Meme kanseri hücrelerinde TWIST1 transkripsiyon faktörü hedef genlerinin transkriptom analizi ile belirlenmesi
Identification of TWIST1 transcription factor target genes in breast cancer cells by transcriptome analysis
- Tez No: 742730
- Danışmanlar: DOÇ. DR. SURAY PEHLİVANOĞLU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Meme kanseri, TWIST1, Transkriptom analizi, Ġntegrin yolağı, Breast cancer, TWIST1, Transcriptome analysis, Integrin patway
- Yıl: 2022
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Necmettin Erbakan Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 71
Özet
Meme kanseri, Dünya‟da kadınlar arasında yaygın görülen multifaktöriyel bir hastalıktır. Kansere bağlı ölümlerin büyük çoğunluğu, metastaza bağlı olarak meydana gelmektedir. Günümüzde kanser metastazının hücrelerin epitelyal-mezenkimal transisyon (EMT) süreci ile baĢladığı bilinmektedir. Bu sürecin temel tetikleyicilerinden biri, TWIST1 transkripsiyon faktörüdür. Bu tez çalıĢmasında endojen olarak TWIST1‟i yüksek düzeyde ifade eden metastatik MDA-MB-231 meme kanseri hücrelerinde anti-sense oligonükleotidler yardımı ile TWIST1 baskılanmasını ve buna bağlı olarak değiĢen transkriptom profilini belirlemeyi amaçlandı. Bunun için antisense-TWIST1 cDNA dizisi klonlanmıĢ pcDNA3.1 plazmid vektörü ve kontrol olarak boĢ bir vektörü, hücrelere lipofectamin yardımı ile transfekte edildi. Transfekte edilen hücreler, G418 içeren ortamda kültüre edilerek seçildi. Seçilen tek koloni 3 ay boyunca seçici besiyerinde çoğaltıldı ve protein lizatları elde edildi. Western blot yöntemi kullanılarak TWIST1 baskılanması protein düzeyinde doğrulandı. Söz konusu hücrelerden izole edilen RNA örneklerine ait transkriptom verileri DNBseq platformu aracılığıyla elde edildi. Bu verilerin analiz sonuçlarına göre; 633 adet gen 2-kat ve daha fazla ifade artıĢı gösterirken, 604 adet farklı genin ise 2-kat ve daha fazla azalıĢ gösterdiği saptandı. Bu genler içinde dikkate değer bir çoğunluğunun hücre membranı ve hücre dıĢı komponentler ile iliĢkili olduğu anlaĢıldı. Bu genlerden integrin sinyali ile iliĢkili olan; Ġntegrin beta-8, Ġntegrin-1 binding protein, Ġntegrin alfa-3, Talin-1, Filamin-beta, PAR6-Beta, Fibronektin, Aktinin alfa-1, Kollajen-5A2, Kollajen-4A2, Kollajen-3A1 ve Kollajen-12A1 genleri olası TWIST-1 hedef genleri olarak belirlendi. Seçilen bu genlerin ifade değiĢimleri qRT-PCR yöntemi ile doğrulandı. Buna göre TWIST1‟in baskılanmasına bağlı olarak Ġntegrin beta-8 ve Kollajen-3A1 gen ifadeleri artarken diğerlerinin doğru orantılı olarak azaldığı saptandı. Bu bulgulara göre, TWIST1 transkripsiyon faktörünün Ġntegrin yolağı üzerinde önemli bir regülatör olduğunu ve bu bağlamda önemli bir terapötik hedef olarak değerlendirilebileceği düĢünülmektedir.
Özet (Çeviri)
Breast cancer is a multifactorial disease that is common among women around the world. The majority of cancer-related deaths occur due to metastasis. Today, it is known that cancer metastasis begins with the epithelial-mesenchymal transition (EMT) process of cells. One of the main triggers of this process is the transcription factor TWIST1. In this thesis, it was aimed to determine the suppression of TWIST1 with the help of anti-sense oligonucleotides in metastatic MDA-MB-231 breast cancer cells that endogenously express TWIST1 at a high level and accordingly the changing transcriptome profile. For this, the plasmid vector pcDNA3.1 with cloned antisense-TWIST1 cDNA sequence and an empty vector as a control were transfected into cells with the help of lipofectamine. Transfected cells were selected by culturing in medium containing G418. The selected single colony was grown on selective medium for 3 months and protein lysates were obtained. TWIST1 suppression was confirmed at the protein level using the western blot method. The transcriptome data of the RNA samples isolated from the cells in question were obtained via the DNBseq platform. According to the results of the analysis of these data; It was determined that 633 genes showed a 2-fold or more expression increase, while 604 different genes showed a 2-fold or more decrease. A remarkable majority of these genes were found to be associated with cell membrane and extracellular components. Associated with integrin signal from these genes; Integrin beta-8, Integrin-1 binding protein, Integrin alfa-3, Tallin-1, Filamin-beta, PAR6-Beta, Fibronectin, Actinin alfa-1, Collagen-5A2, Collagen-4A2, Collagen-3A1 and Collagen-12A1 genes were identified as possible TWIST-1 target genes. Expression changes of these selected genes were confirmed by qRT-PCR method. Accordingly, it was determined that Integrin beta-8 and Collagen-3A1 gene expressions increased due to the suppression of TWIST1, while the others decreased in direct proportion. According to these findings, it is thought that the TWIST1 transcription factor is an important regulator on the Integrin pathway and can be considered as an important therapeutic target in this context.
Benzer Tezler
- MDA-MB 231 meme kanseri hücrelerinde TWIST 1 baskılanmasının miRNA düzeyinde etkisinin araştırılması
Investigation of the effect of TWIST 1 suppression on miRNA level in MDA-MB 231 breast cancer cells
AKIN KOL
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
BiyokimyaSelçuk ÜniversitesiTıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. BAHADIR ÖZTÜRK
- MCF-7 meme kanseri hücrelerinde TWIST 1 ekspresyonunun miRNA profili üzerindeki etkisinin araştırılması
Investigation of the effect of TWIST 1 expression on the miRNA profile in MCF-7 breast cancer cells
FADİME KARAMAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
BiyokimyaSelçuk ÜniversitesiTıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. BAHADIR ÖZTÜRK
- FOXM1 transkripsiyon faktörü inhibisyonunun meme kanserinde metastaz üzerine potansiyel etkilerinin incelenmesi
Investigation of potential effects of FOXM1 transcription factor inhibition on metastasis in breast cancer
FUNDA DEMİRTAŞ KORKMAZ
Doktora
Türkçe
2019
Tıbbi BiyolojiGazi ÜniversitesiTıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ABDULLAH EKMEKÇİ
DOÇ. DR. İREM DOĞAN TURAÇLI
- Kültüre edilmiş meme kanseri hücrelerinde ATM,TRIM29, TWIST1 ifadesini kontrol eden moleküler mekanizmaların araştırılması
Understanding transcriptional control mechanisms of the ATM, TRIM29, TWIST1 pathway in cultured breast cancer cells
MUZAFFER DÜKEL
- Sodyum selenit ve paklitaksel kombinasyonunun MCF-7 ve MDA-MB-231 hücre hatlarında emt, oksidatif stres ve apoptoz üzerindeki etkisi
The effects of the combination of sodium selenite and paclitaxel on oxidative stress, apoptosis and EMT in MCF-7 and MDA-MB-231 breast cancer cell lines
TANSU ARIK
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
Biyokimyaİstanbul Medipol ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ ÇAĞRI ÇAKICI