Identifizierung und charakterizierung des allatostatin rezeptors aus drosophila melanogaster, periplaneta americana und carausius morosus
Allatostatin reseptörünün teşhis ve tanimlamasinin drosophila melanogaster, periplaneta americana ve carausius morusus'da yapilmasi
- Tez No: 667426
- Danışmanlar: PROF. DR. DİETMAR RİCHTER
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2000
- Dil: Almanca
- Üniversite: Universität Hamburg
- Enstitü: Yurtdışı Enstitü
- Ana Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 104
Özet
Somatostatin (SST) Nöropeptitleri G-‐Proteinlere bağlanan reseptörler (GPCR) aracılığı ile sinyal iletimlerini sağlarlar ve yapısal benzerlikler gösterirler. Bu yapısal benzerlik bütün omurgalı hayvanlarda korunmuştur, ancak omurgasız hayvanlarda Somatostatin veya benzeri reseptörlerin varlığı bilinmemektedir. Doktora tezi kapsamında omurgasız olan sirke sineğinde somatostatin benzeri GPCR'lerin klonlanması ve karakterize edilmesi amaçlanmıştır. GPCR'ler transmembran (TM) bölgelerinde korunmuş oldukları için bu bölgeler farklı canlılarda hizalanmıştır. Hizalanmış dizilerden en korunmuş bölge seçilerek 4 tane dejenere primer tasarlanmıştır. Bu tasarlanan primerler ile farklı kombinasyonlarda PCR yaparak TM bölgeleri çoğaltılmıştır. Çoğaltılan bu bölge Blast'landığında GPCR olan Somatostatin/Galanin ve Opioid reseptörlere %35 kadar benzerlik (homology) göstermiştir. TM bölgelerinden spesifik primerler tasarlanıp RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends) PCR ile 5' ve 3' nün dizileri bulunmuştur. Dizi analizi sonucuna göre son olarak start ve stop kodonuna spesifik primer tasarlanmıştır ve Açık Okuma Penceresi (Open Reading Frame) PCR ile çoğaltılarak uygun bir vektöre klonlanarak nöropeptit/reseptör bağlanma deneyleri yapılmıştır. Bu reseptör daha önce karakterize edilmediği için çeşitli nöropeptitler (SST, Opioid, Substance P, Galanin gibi) kullanarak elektrofizyoloji deneyleri ile bağlanma testleri yapılmıştır, ancak bağlanan hiçbir ligand tespit edilmemiştir. Bu nedenle, sirke sineği kafasından peptit özütü (peptide extract) çıkartarak Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (HPLC) ile fraksiyonlar haline getirilerek elektrofizyoloji deneylerinde native ligand olarak kullanılmıştır. En yüksek aktiviteyi gösteren fraksiyonlar daha yoğun fraksiyon haline getirilip tekrar elektrofizyoloji ile aktivite testlerine tabi tutulmuştur. Aktivitesi yüksek olan fraksiyon pürifiye edilip Kütle Spektrofotometreye (Mass Spec) gönderilmiştir. Çıkan sonuçlara göre“NH2-‐Ser-‐Arg-‐Pro-‐Tyr-‐Ser-‐Gly-‐Leu/Ileu-‐COOH”dizisini belirlenmiştir. Bu dizi Blast'landığında kelebeklerde bulunan Allatostatin peptitine benzerlik göstermiştir. Bu diziyi kullanarak peptit üretilmiştir ve elektrofizyoloji deneylerinde ligand olarak kullanılmıştır. Bağlanma afinitesi pikomol (EC50) seviyesinde olduğundan Allatostatin reseptörü (AlstR) olarak adlandırılmıştır. Periplaneta americana'da yine ayne metotlar kullanarak AlstR C reseptörü klonlanmıştır, ancak Carausius morusus' da sadece TM bölgelerinin kısmi dizi analizi bulunmuştur.
