Geri Dön

Identifizierung und charakterizierung des allatostatin rezeptors aus drosophila melanogaster, periplaneta americana und carausius morosus

Allatostatin reseptörünün teşhis ve tanimlamasinin drosophila melanogaster, periplaneta americana ve carausius morusus'da yapilmasi

PDF İndir

  1. Tez No: 667426
  2. Yazar: NECLA BİRGÜL
  3. Danışmanlar: PROF. DR. DİETMAR RİCHTER
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2000
  8. Dil: Almanca
  9. Üniversite: Unıversıtat Hamburg
  10. Enstitü: Yurtdışı Enstitü
  11. Ana Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

Somatostatin (SST) Nöropeptitleri G-­‐Proteinlere bağlanan reseptörler (GPCR) aracılığı ile sinyal iletimlerini sağlarlar ve yapısal benzerlikler gösterirler. Bu yapısal benzerlik bütün omurgalı hayvanlarda korunmuştur, ancak omurgasız hayvanlarda Somatostatin veya benzeri reseptörlerin varlığı bilinmemektedir. Doktora tezi kapsamında omurgasız olan sirke sineğinde somatostatin benzeri GPCR'lerin klonlanması ve karakterize edilmesi amaçlanmıştır. GPCR'ler transmembran (TM) bölgelerinde korunmuş oldukları için bu bölgeler farklı canlılarda hizalanmıştır. Hizalanmış dizilerden en korunmuş bölge seçilerek 4 tane dejenere primer tasarlanmıştır. Bu tasarlanan primerler ile farklı kombinasyonlarda PCR yaparak TM bölgeleri çoğaltılmıştır. Çoğaltılan bu bölge Blast'landığında GPCR olan Somatostatin/Galanin ve Opioid reseptörlere %35 kadar benzerlik (homology) göstermiştir. TM bölgelerinden spesifik primerler tasarlanıp RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends) PCR ile 5' ve 3' nün dizileri bulunmuştur. Dizi analizi sonucuna göre son olarak start ve stop kodonuna spesifik primer tasarlanmıştır ve Açık Okuma Penceresi (Open Reading Frame) PCR ile çoğaltılarak uygun bir vektöre klonlanarak nöropeptit/reseptör bağlanma deneyleri yapılmıştır. Bu reseptör daha önce karakterize edilmediği için çeşitli nöropeptitler (SST, Opioid, Substance P, Galanin gibi) kullanarak elektrofizyoloji deneyleri ile bağlanma testleri yapılmıştır, ancak bağlanan hiçbir ligand tespit edilmemiştir. Bu nedenle, sirke sineği kafasından peptit özütü (peptide extract) çıkartarak Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (HPLC) ile fraksiyonlar haline getirilerek elektrofizyoloji deneylerinde native ligand olarak kullanılmıştır. En yüksek aktiviteyi gösteren fraksiyonlar daha yoğun fraksiyon haline getirilip tekrar elektrofizyoloji ile aktivite testlerine tabi tutulmuştur. Aktivitesi yüksek olan fraksiyon pürifiye edilip Kütle Spektrofotometreye (Mass Spec) gönderilmiştir. Çıkan sonuçlara göre“NH2-­‐Ser-­‐Arg-­‐Pro-­‐Tyr-­‐Ser-­‐Gly-­‐Leu/Ileu-­‐COOH”dizisini belirlenmiştir. Bu dizi Blast'landığında kelebeklerde bulunan Allatostatin peptitine benzerlik göstermiştir. Bu diziyi kullanarak peptit üretilmiştir ve elektrofizyoloji deneylerinde ligand olarak kullanılmıştır. Bağlanma afinitesi pikomol (EC50) seviyesinde olduğundan Allatostatin reseptörü (AlstR) olarak adlandırılmıştır. Periplaneta americana'da yine ayne metotlar kullanarak AlstR C reseptörü klonlanmıştır, ancak Carausius morusus' da sadece TM bölgelerinin kısmi dizi analizi bulunmuştur.

Özet (Çeviri)

