İnsan Kemik Morfogenetik Protein 2'nin (BMP2) rekombinant olarak üretilmesi, biyokimyasal karakterizasyonu ve biyolojik aktivitelerinin araştırılması
Recombinant expression, biochemical characterization and biological activities of the Human Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2)
- Tez No: 794635
- Danışmanlar: PROF. DR. İSA GÖKÇE
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyomühendislik, Biyoteknoloji, Genetik, Bioengineering, Biotechnology, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2023
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Tokat Gaziosmanpaşa Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 86
Özet
Kemik Morfogenetik Proteinler (BMP), Transforme Edici Büyüme Faktöreleri β (TBFβ) süperfamilyasına mensup multifonksiyonel büyüme faktörleridir. BMP'ler temelde kıkırdak ve kemik gelişimde önemli rol oynamaktadır. Bu proteinler mezenkimal hücrelerin osteogenik hücrelere farklılaşmasını ve embriyonik ve postnatal dönem hücre proliferasyonunu uyarırlar ve yetişkin dönem kemik homeostasisinde önemli rol oynarlar. İnsan rekombinant BMP2 (rhBMP2) ise, ortopedik tedavilerde ve dişçilik alanında sıklıkla kullanılan kilinik ve ticarî açıdan önemli bir terapötik proteindir. BMP2 proteini E. coli ekspresyon sistemlerinde ifade edildiğinde büyük oranda inklüzyon cisimcikleri şeklinde çözünür olmayan bir forma dönüşerek agregasyona uğramaktadır. Bu çalışmada, rhBMP2 proteininin ilk başta Süperfolder Yeşil Floresan Protein (sfGFP) ile füzyon şeklinde E. coli BL21(DE3) pLysE hücrelerinde ekspresyonu sağlanmıştır. Sonrasında farklı şaperon proteinlerini ifade eden pG-KJE8, pGro7, pKJE7, pG-Tf2 ve pTf16 plazmitleri ile E. coli BL21-AI hücrelerinde ko-ekspresyon gerçekleştirilmiştir. Yapılan ölçümler neticesinde ko-ekspresyon için optimum faydanın sağlandığı tig şaperonu üreten pTf16 plazmiti tercih edilmiştir. Yüksek saflıkta ve doğru katlanmış protein eldesi için ayrıca bazı alternatif yeniden katlama işlemleri uygulanmıştır. Sonuçta sfGFP-rhBMP2 füzyon proteini 6xHis- etkiketi ile nikel bazlı afinite kromatografisi kullanılarak saflaştırılmış ve sonrasında SDS-PAGE yöntemi ile kalitatif analizi yapılmıştır. Optimum koşullarda elde edilip saflaştırılan sfGFP-rhBMP2 proteini insan osteosarkoma-2 (Saos-2) hücreleri üzerinde test edilerek hücre kültürü çalışmaları gerçekleştirilmiştir.
Özet (Çeviri)
Bone Morphogenetic Proteins (BMP) are multifunctional growth factors belonging to the Transforming Growth Factors β (TBFβ) superfamily. BMPs basically play an important role in cartilage and bone development. These proteins are effective in stimulating the differentiation of mesenchymal cells into osteogenic cells. They are also effective in cell proliferation and functions in the embryonic and postnatal period, and in bone homeostasis in the adult period. BMP2 is a clinically and commercially important protein that is frequently used in orthopedic treatments and dentistry. When expressed in E. coli expression systems, the human recombinant BMP2 (rhBMP2) protein transform into an insoluble form, largely in the form of inclusion bodies, than undergo aggregation. In this study, rhBMP2 protein was initially expressed in E. coli BL21(DE3) pLysE cells as a fusion with Superfolder Green Fluorescent Protein (sfGFP). For higher production efficiency, co-expression was performed in E. coli BL21-AI cells with plasmids pG-KJE8, pGro7, pKJE7, pG-Tf2 and pTf16 using a system containing five different chaperone plasmids. As a result of the measurements, the pTf16 plasmid, which produces the tig chaperone with optimum benefit for co-expression, was preferred. Alternative refolding processes were also applied to obtain a high purity and correctly folded product. Ultimately, the sfGFP-rhBMP2 fusion protein was purified with the 6xHis-tag using nickel-based affinity chromatography and then qualitatively analyzed by SDS-PAGE method. Cell culture studies were carried out by testing sfGFP-rhBMP2 protein, which was obtained and purified under optimum conditions, on human osteosarcoma-2 (Saos-2) cell lines.
Benzer Tezler
- Mobil telefon kullanımına bağlı oluşan 900-1800 mhz radyo frekans dalgalarının meydana getirdiği elektromanyetik alanın iliak kanat kemik mineral yoğunluğuna etkisi
The effect of electromagnetic fields on bone mineral density of iliac bone produced by 900-1800 mhz radio frequency waves dependent on cellular phone usage
BEŞİR ANDAÇ AKSOY
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2006
Ortopedi ve TravmatolojiSüleyman Demirel ÜniversitesiOrtopedi ve Travmatoloji Ana Bilim Dalı
PROF.DR. NEVRES HÜRRİYET AYDOĞAN
- Melatonin ile kombine D vitamini'nin zoledronik asit uygulanmış osteoblastlar üzerine etkilerinin in vitro olarak incelenmesi
Evaluation the effects of melatonin combined vitamin D on zoledronic acid treated osteoblast in vitro
MELEK KOLTUK
Doktora
Türkçe
2021
Diş Hekimliğiİstanbul ÜniversitesiAğız Diş ve Çene Cerrahisi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BANU GÜRKAN KÖSEOĞLU
- İndigo naturalis ekstresinin insan periodontal hücreleri üzerine etkisinin incelenmesi: In Vitro çalışma
Effect of indigo naturalis extract on human gingival fibroblast, periodontal ligament fibroblast and osteoblast cells: An In Vitro study
ASLI AKTAN
Doktora
Türkçe
2024
Diş HekimliğiMarmara ÜniversitesiPeriodontoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ÖMER BİRKAN AĞRALI
- İn-vitro ortamda farklı kaynaklardan elde edilen mezenkimal kök hücrelerde adrenerjik reseptörlerin gösterilmesi ve reseptör blokajının farklılaşmaya etkisi
Investigation of adrenergic receptors in mesenchymal stem cells obtained from different sources in vitro and influence of receptor block on differentiation
ERKAN MAYTALMAN
Doktora
Türkçe
2016
Eczacılık ve FarmakolojiÇukurova ÜniversitesiTıbbi Farmakoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FAZİLET AKSU
- Histological and histomorphometric evaluation of the effects of bone morphogenetic protein 2 (BMP 2) and metformin on bone formation in critical size defect models
Kritik boyutlu defekt modellerinde kemik morfogenetik protein 2 (BMP 2) ve metforminin kemik oluşumuna etkilerinin histolojik ve histomorfometrik olarak değerlendirilmesi
ORKUN UYGUN
Doktora
İngilizce
2021
Diş HekimliğiYeditepe ÜniversitesiAğız Diş ve Çene Cerrahisi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AHMET HAMDİ ARSLAN