therapeutic monoclonal antibody
Terapötik monoklonal bir antikorun uzun süreli stabilitesi ve hızlandırılmış degradasyon çalışmaları
MERVE ÇELİK YAMACI
Doktora
İngilizce
2023
BiyoteknolojiAcıbadem Mehmet Ali Aydınlar ÜniversitesiMedikal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ÖZGE CAN
- Determination of the biological and functional properties of monoclonal antibody in IGG structure developed for pharmaceutical use
Farmasötik kullanım için geliştirilen IGG yapısındaki monoklonal antikorun biyolojik ve fonksiyonel özelliklerinin belirlenmesi
ZEYNEP ZÜLFİYE YILDIRIM KELEŞ
Doktora
İngilizce
2023
BiyoteknolojiAcıbadem Mehmet Ali Aydınlar ÜniversitesiMedikal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ÖZGE CAN
- Detecting binding activity of a therapeutic monoclonal antibody targeting vascular endothelial growth factor using surface plasmon resonance
Vasküler endotelyal büyüme faktörünü hedeleyenterapötik monoklonal antikorun bağlanma aktivitesinin yüzey plazmon rezonans ile belirlenmesi
SERİM ERDEM
Yüksek Lisans
İngilizce
2024
Biyoteknolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ ABDULHALİM KILIÇ
