Geri Dön

Cyprinus carpio L. 1758 (osteichthyes:cyprinidae)'nun pankreas, ince bağırsak ve karaciğer lipaz enzimlerinin saflaştırılması ve bazı biyokimyasal özelliklerinin karşılaştırılması

Purification of lipase from pancreas, intestine and liver in cyprinus carpio L. 1758 (osteichthyes:cyprinidae) and comparition of their some biochemical properties

  1. Tez No: 83752
  2. Yazar: NACİ DEĞERLİ
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. M. ALİ AKPINAR
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Cyprinus carpio, saflaştırma, triaçilgliserol lipaz, balık dokusu, Cyprinus carpio, purification, triacylglycerol lipase, fish tissue
  7. Yıl: 1999
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Cumhuriyet Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 274

Özet

ÖZET DOKTORA TEZİ CYPRINUS CARPIO L. 1758 (OSTEICHTHYES:CYPRTNIDAE)'NUN PANKREAS, İNCEBAĞIRSAK VE KARACİĞER LİPAZ ENZİMLERİNİN SAFLAŞTIRILMASI VE BAZI BİYOKİMYASAL ÖZELLİKLERİNİN KARŞILAŞTIRILMASI Naci DEĞERLİ Cumhuriyet Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Biyoloji Anabilim Dalı Danışman Doç. Dr. M. Ali AKPINAR Bu çalışmada triaçilgliserolleri hidrolizleyen lipaz enzimi Cyprinus carpio L. 1758'nun farklı dokularından saflaştırılmış ve bazı kinetik parametreleri tayin edilmiştir. Lipaz dietilaminoetil (DEAE) selüloz ile iyon değişim, fenil sefaroz ile hidrofobik etkileşim (HIC), Q-sefaroz ile fast flow anyon değişim (FFC) ve hidroksiapatit birlikteliği ile % 20 PEG ile çöktürülmüş sitozolik fraksiyondan saflaştırılmıştır. Bu saflaştırma basamakları sonucunda aktivite boyama tekniğine bağlı esteraz aktivitesiyle birlikte poliakrilamid jel elektroforezlerinde yalnızca bir aktif band görülmüştür. Molekül ağırlıkları sırasıyla pankreatik, incebağırsak ve karaciğer lipazları için denatüre edici etken içermeyen poliakrilamid gel elektroforez (PAGE) koşullarında 59, 60.7 ve 62.7 kDa olarak tayin edilmiştir. Lipaz enzimi trigl i seritler arasında tributrin, nitrofenol esterler arasında ise pNPB'a karşı yüksek lipolitik ve esteraz aktiviteleri göstermiştir. Kinetik analizler sırasıyla pankreas, incebağırsak ve karaciğer lipazları için Vmax= 2.03, 0.33 ve 0.23 jimol.dk“1 ve Km= 5.3X10”4, 2.0X10“4 ve 0. 62x1ü”4 M p-nitrofenil bütürat (pNPB) olduğunu göstermiştir. Üç enzimin optimal sıcaklığı ve kararlılığı 28 °C olarak saptanmıştır. Pankreas ve incebağırsak lipazları için optimal aktivite pH 7.60 da, karaciğer için ise pH 8.10 da saptanmıştır. Tek değerlikli iyonlar yüksek dozda dahi aktivatör iken, iki değerlikli olanların düşük dozlarda aktivatör olduğu saptanmıştır. Diğer yandan ağır metaller aktiviteyi azaltmışlardır. Lipazlar 3-merkaptoetanol (BME) ve dithiothreeritriol (DTT) tarafından inaktive edilmezlerken, sodyum florür (NaF) ve fenil metil sülfonil florür (PMSF) tarafından yüksek dozlarda inhibe olmaktadırlar. Safra tuzu ve iyonik olmayan deterjanlar gibi yüzey aktif bileşenleri düşük dozda düşük inhibisyon etkisi gösterirken, miktara bağlıolarak yüksek dozlarda p-nitrofenil bütürat (pNPB) substratı ile inhibisyon oluşturmuştur.

