Serum testosteron düzeyinin lc-ms/ms yöntemi ile validasyonu ve diğer immunolojik yöntemlerle karşılaştırılması
Determination of serum testosterone levels with liquidchromatography-isotope dilution tandem mass spectrometry andcomparision with other immunoassays
- Tez No: 823064
- Danışmanlar: PROF. DR. MUSTAFA METİN YILDIRIMKAYA
- Tez Türü: Tıpta Uzmanlık
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2010
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Sağlık Bakanlığı
- Enstitü: Ankara Numune Eğitim ve Araştırma Hastanesi
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Tıbbi Biyokimya Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 72
Özet
Metot validasyonun amacı seçilen metodun istenen amaca uygun nitelikte (performansta, kalitede) sonuç verdiğini test etmek ve metodun rutin kullanımı sırasında istenen performansı sağlamasının koşullarını belirlemek ve kontrol altında tutmaktır. Kimyasal analizlerde analiz metodunun uygulama performansı birçok faktöre bağlıdır. Bu nedenle ölçüm metodunun çok iyi tanımlanması gerekmektedir. Analiz edilen örneğe, analiz edilen bileşenlerin cinsine ve miktarına bağlı olarak farklı metot kullanmak gerekebilmektedir. Belli bir analiz için çok değişik metotlardan hangisinin kullanılacağı analiz edilen örnek cinsine, analiz edilecek bileşenlerin miktarına, günlük yapılacak analiz sayısına, istenen sonucun kalitesine, metodun uygulama kolaylığına, analiz süresine, analiz maliyetine bağlı olarak yapılacak bir değerlendirme sonucunda belirlenmelidir (1). Bu çalışmada son yıllarada ilgi duyulan bir yöntem olan LC-MS/MS (Liquid chromatography–tandem mass spectrometry) metodu ile serum testosteron düzeyinin validasyon çalışmalarını yapmaktı. Testosteron, öncelikle erkeklerde Leydig hücreleri ve kadınlarda Thecal hücreleri tarafından salgılanan bir potent androjendir. Salgılama, hipofiz bezinden türeyen luteinize hormonu tarafından düzenlenir. Daha az miktarda testosteron, adrenal korteks tarafından salgılanır. Testosteron spermatogenez, iç ve dış cinsel organ gelişimi, erkeklerde ikincil cinsel karakteristikler ve her iki cinsiyette libido kontrolünde kritik rol oynar. Klinik olarak, serum testosteronun ölçülmesi, yetişkinlerde aşırı yada yetersiz androjen üretimi bozukluğu şüphesinde, çocuklarda erken yada gecikmiş ergenliğin ve yeni doğanlarda belirsiz cinsel organların araştırılmasında yararlıdır (2). Florometri, double-isotope derivative, elektron yakalayıcı gaz-likid kromatografi ve kompetitif protein bağlayıcı yöntemlerle serum veya plazma testosteronunu ölçmek için kullanılan erken belirleyici metodların yerini büyük ölçüde, spesifik antiserumlar kullanan immunassayler almıştır (3). Amerikan Patoloji Üniversitesi(CAP) araştırması, enzim (nonizotopik) immunassaylerin sirküle eden testosteron konsantrasyonlarını (hem protein bağlı hem protein bağlı olmayan formlar) ölçmek için en yaygın kullanılan teknik olan RIA'ların yerini aldığını rapor etti (3). Özgül immunassay yöntemler esas olarak numune hazırlama şeklinde, kullanılan antiserumların kalitesinde ve antiserumu üretmekte kullanılan steroid-protein konjugatın yapısında farklılaşır (3). Gaz kromatografi ile kombine mass spektrometri (GC-MS) testosteron ölçümü için referans yöntem olarak devam etmektedir ve sıklıkla rutin immunassay yöntemlerin biaslarını değerlendirmek için kullanılır (3). Likid kromatografi-tandem mass spektrometrinin (LC-MS/MS) düşük testosteron konsantrasyonlarını ölçmek için tercih edilebilecek bir yöntem olduğu ileri sürülmüştür (3). Bir çok laboratuarda serum yada plazma testosteronun analizi, otomatik immünoassay kullanılarak yapılır(4). Ancak, varolan testosteronu ölçen immünoassaylar, düşük hassasiyet, çapraz-reaktivite, sınırlı lineer aralık, metodlar arası zayıf korelasyon gibi bir çok ciddi problemden etkilenir. Immunoassayler özellikle çocuklarda ve kadınlarda, göreceli olarak düşük dolaşım seviyelerindeki testosteronu ölçerken, sınırlı hassasiyet ve kabul edilemez çapraz-reaktivite nedeniyle zayıf kalır ve gerçek pozitif biasa yol açar (4). Bu nedenlerden dolayı labortuvarımızda serum testosteron düzeylerini yeni bir yöntem olan LC-MS/MS (Liquid chromatography–tandem mass spectrometry) metodunu gerekli validasyon deneyleri ile kurarak klinik kullanım için daha hassas sonuçlar elde etmeyi amaçladık.
