Geri Dön

İn vitro enflamasyon modelinde hiperpolarizasyon ile aktive olan siklik nükleotid kapılı (HCN) kanalların moleküler düzeyde araştırılması

Investigation of hyperpolarization-activated cyclic nucleotid-gated (HCN) channels in vitro inflammation model at molecular level

PDF İndir

  1. Tez No: 756133
  2. Yazar: YEŞİM CİVİL ÜRKMEZ
  3. Danışmanlar: PROF. DR. BAHATTİN AVCI
  4. Tez Türü: Tıpta Uzmanlık
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2022
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Ondokuz Mayıs Üniversitesi
  10. Enstitü: Tıp Fakültesi
  11. Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Tıbbi Biyokimya Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 100

Özet

Amaç: Çalışmamızda nöroenflamasyon ve nörodejenerasyonda ekspresyonlarının değiştiği bilinen hiperpolarizasyonla aktive olan siklik nükleotid-kapılı (HCN) kanalların oluşturduğumuz enflamasyon modelinde makrofaj ile endotel hücre hatlarındaki ekspresyon düzeylerinin incelenmesi amaçlandı. Yöntem: Çalışmamızda HUVEC ve RAW hücre hatları kullanıldı. Hücrelere 1µg/ml Lipopolisakkarit (LPS) uygulandı. Altı saat sonra hücre vasatları alındı. TNF-α, IL-1, IL-2, IL-4, IL-10 konsantrasyonları ELISA yöntemiyle ölçüldü. LPS uygulaması sonrası hücre vasatları 24 saat boyunca hücrelere çapraz olarak uygulandı. HCN1/HCN2 protein düzeyleri Western-Blot yöntemiyle belirlendi. HCN-1/HCN-2 gen ekspresyonları RT-qPCR yöntemiyle belirlendi. Bulgular: Enflamasyon modelinde RAW hücre vasatında kontrole kıyasla TNF-α, IL-1 ve IL-2 seviyelerinde anlamlı artış gözlendi. IL-4 seviyesinde anlamlı fark görülmezken, IL-10 seviyesinde anlamlı azalma olduğu gözlendi. HUVEC hücre vasatında TNF-α düzeyinde anlamlı artış gözlenirken, diğer sitokinlerde fark gözlenmedi. Enflamasyon modelimizde HUVEC hücrelerinde HCN1 gen ekspresyonunda kontrol grubuna göre 8,44 kat anlamlı artış gözlendi. HCN2 gen ekspresyonunda anlamlı değişim gözlenmedi. RAW hücrelerinde HCN1 gen ekspresyonunda kontrole göre 6,71 kat anlamlı artış gözlendi. HCN2 ekspresyonundaki değişim istatistiksel olarak anlamlı değildi. Western-Blot analizinde HUVEC hücrelerinde LPS grubunda kontrole göre HCN1 düzeyinde istatistiksel olarak anlamlı artış gözlenirken; HCN2 düzeyinde anlamlı artış gözlenmedi. RAW hücrelerinde LPS grubunda kontrole göre HCN1 düzeyinde istatistiksel olarak anlamlı artış gözlenirken; HCN2 düzeyinde anlamlı artış gözlenmedi. İmmunfloresan incelemede HUVEC ve RAW hücrelerinde HCN1 ve HCN2 proteinlerinin hücre membranındaki ekspresyonunun LPS grubunda kontrol grubuna göre arttığı gözlendi. Tartışma ve Sonuç: Enflamasyon modelinde RAW ve HUVEC hücrelerinde HCN1 gen/protein ekspresyonları artarken, HCN2 gen/protein ekspresyonlarında anlamlı değişiklik gözlenmedi. Elde ettiğimiz veriler endotel ve makrofajlarda HCN1 alt tipinin hakim olduğunu ve enflamasyonda kritik rol oynayabileceğini düşündürmektedir.