Özet (Çeviri)

Ill SUMMARY PhD. PURIFICATION OF LIPASE FROM PANCREAS, INTESTINE AND LIVER IN CYPRINUS CARPIO L. 1758 AND COMPARITION OF THEIR SOME BIOCHEMICAL PROPERTIES Naci DE?ERLİ Cumhuriyet University Graduate School of Natural and Applied Sciences Department of Biologoy Supervisor Ass. Prof. Dr. M. Ali AKPINAR In the present study, lipase, an enzyme that hydrolyzes triacylglycerol from different tissues of Cyprinus carpio L., have been purified and some kinetics parameters determined. The lipase were purified by the combination of diethylaminoethyl (DEAE) cellulose anion-exchange, hydrophobic intereaction (HIC) with fenil sepharose, fast flow anion exchange (FFC) with Q-sefaroz, and hydroxyapatite choromatography from cytosolic fraction, precipitated with 20 % polyethylene glycol (PEG). By these purification steps, a single band for active lipase were seen in polyacrylamide gel (PAGE) electrophoresis, associted with esterase activity according to activity staining. Their moleculer weights have been estimated by PAGE under non-denaturing conditions 59, 60.7, and 62.7 kDa for pancreatic, intestinal, and liver lipase, respectively. The lipase showed higher lipoliytic and esterase activity toward tributrin and pNPB among the triglicerit and nitrophenil ester examined. Kinetics analysis indicated that Vmax- 2.03, 0.324, and 0.223 umol.dk.“1 and Km= 5.3x10”*, 2.0x1ü“4, and 0.62x1ü”4 M p-nitrophenyl byturate (pNPB) for pancreatic, intestinal, and liver lipase, respectively. The activity and stability of the three enzymes were found maximum at 28 °C. Optimal activity for lipase occured at pH 7.60 for pancreas and intestinal, 8.10 for liver. Monovalent ions had stimulatory efffect on enzymes activity, even at higher dose, while divalent ions at lower dose. On the other hand activity were reduced heavy metal compound. The lipase were not inactivated B-mercapto ethanol (BME) and dithioerythritol (DTT) but inhibited by natrium fluoride (NaF), phenylmethanesulphonyl fluoride (PMSF) at higher dose of these substances. Surface active compound such as bile salts and non-ionic detergents had little inhibitory effect atIV lower dose, but inhibited lipase activity at higher, in concentration-dependent manner with pNPB substrate.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    123558

    Farklı alanlarda (Apa ve Selevir Baraj Gölü) yaşayan Cyprinus carpio L. (Osteichthyes, Cyprinidae)'nun kas dokusu, yağ asitleri ve kolesterol seviyelerinin incelenmesi

    Investigation of fatty acids and cholesterol levels in muscle tissue of Cyprinus carpio L. (Osteichthyes, Cyprinidae) inhabiting different areas [Apa (Konya) and Selevir Dam Lake (Afyon), Turkey]

    SAİT BULUT

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2002

    BiyolojiGazi Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. CEMAL ÇEVİK

    PROF. DR. KEMAL SOLAK

  2. Tez No

    247014

    İvriz Barajı'ndaki Cyprinus carpio (L., 1758) (sazan) ve Salmo trutta (L., 1758)(alabalık)'nın total yağ asidi bileşiminin mevsimsel değişiminin belirlenmesi

    Determination of the seasonal changes on total fatty acid composition of cyprinus, Cyprinus carpio (L., 1758) and salmo, Salmo trutta (L., 1758) in Ivriz dame

    YÜCEL YAMAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    BiyolojiSelçuk Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. LEYLA KALYONCU

  3. Tez No

    477837

    Effect on levels of plasma total oxidant/antioxidant and total sialic acid of bellis in cyprinus carpio (l. 1758)

    Cyprınus carpıo (l. 1758)'da bellis'in plazma total oksıdan/antıoksidan kapasite ve sialik asit üzerindeki etkisi

    OMAR MAHMOOD MOHAMMED MOHAMMED

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2017

    BiyokimyaGaziantep Üniversitesi

    Biyokimya Bilimi ve Teknolojisi Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. HACİ AHMET DEVECİ

  4. Tez No

    151842

    Kadmiyumun Cyprinus carpio (L. 1758)'da serum parametrelerine etkileri ve doku birikimi

    Effects of cadmium on sera parameters and tissue accumulation in Cyprinus carpio (L. 1758)

    SAHİRE KARAYTUĞ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2004

    BiyolojiÇukurova Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. CAHİT ERDEM

    YRD. DOÇ. DR. BEDİİ CİCİK

  5. Tez No

    425768

    Sazan (Cyprinus carpio L., 1758) avcılığında kullanılan galsama ağlarının seçiciliğine ip kalınlığının etkisinin araştırılması

    The investigation of effect of twine thickness on selectivity of gillnets used carp (Cyprinus carpio L., 1758) catching

    SABRİ ARAS

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    Su ÜrünleriTunceli Üniversitesi

    Su Ürünleri Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. FAHRETTİN YÜKSEL

Geri Dön