Recombinant production and characterization of matrix metalloproteinases- 1 and -13 for treatment of macular corneal dystrophy
Matriks metalloproteinaz -1 ve -13'ün maküler kornea distrofisi tedavisi için rekombinant üretimi ve karakterizasyonu
- Tez No: 685679
- Danışmanlar: DOÇ. DR. GÖKHAN KARAKÜLAH, DR. SİBEL KALYONCU UZUNLAR
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biyomühendislik, Biyoteknoloji, Biology, Bioengineering, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2021
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
- Enstitü: İzmir Uluslararası Biyotıp ve Genom Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 65
Özet
Maküler kornea distrofisi (MKD), stromada anormal, çözünmeyen maddelerin kademeli olarak birikmesi ile karakterize nadir görülen bir genetik hastalıktır. MKD ilerleyen durumlarda görme kaybına neden olabilir. Şu anda, bu hastalık için özel bir tedavi yoktur ve distrofinin tekrarlama riski ve nakille ilişkili riskler nedeniyle kornea nakli kesin bir çözüm değildir. Ekstrasellüler matrikste bulunan matriks metalloproteinaz -1 ve -13 (MMP) enzimleri korneanın yeniden şekillenmesi ve anormal birikimlerin giderilmesi için önemli olup MKD'de azaldığı gösterilmiştir. Bu araştırmanın amacı, korneaya MMP-1 ve MMP-13 enzimlerini uygulayarak MKD için yeni bir terapötik strateji geliştirmektir. MMP-1 ve MMP-13 enzimlerinin üretilmesi bu amaca yönelik ilk adımdır. Rekombinant DNA teknolojisi ile insan MMP-1 ve MMP-13 genleri, pET-17b plazmidine klonlandı. Bakteriyel (E. coli) ekspresyon, kendiliğinden indüklenebilir otoindüksiyon ortamında gerçekleştirilmiştir. MMP-1 ve MMP-13 enzimleri afinite kromatografisi ile saflaştırıldı. Veriler, aktif MMP-1 ve MMP-13 enzimlerinin yeni bir oto-indüksiyon tekniği kullanılarak üretim ortamına salındığını göstermektedir. Üretim parametreleri optimize edilerek umut verici protein verimleri elde edilmiştir. Rekombinant enzimin analizi, enzim aktivite testi ve protein termal stabilite testi ile gerçekleştirilmiştir. Bu çalışma, MMP-1 ve MMP-13 enzimleri için yeni bir üretim yöntemi (oto-indüksiyon) ve karakterizasyon teknikleri üzerine yeni bakış açıları kazandırır. Preklinik özellikleri daha fazla inceledikten sonra, bu enzimin MKD için terapötik bir strateji olarak kullanılması amaçlanmıştır.
Özet (Çeviri)
Macular corneal dystrophy (MCD) is a rare hereditary disease characterized by the accumulation of insoluble aberrant substances in the corneal stroma. MCD may result in a decrease of visual acuity that can lead to blindness. There is still no cure for the disease, and corneal transplantation is possible but it can lead to likelihood of dystrophy recurrence and graft-related risks. Matrix metalloproteinases -1 and -13, which are necessary for corneal reshaping, have been reported to be decreased in MCD. The goal of this study is to provide a new treatment method for MCD by topical application of MMP-1 and MMP-13 to the cornea. MMP-1 and MMP-13 enzymes were being produced using recombinant DNA technology as a preliminary step in this research. Human MMP-1 and MMP-13 genes were cloned into pET-17b plasmid for E.coli expression. Auto-induction media wass used for bacterial expression (E. coli). Using a novel auto-induction methodology, our data indicated that active MMP-1 and MMP-13 enzymes may be generated in E. coli periplasm and released into production media. Promising protein yields were found, and production parameters were further optimized. Purified MMP-1 and MMP-13 enzymes were characterized by biophysical and biochemical tests. Protein thermal shift assay and enzyme kinetics assay were used to examine the profiles of recombinant enzymes. For MMP-1 and MMP-13 enzymes, this work presents a unique autoinduction recombinant production and characterization approach. These enzymes are expected to be used as a treatment method for MCD after completion of proof-of-concept studies.
Benzer Tezler
- Metisilin dirençli Staphylococcus aureus'dan rekombinant lipaz üretimi, karakterizasyonu ve immobilizasyonu
Recombinant lipase production, characterization and immobilization from methicillin resistant Staphylococcus aureus
AİŞE ÜNLÜ
Doktora
Türkçe
2016
BiyokimyaGebze Teknik ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AZİZ TANRISEVEN
PROF. DR. AYHAN ÇELİK
- Development of methods for the production and analysis of novel recombinant proteins with potential anti-infective properties
Potansiyel anti-enfektif özellikleri olan yeni rekombinant proteinlerin üretimi ve analizi için yöntemlerin geliştirilmesi
AMİNE YÜCEKUL
Yüksek Lisans
İngilizce
2023
BiyokimyaKonya Gıda ve Tarım ÜniversitesiMalzeme Bilimi ve Nanoteknoloji Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ GÜLCİHAN GÜLSEREN
- Bacillus subtilis GntR ailesine ait LutR transkripsiyon faktörünün doğrudan kontrolü altındaki genlerin CHIP ve EMSA yöntemleriyle belirlenmesi
Determination of genes under the direct control of GntR-type transcriptional factor LutR in Bacillus subtilis PY79 by CHIP and EMSA methods
MURAT KEMAL AVCI
Doktora
Türkçe
2015
Biyoteknolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AYTEN KARATAŞ
- Recombinant production and characterization of a novel N-glycosidase (EndoBI-2) from Bifidobacterium longum subsp. infantis 157F
Recombinant production and characterization of a novel n-glycosidase (EndoBI-2) from Bifidobacterium longum subsp.infantis 157F
HATİCE DUMAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2022
BiyolojiÇanakkale Onsekiz Mart ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SERCAN KARAV
- Recombinant production and characterization of serine protease enzyme from Virgibacillus sp. AGTR strain using site directed mutagenesis
Virgibacillus sp. AGTR suşundan izole edilen serin proteaz enziminin bölgeye yönelik mutagenez yöntemi kullanılarak rekombinant üretimi ve karakterizasyonu
EVRİM KAPUCU
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
Biyokimyaİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NEVİN GÜL KARAGÜLER
- Recombinant production and characterization of chitinase enzyme from Pseudomonas mandelii KGI_MA19
Pseudomanas mandelii KGI_MA19 organızmasına ait kitinaz enziminin rekombinant üretimi ve karakterizasyonu
EMİNE TUĞÇE SARAÇ CEBECİ
Yüksek Lisans
İngilizce
2022
Biyoteknolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NEVİN GÜL KARAGÜLER