Geri Dön

İnsan β-defensin-2 proteininin Pichia pastoris'te rekombinant üretimi

Recombinant production of human β-defensin-2 protein in Pichia pastoris

PDF İndir

  1. Tez No: 747221
  2. Yazar: ŞEYMANUR ÇOBANOĞLU
  3. Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ AYŞENUR YAZICI
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoteknoloji, Mikrobiyoloji, Biotechnology, Microbiology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2022
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Erzurum Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 77

Özet

Antimikrobiyal peptitler (AMP) 6-100 aminoasit içeren ve canlılar tarafından üretilebilen genelde katyonik, hidrofobik, lizin ve arjinin aminoasitleri açısından zengin olan kısa peptidlerdir. İnsan beta defensin-2 (hBD-2), düşük molekül ağırlıklı, sistein açısından zengin katyonik özellik içeren, epitel hücrelerinde enfeksiyon durumunda üretimi artan antimikrobiyal bir peptidtir. Pichia pastoris ökaryotik protein üretimi için kullanılabilen yüksek ifade, indüklenebilirlik, ökaryotlara yakın glikolizasyon mekanizması gibi avantajlara sahip ekspresyon sistemidir. Bu tez çalışmasında, FaDu (ATCC® HTB-43™) hücre hattı Pseudomonas aeruginosa (ATCC 10145) bakterileri ile indüklenmiş ve RNA izolasyonu yapılmıştır. Bu RNA'lardan cDNA sentezi yapılmış ve özgün primerler kullanılarak hBD-2 polimeraz zincir reaksiyonu ile çoğaltılmıştır. Elde edilen hBD-2'nin önce pGEM-T easy vektörüne alt klonlaması yapılmıştır. Ardından pPICZαA vektörüne klonlaması yapılarak elektroporasyon yöntemi ile P. pastoris X-33 hücrelerine transforme edilmiştir. hBD-2 peptidinin, elde edilen rekombinant P. pastoris'te AOX promotörü kontrolünde 30 ℃'de 96 saat boyunca üretimi agar difüzyon testi, qRT-PCR, SDS-PAGE ve western blotlama yöntemleri kullanılarak izlenmiştir. Sonuçta, hBD-2 peptidinin 30 ℃, 150 rpm'de ve %2 metanol indüklemesi ile 96 saatte üretiminin gerçekleştiği tespit edilmiştir. Elde edilen fonksiyonel özelliklerini koruyan hBD-2 peptidi terapötik amaçlar için kullanılabilir.

Özet (Çeviri)

Antimicrobial peptides (AMP) are short peptides containing 6-100 amino acids. It can be produced by living organisms, generally rich in cationic, hydrophobic, lysine and arginine amino acids. Human beta defensin-2 (hBD-2) is an antimicrobial peptide with low molecular weight, containing cysteine-rich cationic properties, and whose production is increased in case of infection in epithelial cells. Pichia pastoris is an expression system that can be used for eukaryotic protein production with advantages such as high expression, inducibility, and glycosylation mechanism close to eukaryotes. In this study, FaDu (ATCC® HTB-43™) cell line was induced by Pseudomonas aeruginosa (ATCC 10145) and RNA was isolated. cDNA was synthesized from these RNAs and hBD-2 was amplified with polymerase chain reaction using unique primers. The resulting hBD-2 was first subcloned into the pGEM-T easy vector. Then, it was cloned into the pPICZαA vector and transformed into P. pastoris X-33 cells by electroporation. Production of hBD-2 peptide in the obtained recombinant P. pastoris under the control of AOX promoter for 96 hours at 30 °C was monitored using agar diffusion test, qRT-PCR, SDS-PAGE and western blotting methods. As a result, it was determined that the hBD-2 peptide was produced at 30 ℃, 150 rpm and 96 hours with the induction of 2% methanol. The resulting functional active hBD-2 peptide can be used for therapeutic purposes.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    799619

    Sistemik retinoik asit kullanımının dişeti antimikrobiyal savunma mekanizmaları üzerine etkisi

    The effect of systemic retinoic acid use on periodontal antimicrobial defense mechanism

    SAADET NUR ATALAY

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Diş Hekimliğiİstanbul Medipol Üniversitesi

    Periodontoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. NUR BALCI

  2. Tez No

    846274

    The role of oxidative stress factors in the pathophysiology of Ocular Rosacea, analysis of tears and other materials

    Oküler Rosacea patofizyolojisinde oksidatif stres faktörlerinin rolü, gözyaşı ve diğer materyallerin analizi

    NİLÜFER YEŞİLIRMAK

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    BiyokimyaGazi Üniversitesi

    Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NESLİHAN BUKAN

    PROF. DR. JEAN-LOUIS BOURGES

  3. Tez No

    522360

    Development of gene editing strategies for human β-globin (HBB) gene mutations

    İnsan β-globin (HBB) gen mutasyonları için gen düzenleme stratejilerinin geliştirilmesi

    BATUHAN MERT KALKAN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2018

    BiyomühendislikYeditepe Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. FATİH KOCABAŞ

  4. Tez No

    398999

    Streptozotosin ile oluşturulmuş Tip I diyabetli βeta hücrelerinde çinko takviyesinin apoptozis ve insülin salgısına olan etkisi

    The effects of zinc supplementation on antiapoptotic and insulin secretion in β-cell with TYPE-I diabetes mellitus-induced by streptozotocin

    ŞAHİN YEŞİLDAĞ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    Beslenme ve DiyetetikOkan Üniversitesi

    Beslenme ve Diyetetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. TÜRKAN MERDOL

  5. Tez No

    736000

    Prepubertal çocuklarda betatrofin ile nutrisyonel ve metabolik durumun ilişkisi

    The relationship of betatrophin wi̇th nutritional and metabolic status in prepubertal children

    BAHRİYE SEMİZOĞLU

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıBezm-i Alem Vakıf Üniversitesi

    Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AYSEL VEHAPOĞLU TÜRKMEN

Geri Dön