Development of recombinant human antibody library in mammalian cels
Memeli hücrelerinde insan antikor kütüphanesi geliştirilmesi
- Tez No: 621017
- Danışmanlar: PROF. DR. UYGAR HALİS TAZEBAY, DR. AYLİN ÖZDEMİR BAHADIR
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biyoteknoloji, Biology, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2020
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Gebze Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Rekombinant antikorlar, kanser, bulaşıcı ve otoimmün hastalıklar gibi birçok hastalığın tedavisi için devrim niteliğindedirler. Rekombinant antikorlar üretmenin çeşitli yolları vardır, ancak son zamanlarda farklı rekombinant antikor formatlarına sahip kütüphane oluşturma yöntemleri önem kazanmaktadır. Ayrıca, rekombinant antikorların orijini, başarıya ulaşmak için büyük öneme sahiptir. Son zamanlarda yapılan çalışmalar, hayvana dayalı antikorların, insan bağışıklık sistemi uyarımı ve farklı post-translasyonel modifikasyon gibi dezavantajları nedeniyle insan antikorları zaman içinde hayvan antikorlarının yerini almaya başlamıştır. Bu çalışmada, scFv-Fc yapısında rekombinant saf insan antikor kütüphanesinin geliştirilmesi ve antikor kütüphanesinin işlevselliğini arttırmak amacıyla memeli hücresinde üretilmesi amaçlanmştır. İlk önce, Kozak-Peptid dizisini ve Fc bölgesini içeren bir memeli vektörü oluşturulmuştur. Rekombinant antikor genlerini çoğaltmak için ticari bir cDNA kütüphanesi kullanılmıştır. VH ve VL kütüphaneleri, ticari Kütüphane Primer Set ile çoğaltılmıştır. İkinci aşamada PCR reaksiyonlarında, VH ve VL kütüphaneleri linker ile birleştirilmiştir. Üçüncü adımda ise, VH ve VL kütüphaneleri linker ile birleştirilmiş ve scFv kütüphanesi oluşturulmuştur. scFv kütüphanesi, Fc bölgesini içeren pBI-CMV1 memeli vektörüne klonlanmıştır. Daha sonra Fc bölgesi ve scFv kütüphanesini içeren pBI-CMV1 vektörünün CHO-K1 hücrelerine transfeksiyonu gerçekleştirilmiştir. Antikor ekspresyonunun varlığının gösterilmesi için SDS PAGE, Western Blot ve ELISA deneyleri gerçekleştirilmiştir.
Özet (Çeviri)
Recombinant antibodies are revolutionary for the therapy of many diseases, for instance cancer, infectious and autoimmune diseases. There are various ways to generate recombinant antibodies but library construction systems with different recombinant antibody formats have been gaining importance recently. Also, the origin of the recombinant antibodies has great importance to reach success. Recent studies show that animal-based antibodies have begun to displace human antibodies in time due to various disadvantages such as human immune system stimulation and different post-translational modification. This study aimed to develop a naive human recombinant scFv-Fc antibody library and produced it by mammalian cell to increase the antibody libraries' functionality. First, a mammalian vector containing the Kozak-Peptide sequence and Fc region was constructed. A commercial cDNA library was used to amplify recombinant antibody genes. VH and VL libraries were generated by commercial Library Primer Set. In the second stage PCR reactions, VH and VL libraries were combined with linker. At the third step, VH and VL libraries were linked through the linker and the scFv library was constructed. scFv library was cloned into the mammalian vector pBI-CMV1 containing the Fc region. Then transfection of the pBI-CMV1 vector containing the Fc region and scFv library to CHO-K1 cells was performed. SDS PAGE, Western Blot and ELISA experiments were carried out to show the expression of antibodies.
Benzer Tezler
- İnsan rekombinant nano-antikor yapılarından kanser tanısı ve tedavisine yönelik etken madde geliştirilmesi
Development of an active substance from human recombinant nano-antibody constructs for the diagnosis and treatment of cancers
NURŞAH ERSEZEN
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
Gebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Yükleniyor...
- Production of recombinant antibody fragments in bacteria and their development towards medical diagnosis
Rekombinant antikor fragmanlarının bakterilerde üretimi ve tıbbi tanıya yönelik geliştirilmesi
İLKAY KOÇER KULOĞLU
- Development and structural determination of antiangiogenic recombinant antibody structures for cancer treatment
Kanser tedavisine yönelik antianjiogenik rekombinant antikor yapılarının geliştirilmesi ve yapısal tayini
MELİS DENİZCİ ÖNCÜ
Doktora
İngilizce
2022
İstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
Yükleniyor...
- Rekombinant anti-vegf üretilmesi ve nanokonjugatının geliştirilmesi
Preparation of recombinant anti-vegf antibody and development of it's nanoconjugate
DERYA KARAARSLAN
- Monoklonal antikor üretimi amaçlı E.coli hücrelerinde rekombinant insan interlökin-6 protein üretimi ve saflaştırılması
Production and purification of recombinant human interleukin-6 protein in E.coli cells for monoclonal antibody production
HAMİT YILDIZ