Geri Dön

Hastane kaynaklı klebsiella pneumoniae'ya yönelik inaktif ve rekombinant aşı denemeleri

Inactive and recombinant vaccine trials for hospital acquired klebsiella pneumoniae

PDF İndir

  1. Tez No: 745948
  2. Yazar: AYŞEGÜL İLBAN
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. ASLI SAKMANOĞLU
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji, Infectious Diseases and Clinical Microbiology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2022
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Selçuk Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Mikrobiyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 216

Özet

Hastane kaynaklı enfeksiyonlarda sıklıkla etken olarak izole edilen K. pneumoniae günümüzde toplumsal kökenli enfeksiyonlarda da karşımıza çıkmaktadır. Özellikle çoklu ilaca dirençli suşlarla oluşan enfeksiyonlarda tedavide yaşanan problemler ölüm oranlarının artmasına neden olmaktadır. Giderek artan direnç düzeyleri tedavide altın standart olarak görülen antibiyotiklerin ne derece yetersiz kaldığını göstermektedir. Tedavideki sıkıntılara bağlı artan ölüm oranları immünoterapi ve aşı gibi koruyucu protokolleri ön plana çıkarmaktadır. Bu çalışmada 2019 yılında Konya Numune Hastanesi Yoğun Bakım Ünitesinde tedavi gören hastalardan izole edilen K. pneumoniae izolatlarının fenotipik ve gonotipik özelliklerinin araştırılması, artan antibiyotik direnç düzeylerinin belirlenmesi, yaygın kapsüller tipin belirlenmesi, hipervirulant izolatların tespiti, rekombinant rmpA proteininin elde edilmesi, uygun aşı formülasyonlarının hazırlanarak etkinliklerinin seropotens ve çelınç fare gruplarında değerlendirilmesi amaçlandı. Bu çalışmada, Konya Numune Hastanesi yoğun bakım ünitelerinde 2019 yılında tedavi gören hastalardan izole edilen K. pneumoniae izolatları kullanıldı. Bütün izolatların antibiyotik dirençlilikleri EUCAST sisteminin önerdiği kriterlere uygun olarak yapıldı. İzolatların karbapenamaz ve β-laktamaz enzim aktiviteleri klasik (MBL, MHT ve çift disk sinerjisma) ve moleküler tekniklerle değerlendirildi. İzolatların virulans, kapsüller ve direnç ile ilişkili gen bölgeleri PZR ile gösterildi. Biyofilm oluşturma yetenekleri kalitatif ve kantitatif olarak ölçüldü. İzotatların akrabalıkları RAPD-PZR ile gösterildi. Hipervirulant izolatlar string test, koloni morfolojisi ve rmpA gen varlığının PZR ile gösterilmesi ile tespit edildi. Klasik ve moleküler işlemler sonucunda en uygun aşı suşları belirlendi. Rekombinant olarak rmpA proteinini elde etmek için PZR ile amplifiye edilen gen pET SUMO ekspresyon vektöre klonlanarak E. coli BL21(DE3)'e transforme edildi. İşlemin doğrulanması için string test, koloni morfolojisi, sekans analizi ve PZR teknikleri kullanıldı. Rekombinanat olarak üretilen proteinin değerlendirilmesinde SDS-PAGE ve Western Blot testleri kullanıldı. Hazırlanan antijenler MontanideTM IMS 3012 VG, Complete Freund's Adjuvant ve Aluminyum Hidroksit Jel (Al(OH)3) ile kombine edildi ve yedi farklı aday aşı elde edildi. Sonuçlar hali hazırda K. pneumoniae için ticari bir aşı bulunmaması nedeni ile Al(OH)3 ile hazırlanan inaktif aşı formülasyonu, negatif kontrol ve hiperimmunizasyon ile elde edilen pozitif kontrol gruplarına ait sonuçlar ile karşılaştırıldı. Hazırlanan aşıların etkinliklerinin karşılaştırmasında çelınç ve ELISA teknikleri kullanıldı. Antibiyotik sınıflandırmalarına göre kaynaklar değerlendirildiğinde bronş ve yara kaynaklı izolatların ExDR ve PDR oranlarının diğer izolatlara göre daha yüksek olduğu belirlendi. Bu direncin oluşmasında GSBL, MHT ve MBL enzim aktivitelerinin (p

Özet (Çeviri)