Özet (Çeviri)
Background: In clinical laboratories, Determination of serum testosterone levels in routine is challenging. Reliable analysis of bioavailable testosterone is difficult. Methods: After liquid-liquid extraction, Shimadzu Prominence LC unit coupled to API 3200 mass spectrometer with atmospheric pressure chemical ionisation was used to quantify serum testosterone levels. Serum testosterone results taken from tandem mass spectrometry were compared with Roche, Beckman and Abbott commercial automated testosterone immunoassays Results: In LC-MS/MS method, linearity for testosterone was 0.005-15.915 ng/mL. Recovery was 97-108% for 0.06-16 ng/mL concentration range. Intraday and inter-day CVs were 6.3,9,7; 2,2,8.7 and 1.3,0.3 for low (0.969 ng/ mL), intermediate (4.816 ng/mL) and high (8.084 ng/mL) testosterone concentrations, respectively. There was a good correlation between commercial immunoassays. In method comparision, agreement was closest with Roche and LCMS/MS method (r=0.9670). Discussion: In contrast to commercial testosterone immunoassays, LC-MS/MS method is a reliable, simple and useful method for clinical laboratory practices.
Benzer Tezler
- Çocuk ve adölesanlarda serum D vitamini bağlayici protein düzeyinin serum D vitamini üzerine olan etkisi
The effect of serum vitamin D-binding protein level on serum vitamin D in children and adolescents
SÜMEYRA AKTEPE
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2022
Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıAtatürk ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HAKAN DÖNERAY
- Gestasyonel diabetes mellitusta serum asprosin düzeylerinin glukoz metabolizması, lipid metabolizması ve steroid hormon profilleriyle ilişkisi
The relationship of serum asprosin levels with glucose metabolism, lipide metabolism and steroid hormone profiles in gestational diabetes mellituus
MEHMET ALPEREN ÜSTÜNER
- Sisplatinle indüklenen testis hasarında melatoninin otofaji yönlendirici etkisinin araştırılması
Investigation of the directing effect of melatonin on autophagy in testicular damage cisplatin-induced
MURAT ÜNSAL
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2021
Histoloji ve EmbriyolojiErciyes ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BİRKAN YAKAN
- Stabil anjina pektorisli erkek hastalarda serum östradiol, testosteron, östradiol / testosteron düzeyinin koroner arter hastalığı ile ilişkisi
Relationsip between serum testosteron, estradiol, estradiol / testosteron levels and coronary artery disease in patients with stabile angina pectoris
ALİ İHSAN SEYHAN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2010
KardiyolojiMersin ÜniversitesiKardiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. DİLEK ÇİÇEK YILMAZ
- Erişkin erkek hastalarda implant osteointegrasyonunun serum testosteron düzeyleri ile ilişkisi
The relationship of implant osseointegration and levels of serum testosterone in male adults patients
ALPTUĞ KENDİRCİ
Doktora
Türkçe
2022
Diş HekimliğiBaşkent ÜniversitesiAğız Diş ve Çene Cerrahisi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. KENAN ARAZ