Özet (Çeviri)
Die fünf bishcr bekannten Rezeptoren för das Ncuropeptid Soınaıostaıin (SST) könncn auf (lnınd ihrcr strukturelJen .İ\.hnlichkeit und der konscrvicrtcn K,>pplung .an iınraıclluhire sı.•cond ııu:-,•,.seııge.r Syslcmc als cine cigene Proteinfamilie innerbalbdcr groBcn Gnıppe der GProtcin-gckoppelten Re1.eptoren beır.aı.:htc-t wcrdcn. Sic \Vcİs.en dabei die gtö8te Ah.nlichhkcil zur der familjc der Opioid-Rczcptoren auf. bhem,o wie die dc-n ioid-Rczcptoren konnten dic SSTRs in einer g.an1.eo Reibe von vcJSchicdcncu Venebraten ideotili1.ieıt wc;rdcn. bishcr jedoch nichl in Invcrtebraten. Um dic EvoJutjon dieser Re.,.·epı.oıfauıifü; bcsscr zu vcrstchcn, so!lte hier vuch1 wcrden. tihulidıc Rczcptorcn in lnvenebraten rn kloı:tieren und funktioneU zu charakte-tisieren. Ausgehe!ld von konserviertcn S;qucnz.bercichen innel'halh der ieben Tran.smcmbw.nrcgionen wurdcn dcgcncricııe Oligonukleotide konsln.ıicrt. um cDNAs, jje für einen ınöglicben Soınaıostatin-Re:ı.c:.ptot kodicrcıı. aus Dmsoplıila melarnıga:;tı;r zu aınplifızicrcn. Nachdeın zucrst eine paıtielle .Sequenz ı;;rbaltcn wurdc, dic Ahnlichkeiten 7 . .U den G-Prolcin-gckoppcltcn Rcıcplorcn der Veııebraten aufwies., wurdc durch Vcf\vendung der RACIJ.-Tedınik aMc.hlie.BenıJ dic vollstalldigc cDNA-..')equenr. eine..:. neucn Rcıcplors cmllttelt. Die abgeleitete Prolcins.cquenz wies in den Tran..:.rnembı:::ır.ırcgioncn cine Identiüit von 30-35 % sowohl z.u den .Somatostalin- und Opioid-Reui>toren als ;'Jtıch ıu den Galanin-Rczeptoren der Silugı.-
Benzer Tezler
- Sensonsche, mikrobiologiscne, chemische und chemisch-physikalische Untersuchungen zur Haltbarkeit be-und verarbeiteter Sißwasserfische
Başlık çevirisi yok
FATMA ARIK
Doktora
Almanca
2000
BiyolojiLudwig-Maximilians Universität MünchenBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FRANZ FIEDLER
PROF. DR. A. STOLLE
PROF. DR. MATHIAS VON LUKOWICZ
- Cretaceous-paleogene evolution of the proto-paratethys sea incentral asia: Mechanisms and paleoenvironmental impacts
Kreidezeit - Paläogene Entwicklung des Proto-Paratethys-Meeres in Zentralasien: Mechanismen und paläoökologische Auswirkungen
MUSTAFA YÜCEL KAYA
Doktora
İngilizce
2020
Jeodezi ve FotogrametriUniversität Potsdam (University of Potsdam)DR. GUİLLAUME DUPONT-NİVET
- Emergencyscape: Politics of disaster risk and urban renewalin istanbul
Acil durum görünümü: istanbul'da afet riski ve kentsel dönüşüm politikası
KAMİLE BATUR
- Interlinguale homographe und fauxamis im sprachenpaar Deutsch – Türkisch eine lexikalisch-semantische analyse
Almanca ve Türkçe'deki eşyazımlı ve yalancı eşdeğer sözcükler karşılaştırmalı kelime-anlamsal bir analiz
AYŞE YASEMİN OCAKLI
Doktora
Almanca
2023
Alman Dili ve EdebiyatıEge ÜniversitesiAlman Dili ve Edebiyatı Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ FUNDA ÜLKEN