Özet (Çeviri)

Aim: In our study, we aimed to create an inflammation model in endothelial and macrophage cell lines and to examine the changes in the expression of hyperpolarization activated cyclic nucleotide gated (HCN) channels at the molecular level. Material and Method: HUVEC and RAW cell lines were used in our study. 1µg/m LPS was applied to the cells. Cell media were taken six hours later. TNF-α, IL-1, IL-2, IL-4, IL-10 concentrations were measured by ELISA method. Cell media were cross-applied to cells for 24 hours after LPS. HCN1/HCN2 protein levels were determined by Western-Blot method. HCN-1/HCN-2 gene expressions were determined by RT-qPCR method. Results: In the inflammation model, a significant increase in TNF-α, IL-1 and IL-2 levels was observed in RAW cell media compared to the control. While no significant difference was observed in IL-4 level, a significant decrease was observed in IL-10 level. While a significant increase in TNF-α level was observed in HUVEC cell medium, no difference was observed in other cytokines. In our inflammation model, an 8,44 fold increase in HCN1 gene expression was observed in HUVEC cells compared to the control group. No significant change was observed in HCN2 gene expression. 6,71 fold increase in HCN1 gene expression was observed in RAW cells compared to the control. The change in HCN2 expression was not statistically significant. In the Western-Blot analysis, a statistically significant increase in HCN1 level was observed in the LPS group in HUVEC cells compared to the control; no significant increase in HCN2 level was observed. While a statistically significant increase in HCN1 level was observed in the LPS group in RAW cells compared to the control; no significant increase in HCN2 level was observed. In immunofluorescence examination, it was observed that the expression of HCN1 and HCN2 proteins in the cell membrane of HUVEC and RAW cells increased in the LPS group compared to the control group. Discussion and Conclusion: While HCN1 gene/protein expressions were increased in RAW and HUVEC cells in the inflammation model, no significant change was observed in HCN2 gene/protein expressions. Our data suggest that the HCN1 subtype is dominant in endothelium and macrophages and may play a critical role in inflammation.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    88569

    Behçet hastalığında nötrofil fonksiyonlarına nitrik oksit donör ve analoglarının etkisi

    Başlık çevirisi yok

    GÜL ATALAY

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    1999

    GastroenterolojiMarmara Üniversitesi

    İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. HANER DİRESKENELİ

  2. Tez No

    906735

    Fruktozla indüklenen hipertansif sıçan modelinde nöroinflamasyon ve artmış kan basıncı üzerine mikroglial inhibisyonun etkisi

    Effect of microglial inhibition on neuroinflammation and increased blood pressure in fructose-induced hypertensive rat model.

    ABDELRAHMAN HAMAD

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    Eczacılık ve FarmakolojiHacettepe Üniversitesi

    Farmakoloji Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ MELİKE HACER ÖZKAN

  3. Tez No

    574233

    Immunomodulatory potential of human umbilical cord tissue-derived mesenchymal stromal cell (UCX®) exosomes in combination with immunosuppressive 'A151' oligodeoxynucleotide

    İnsan göbek kordonu dokusundan elde edilen mezenkimal kök hücre (UCX®) eksozomlarının immünbaskılayıcı oligodeoksinükleotid A151 ile birlikte immün düzenleyici etkileri

    ÖZLEM BULUT

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2019

    Allerji ve İmmünolojiİhsan Doğramacı Bilkent Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. İHSAN GÜRSEL

  4. Tez No

    556936

    Therapeutic potential of an immunosuppressive oligodeoxynucleotide encapsulated within liposomes on bleomycin-induced mouse model of lung inflammation and fibrosis

    Lipozoma yüklenmiş immünbaskılayıcı bir oligodeoksinükleotidin bleomisin ile farede oluşturulmuş akciğer enflamasyonu ve fibrozu üzerindeki tedavi edici potansiyeli

    GİZEM KILIÇ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2019

    Allerji ve İmmünolojiİhsan Doğramacı Bilkent Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. İHSAN GÜRSEL

  5. Tez No

    132193

    Medulla spinalis iskemi modelinde eritropoetinin siklik adenozin mono fosfat response element binding protein fosforilasyonu ve motor nöron hücrelerine etkisi

    The effect of erythropoietin on the phosphorilation of cyclic adenosine monophosphate response element binding protein and motor neurons in the animal model of medulla spinalis ischemia

    BİROL KABAKCI

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2003

    Göğüs Kalp ve Damar CerrahisiDokuz Eylül Üniversitesi

    Kalp ve Damar Cerrahisi Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ÜNAL AÇIKEL

Geri Dön