Patojen Clostridium perfringens nöraminidaz enzimi monoklonal antikor ve tanı kiti geliştirme çalışmaları
Monoclonal antibody and diagnostic kit development studies for pathogen Clostridium perfringens neuraminidase enzyme
- Tez No: 723854
- Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ DİLARA AKÇORA YILDIZ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoloji, Biyoteknoloji, Mikrobiyoloji, Biology, Biotechnology, Microbiology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2022
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Burdur Mehmet Akif Ersoy Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 121
Özet
Clostridium perfringens insan ve hayvanların enterik sisteminin doğal bir parçası olan, belirli koşullar altında hızla çoğalan ve çok sayıda toksin üreten önemli bir patojendir. Ortaya çıkacak olan patojenitenin tipi ve şiddeti, bakteri tarafından üretilen toksinlerle yakından ilişkilidir. Patolojilerinin hızlı seyretmesi, ciddi ekonomik kayıplara yol açması ve ölümle sonuçlanabilmesi ise etmenin hızlı tanısını önemli kılmaktadır. Nöraminidazlar, bütün C. perfringens suşları tarafından üretilen, hem bakteri metabolizmasında hem de virülansında işlev gören, patojeniteye elverişli koşullarda ise üretimi arttırılan bir toksin grubudur. Bu doktora tez çalışmasında, C. perfringens nöraminidazlarını tanıyabilecek monoklonal antikorların hibridoma tekniği kullanılarak geliştirilmeye çalışılması ve üretilebilecek antikorlar ile nöraminidaz aracılı C. perfringens tanısının incelenmesi amaçlanmıştır. Ayrıca, başarılı monoklonal antikor üretimi halinde, C. perfringens için ELISA tanı kiti prototiplerinin oluşturulması da hedeflenmiştir. Çalışmalar sonucunda 26 hibrit hücresi elde edilmiş, bunlardan seçilen prototip adaylarının antikorları ise, geniş ölçekte üretilmiş, saflaştırılmış ve tiplendirilmiştir. Bu antikorların kullanıldığı, sandviç ELISA tekniğine dayanan sahada C. perfringens tanısı denemeleri ve C. perfringens tanı kiti prototiplerinde ise başarı elde edilememiştir. Western blot tekniği kullanılarak yapılan ek incelemeler üretilen 1C7, 3C5 ve 5A9 monoklonal antikorlarının NanI'ya özgün olduğunu, çalışmalar sırasında kullanılan ticari nöraminidaz ürününün safsızlıklar taşıdığını ve bu safsızlıklara karşı da antikor yanıtı geliştiğini göstermiştir. Ek olarak, çalışmalar sırasında tesadüfen sığır serum albüminine yüksek afinite gösteren, IgM tipindeki 4F3 monoklonal antikoru da elde edilmiştir. Sonuçlar, çok yönlü doğrulama yapmanın antikor geliştirme çalışmaları için önemini de ortaya koymaktadır.
Özet (Çeviri)
Clostridium perfringens is an important pathogen that is a natural part of the enteric system of humans and animals, which can divide rapidly and produces a large array of toxins under permissive conditions. The type and severity of its emerging pathogenicity are closely related to these toxins produced by the bacteria. The rapid progression of their pathologies, which may cause serious economic loss and mortality makes rapid diagnosis of C. perfringens crucial. Neuraminidases are a group of toxins produced by all C. perfringens strains, involved in both bacterial metabolism and virulence, and whose production in pathogenic conditions increases. The aim of this doctoral thesis is to try to develop monoclonal antibodies, through hybridoma technique, that can recognize C. perfringens neuraminidases, and to examine the neuraminidase-mediated diagnosis of C. perfringens with these antibodies. In addition, in case of successful production of monoclonal antibodies, it is aimed to create ELISA diagnostic kit prototypes for C. perfringens. As a result of this study, 26 hybrid cells were obtained, of which prototype candidates were selected, antibodies produced in large-scale, purified, and isotyped. However, attempts to diagnose C. perfringens from diseased-animal specimens using these antibodies, and production of a C. perfringens diagnostic kit prototype based on sandwich ELISA technique have not been successful. Further investigations using western blot showed that the 1C7, 3C5 and 5A9 monoclonal antibodies obtained were specific to NanI, the commercial neuraminidase product used during the studies contained impurities and antibody responses developed against these impurities. In addition, an IgM type monoclonal antibody, 4F3, with high affinity for bovine serum albumin was incidentally obtained. These results also demonstrate the importance of multi-faceted validations for antibody development studies.
Benzer Tezler
- Sığla yağının (liquidambar orientalis) kommensal ve patojen bağırsak bakterileri üzerine etkileri
Effects of sigla storax (liquidambar orientalis) on commensal and pathogenic intestinal bacteria
MERVE ASLAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
FizyolojiBurdur Mehmet Akif Ersoy ÜniversitesiFizyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AHU DEMİRTAŞ
- Sığır ve tavuk kıymalarındaki Clostridium perfringens varlığı ve kontaminasyon düzeyinin belirlenmesi
Detection of presence and contamination level of C. perfringens in chicken and beef mince
GÖZDE ERŞAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2011
Besin Hijyeni ve TeknolojisiAfyon Kocatepe ÜniversitesiBesin Hijyeni ve Teknolojisi Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. ŞEBNEM PAMUK
- Kesimhanelerdeki sığır karkaslarında clostridium perfringens'in varlığı ve moleküler tiplendirilmesi
Occurence and molecular typing of clostridium perfringens on cattle carcasses at slaughterhouses level
MERİÇ PELİN TUNALI GÖKALP
Doktora
Türkçe
2018
Veteriner HekimliğiAnkara ÜniversitesiGıda Hijyeni ve Teknolojisi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ÖZLEM KÜPLÜLÜ
- İşlenmiş su ürünlerinde bazı patojen mikroorganizmaların araştırılması
Investigation of some pathogen microorganisms in processed seafood
İBRAHİM ENDER KÜNİLİ
Yüksek Lisans
Türkçe
2010
Su ÜrünleriÇanakkale Onsekiz Mart ÜniversitesiSu Ürünleri Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. FATMA ARIK ÇOLAKOĞLU
- Erzurum'da tüketime sunulan tavuk etlerinin bazı patojen bakteriler yönünden incelenmesi
Investigation of some pathogenic bacteria of chicken meat presented for sale in Erzurum
SERAP KILIÇ ALTUN
Doktora
Türkçe
2013
Veteriner HekimliğiAtatürk ÜniversitesiGıda Bilimi ve Teknolojisi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MUSTAFA ATASEVER