K. pneumoniae, which is often isolated as a causative agent in hospital-acquired infections, is also encountered in community-acquired infections nowadays. Especially in infections caused by multi-drug resistant strains, problems in treatment cause an increase in mortality rates. The increasing resistance levels show the inadequacy of antibiotics, which are considered the gold standard for the treatment. The increasing mortality rates due to problems in the treatment highlight preventive protocols such as immunotherapy and vaccines. The aim of this study was to investigation of the phenotypic and gonotypic characteristics of K. pneumoniae isolates isolated from patients treated in the Intensive Care Unit of Konya Numune Hospital in 2019, determination of increasing antibiotic resistance levels, determination of common capsule type, detection of hypervirulent isolates, obtaining recombinant rmpA protein, preparation of appropriate vaccine formulations and evaluate their efficacy in seropotens and celinc mouse groups. In this study, K. pneumoniae isolates from patients treated in intensive care units of the Konya Numune Hospital in 2019 were used. The antibiotic resistance of all the isolates was determined in accordance with the criteria suggested by the EUCAST system. Carbapenemase and β-lactamase enzyme activities of the isolates were evaluated by classical (MBL, MHT and double-disc synergism) and molecular techniques. The gene regions associated with virulence, capsules and resistance of the isolates were demonstrated by PCR. Biofilm forming abilities were measured qualitatively and quantitatively. The relatedness of isolates was demonstrated by RAPD-PCR. Hypervirulent isolates were detected by string test, colony morphology and PCR detection of the presence of the rmpA gene. As a result of the classical and molecular procedures, the most suitable vaccine strains were determined. In order to obtain the recombinant rmpA protein, the gene amplified by PCR was cloned into the pET SUMO expression vector and transformed into E. coli BL21(DE3). In order to verify the process, string testing, colony morphology, sequence analysis and PCR techniques were used. SDS-PAGE and Western Blot tests were used to evaluate the protein produced as recombinant. Prepared antigens were combined with MontanideTM IMS 3012 VG, Complete Freund's Adjuvant and Aluminum Hydroxide Gel (Al(OH)3) and seven different candidate vaccines were obtained. Since, so far, there is no commercial vaccine for K. Pneumoniae, the inactivated vaccine formulation prepared with Al(OH)3 was compared with the results of the negative control and the positive control groups obtained by hyperimmunization. Challenge and ELISA techniques were used to compare the efficacy of the prepared vaccines. When the sources were evaluated according to the antibiotic classifications, it was determined that the ExDR and PDR ratios of bronchial and wound-derived isolates were higher than in the other isolates. It was observed that ESBL, MHT and MBL enzyme activities (p

Benzer Tezler

  1. Tez No

    326318

    Pediatri kliniği servislerinde yatan ve gram-negatif çomak bakteriyemisi olan hastaların klinik ve epidemiolojik değerlendirilmesi

    The clinical and epidemiological evaluation of the patients who have gram-negative bacteremia hospitalized in pediatric clinics.

    BAHAR ÇALIŞKAN

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2012

    Çocuk Sağlığı ve Hastalıklarıİstanbul Üniversitesi

    Çocuk Sağlığı Bölümü

    PROF. DR. NURAN SALMAN

  2. Tez No

    586034

    Beş yıllık idrar kültür sonuçlarının değerlendirilmesi ve izole edilen Escherichia coli suşlarının antimikrobiyal direnç profilleri

    Evaluatuan of the five year urine culture results and antimicrobial suscepbility profiles of E.coli strains from urine

    ELİF DENKTAŞ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    MikrobiyolojiAtatürk Üniversitesi

    Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. OSMAN AKTAŞ

  3. Tez No

    365066

    Pediatri servislerinde yatan vakalarda hastane enfeksiyonlarının epidemiyolojik özelliklerinin 2012-2013 yıllarında prospektif olarak incelenmesi

    A prospective investigation of epidemiology of the nosocomial infections in the pediatric wards in 2012-2013

    CEYHUN CURA

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıSüleyman Demirel Üniversitesi

    Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. METEHAN ÖZEN

  4. Tez No

    440159

    Toplum ve hastane kaynaklı klebsiella pneumoniae suşlarında oxa-48 ve alt türevlerinin konvansiyonel ve moleküler yöntemlerle belirlenmesi

    Determining OXO-48 and its variants with conventional and molecular methods in klebsiella pneumoniae isolates originated from community and hospital

    ARZU UYANIK PARLAK

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    MikrobiyolojiYüzüncü Yıl Üniversitesi

    Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. HÜSEYİN GÜDÜCÜOĞLU

  5. Tez No

    826055

    Hastane kaynaklı klebsiella suçlarında genişlemiş spektrumlu Beta-laktamaz araştırılması

    Investigation of extended spectrum beta-lactamase in hospital-acquired klebsiella chain.

    NEVAL YURTTUTAN UYAR

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2000

    MikrobiyolojiSağlık Bakanlığı

    Klinik Mikrobiyoloji ve Enfeksiyon Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SEBAHAT AKSARAY

Geri Dön