Die fünf bishcr bekannten Rezeptoren för das Ncuropeptid Soınaıostaıin (SST) könncn auf (lnınd ihrcr strukturelJen .İ\.hnlichkeit und der konscrvicrtcn K,>pplung .an iınraıclluhire sı.•cond ııu:-,•,.seııge.r Syslcmc als cine cigene Proteinfamilie innerbalbdcr groBcn Gnıppe der G­Protcin-gckoppelten Re1.eptoren beır.aı.:htc-t wcrdcn. Sic \Vcİs.en dabei die gtö8te Ah.nlichhkcil zur der familjc der Opioid-Rczcptoren auf. bhem,o wie die dc-n 􀃛ioid-Rczcptoren konnten dic SSTRs in einer g.an1.eo Reibe von vcJSchicdcncu Venebraten ideotili1.ieıt wc;rdcn. bishcr jedoch nichl in Invcrtebraten. Um dic EvoJutjon dieser Re.,.·epı.oıfauıifü; bcsscr zu vcrstchcn, so!lte hier v􀄗uch1 wcrden. tihulidıc Rczcptorcn in lnvenebraten rn kloı:tieren und funktioneU zu charakte-tisieren. Ausgehe!ld von konserviertcn S;qucnz.bercichen innel'halh der 􀄳ieben Tran.smcmbw.nrcgionen wurdcn dcgcncricııe Oligonukleotide konsln.ıicrt. um cDNAs, jje für einen ınöglicben Soınaıostatin-Re:ı.c:.ptot kodicrcıı. aus Dmsoplıila melarnıga:;tı;r zu aınplifızicrcn. Nachdeın zucrst eine paıtielle .Sequenz ı;;rbaltcn wurdc, dic Ahnlichkeiten 7 . .U den G-Prolcin-gckoppcltcn Rcıcplorcn der Veııebraten aufwies., wurdc durch Vcf\vendung der RACIJ.-Tedınik aMc.hlie.BenıJ dic vollstalldigc cDNA-..')equenr. eine..:. neucn Rcıcplors cmllttelt. Die abgeleitete Prolcins.cquenz wies in den Tran..:.rnembı:::ır.ırcgioncn cine Identiüit von 30-35 % sowohl z.u den .Somatostalin- und Opioid-Reui>toren als ;'Jtıch ıu den Galanin-Rczeptoren der Silug􀇈ı.- <•uf. Aufgmnd die.-..er Slnıku.ırcllcn A.bnJichkeit wurde vennutet, da6 der ncuc Rczcptor auch ahnliche Signaltransduktionswege wie die Soımılostatin- und Opioid-Rezeptoren henutr.cn könntc. Da SSTRs in vieleo Fiillen an den GIRK_.Kanal ((i-pmıein g,ııed iııwardly rectifyiııg poıassium chamıel) koppeln und mit dieseın Kamıl in den Xeıwpus-Oozyten koexprimierL und elektrophysiologisch gcmcsscn werden können, wurde djeser Veısııchsansatt. auch file den n&ıen Rezeplor aos Drosoplıila gewiihlt. Jedoch bewirkten ,fü_ 7.unachsl ::ıusgcwiib.ltcn potcntieUen Ugande.n (Galanin, Somatoshılin, Mc.t-Enkaphalin. Lcu-Enkaphalin) keine A.klivicnıng dcs Reı.eptors ir. die􀈺eın Expressjoossy􀉂il􀉄m. D<ıl:cr wurdc vcrsucht, den eodogı.:uı.:n Llgandcn dcs ncucrı Rc1.eptors au􀉕 Oro.ı.oplıila-Kr:,pfen ı.ı.ı isolieren. Cin Pcptid­Rohexttakc .iu􀉠 Omsophila-K.öpfon zcigtc cine staı:ke agonis.tiscll?. Aktivicfu auf Re?.eptor­ex.primicrcndcn XeJıopus-Oocyten; die..:;e /\ktivilaL ı:,•urde in mehren;o Clıronmlographic­Schritten zur H:ouıogcnilfü 􀊍uıfgcrcinigt. Die Sequenz dieses Peptides wurde massenspe.k􀊘roskopisch als Scr-.ı.ı:g-Pro-Tyr-Scc-Phe-Gly-Leu/lleu-NH, bcsıimmt.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    400606

    Sensonsche, mikrobiologiscne, chemische und chemisch-physikalische Untersuchungen zur Haltbarkeit be-und verarbeiteter Sißwasserfische

    Başlık çevirisi yok

    FATMA ARIK

    Doktora

    Almanca

    Almanca

    2000

    BiyolojiLudwıg-Maxımılıans Unıversıtat Munchen

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. FRANZ FIEDLER

    PROF. DR. A. STOLLE

    PROF. DR. MATHIAS VON LUKOWICZ

  2. Tez No

    759282

    Cretaceous-paleogene evolution of the proto-paratethys sea incentral asia: Mechanisms and paleoenvironmental impacts

    Kreidezeit - Paläogene Entwicklung des Proto-Paratethys-Meeres in Zentralasien: Mechanismen und paläoökologische Auswirkungen

    MUSTAFA YÜCEL KAYA

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2020

    Jeoloji MühendisliğiUnıversıtat Potsdam (unıversıty Of Potsdam)

    DR. GUİLLAUME DUPONT-NİVET

  3. Tez No

    1002364

    Identifizierung von Invarianten in Verteilten Hash Tabellen und deren modulare Implementierung

    Dağıtık hash tablolarında değişmezlerin tanımlanması ve modüler uygulamaları

    İRFAN ŞİMŞEK

    Yüksek Lisans

    Almanca

    Almanca

    2009

    Bilgisayar Mühendisliği Bilimleri-Bilgisayar ve KontrolRheınısch-Westfalısche Technısche Hochschule Aachen

    Bilgisayar Bilimleri ve Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. KLAUS WEHRLE

  4. Tez No

    833879

    Interlinguale homographe und fauxamis im sprachenpaar Deutsch – Türkisch eine lexikalisch-semantische analyse

    Almanca ve Türkçe'deki eşyazımlı ve yalancı eşdeğer sözcükler karşılaştırmalı kelime-anlamsal bir analiz

    AYŞE YASEMİN OCAKLI

    Doktora

    Almanca

    Almanca

    2023

    Alman Dili ve EdebiyatıEge Üniversitesi

    Alman Dili ve Edebiyatı Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ FUNDA ÜLKEN

  5. Tez No

    768988

    Emergencyscape: Politics of disaster risk and urban renewalin istanbul

    Acil durum görünümü: istanbul'da afet riski ve kentsel dönüşüm politikası

    KAMİLE BATUR

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2022

    MimarlıkTechnısche Unıversıtat Wıen

    PROF. ABDOUMALİQ SİMONE

Geri Dön