Geri Dön

Engineering, production, and characterization of glycosylated and in vivo deglycosylated forms of anti-PA83 in Nicotiana benthamiana

Glikosile ve in vivo deglikosile edilmiş anti-PA83 formlarının Nicotiana benthamiana bitkisinde mühendisliği, üretimi ve karakterizasyonu

PDF İndir

  1. Tez No: 638059
  2. Yazar: DAMLA YÜKSEL
  3. Danışmanlar: PROF. DR. TARLAN MAMEDOV
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2020
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Akdeniz Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Tarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 57

Özet

B. anthracis potansiyel bir ajan olarak kullanıldığından, güvenli, düşük maliyetli, yüksek etkili ve uzun süreli stabiliteye sahip bir şarbon aşısı geliştirebilmek çok önemlidir. Son yıllarda yapılan çalışmalar, bitki bazlı geçici ekspresyon sistemlerinin, yüksek ekspresyon kapasiteleri nedeniyle rekombinant proteinlerin güvenli, hızlı ve ucuz bir şekilde üretilmesini sağlayan umut verici bir teknoloji olduğunu göstermektedir. Monoklonal antikorlarla tedavi hastalığın etkilerini ve patojenin yayılmasını azaltmak için kullanılan kanıtlanmış bir yaklaşımdır. Tam uzunluktaki antikorların çoğu, rekombinant antikor üretme potansiyeline sahip olan memeli hücre kültürü, bakteri, maya, böcekler ve bitki ekspresyon sistemlerinde üretilir. Bitki ekspresyon sistemleri, patojenlere karşı pasif koruma sağlayabilen rekombinant terapötik mAb'ler üretmek için en etkili sistemlerden biridir. Bitki ekspresyon sistemleri, büyük ölçekli üretim, maliyet verimliliği, ölçeklenebilirlik ve güvenlik açısından faydalıdır. Şarbona karşı toksini nötralize etme kapasitesine sahip bitki monoklonal anti-PA83 antikoru, şarbona karşı güvenli, etkili ve düşük maliyetli aşı adayları geliştirmek önemlidir. Son çalışmalarda; bitki ekspresyon sistemi kullanılarak üretilen ve şarbon koruyucu antijene karşı etkili olan anti-PA83 monoklonal antikoru, mutasyon (Mett vd. 2011) ile glikosile ve deglikosile edilen bitkilerde üretildi. Bu tezde, anti-PA83 proteininin deglikosilasyonu için in vivo PNGase F (Mamedov vd. 2012) ve Endo H (Mamedov vd. 2017) deglikosilasyon stratejisi kullanılmıştır. Bu çalışmada, tam uzunlukta anti-PA83 proteinlerinin glikosile ve deglikosile formları, önceki çalışmalarda kodon optimize edilmiş ve Agrobacterium hücrelerine aktarılan HC ve LC genlerinin birlikte ekspres edilmesiyle üretilmiştir. Bu tez çalışmasında üretilen proteinler, amonyum sülfat ile çöktürülüp protein A kolon kromatografisi yardımıyla saflaştırılarak, antikor-antijen etkileşimini, protein stabilitesini ve antikorların toksin nötralize edebilme yeteneğini incelemek amacıyla kullanıldı. Tez sonuçlarına göre, Endo H ile deglikozile edilmiş anti-PA83, diğer anti-PA83 varyantlarından daha fazla stabilite ve aktivite göstermiş olup ve bu durum Endo H ile deglikozile edilmiş anti-PA83'nin iyi bir aşı adayı olarak kullanılabileceğini gösterir.

Özet (Çeviri)

Since B. anthracis has been used as a potential agent, it is crucial to be able to develop an anthrax vaccine that is safe, low-cost, high-effective, and long-term stability. Latest studies show that plant-based transient expression systems are a promising technology that allows safe, rapid and inexpensive production of recombinant proteins due to their high expression capacity. Monoclonal antibody treatment is used as one of the way for limiting the spread and effects of the pathogen. Most of the full-length antibodies are produced in mammalian cell culture, bacteria, yeast, insects, and plant expression systems that have potential to produce recombinant antibodies. Plant expression systems are one of the most effective systems to produce recombinant therapeutic mAbs that can provide passive protection against pathogens. Plant expression systems are beneficial in terms of large-scale production, cost-efficiency, scalability, and safety. The plant produced monoclonal anti-PA83 antibody, which is capable of neutralizing toxin against anthrax, is an important target to develop reliable, effective and cost-effective vaccine candidates against anthrax. In recent studies; anti-PA83 monoclonal antibody produced using plant expression system and effective against anthrax protective antigen was produced in plants glycosylated and deglycosylated by mutation (Mett et al. 2011). In this thesis, in vivo PNGase F (Mamedov et al. 2012) and Endo H (Mamedov et al. 2017) deglycosylation strategy was used for deglycolysis of anti-PA83 protein. In this study, glycosylated and deglycosylated forms of the full-length anti-PA83 proteins were produced by co-expressed with the HC and LC genes that were HC and LC genes which were codon optimized and transferred to Agrobacterium competent cells in previous studies. The produced proteins were used to examine the antibody-antigen interaction the protein stability and toxin neutralizing ability of antibodies. In results of thesis, Endo H deglycosylated anti-PA83 showed more stability and activity than other anti-PA83 variants and this indicates that Endo H deglysocylated anti-PA83 can be used as a good vaccine candidate.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    484572

    Şarbon aşı adayı olarak PA83'ün yeni mutant formunun N. benthamiana bitkisinde tasarlanması, ekspsresyonu, saflaştırılması ve karakterizasyonu

    Engineering, expression, purification and characterization of new mutant form of PA83 in N. benthamiana plants as antrax vaccine candida

    RIFAT ÜNGÖR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    BiyomühendislikAkdeniz Üniversitesi

    Tarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. TARLAN MAMMEDOV

  2. Tez No

    66704

    Ayçiçeği tohum kabuklarındaki antosiyaninlerin ekstraksiyonu ve karakterizasyonu

    Extraction and characterization of anthocyanins in sunflower seed hulls

    AYNUR GÜNENÇ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1997

    Gıda Mühendisliğiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ARTEMİS KARAALİ

  3. Tez No

    380872

    Fotokatalitik hidrojen üretiminde alaşım nanokristallerin aktivitesinin araştırılması

    The investigation of alloyed nanocrystals in photocatalytic hydrogen production

    OSMAN OKAN BİRİNCİ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    Kimya MühendisliğiSelçuk Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Bölümü

    DOÇ. DR. MAHMUT KUŞ

  4. Tez No

    831451

    Katmanlı imalata uygun, biyouyumlu, biyoaktif ve radyoopak termoplastik kompozit malzeme üretimi ve karakterizasyonu

    Production and characterization of bio-compatible, bio-active and radio-opaque thermoplastic polymeric composites for additive manufacturing

    TUĞÇE KILIÇASLAN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Makine MühendisliğiEge Üniversitesi

    Makine Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MEHMET SARIKANAT

  5. Tez No

    334843

    Biyokütleden sıvı ürün üretiminde kullanılacakheterojen katalizörlerin sentezlenmesi

    Synthesizing of heterogeneous catalysts used in the production of liquid products from biomass

    PELİN MISIROĞLU

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    Kimya MühendisliğiAnadolu Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. NEZİHE AZCAN

Geri Dön