Α-glukosidaz ve α-amilaz enzimlerinin, Apis mellifera L. ve çam balından izolasyonu ve saflaştırılması ile bal olgunlaştırıcı enzim aktivitelerinin tayini için analitik yöntem geliştirilmesi
Development of analytical method to determine honey elaborative enzyme activities via isolation and purification of α-glucosidase and α-amylase from Apis mellifera L. and pine honey
- Tez No: 843835
- Danışmanlar: PROF. DR. ECE KÖK YETİMOĞLU
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2023
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Marmara Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Analitik Kimya Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 292
Özet
İnvertaz ve diastaz enzim aktiviteleri balın kalite göstergelerindendir. Bu enzimlerin aktivite tayininde yanlış pozitiflikler raporlayabilen, özel substratların enzimatik hidrolizine dayanan kolorimetrik teknikler kullanılmaktadır. Çalışmamızda, öncelikle bal ve hipofaringeal bezlerden (HPG) invertaz ve diastaz enzimlerinin izolasyonu ve saflaştırılması için yeni bir metodoloji geliştirilmesi hedeflenmiştir. Devamında, saf enzimlerin, HPLC ile balda diastaz/invertaz aktivite ve yabancı enzim tayininde otantik referanslar olarak kullanılması amaçlanmıştır. Bu amaçla, HPG ve bal proteomu sıralı ultrafiltrasyon yaklaşımı ile izole edilmiştir. Sonrasında, hedef enzimler 3 adımlı saflaştırma protokolü ile MPLC'de saflaştırılmıştır. Devamında, saf enzimler yardımıyla HPLC sisteminde aktivite ve yabancı enzim tayin yöntemi geliştirilmiştir. Diastaz ve invertaz yeni izolasyon prosedürüyle sırasıyla 24,3 ve 9 kat zenginleştirilmiştir. Saflaştırma prosesinde, invertaz ham ekstrakta oranla 19,9 kat, diastaz ise 39,2 kat daha saf elde edilmiştir. Geliştirilen HPLC yönteminin validasyonunda, doğrusal (diastaz R2=0,994 ve invertaz R2=0,992), tekrarlanabilir ve tekrarüretilebilir (%RSD0,99), F testi (F=1,04/1,02) ve t testi (t=1,04/1,02) kabul edilebilir istatistiksel sonuçlar üretmiştir. Yeni yöntemle 107 örnekteki %41 oranında yabancı diastaz pozitifliği tespit edilebilmiştir. Yeni yöntem, aktivite tabanlı yöntemlere göre hızlı, tutarlı ve maliyetsiz olup, yabancı orijinli diastaz varlığını da ballarda eş zamanlı görüntüleyebilmektedir.
Özet (Çeviri)
Invertase and diastase enzyme activities are among the quality indicators of honey. Colorimetric assays based on enzymatic hydrolysis of specific substrates are used to determine the activities of these enzymes and they may produce false positive results. Our study primarily aimed to develop a methodology for the isolation and purification of invertase and diastase in honey and hypopharyngeal glands (HPG). Subsequently, it was aimed to use these pure enzymes as authentic references in determination of diastase/invertase activities and foreign enzymes in honey using HPLC. For this, HPG and honey proteome were isolated utilizing sequential ultrafiltration. Then, the target enzymes were purified on MPLC using 3-steps novel purification protocol. HPLC-based activity and foreign enzyme determination method was developed by employing pure enzymes. Diastase and invertase were enriched 24.3 and 9 fold, respectively, utilizing the isolation procedure. As a result of the purification, invertase, and diastase were 19.9 and 39.2 fold purer in comparison to crude extract. According to validation, linear (diastase R2=0.994 and invertase R2=0.992), repeatable and reproducible (%RSD0.99), F-test (F=1.04/1.02) and t-test (t=1,04/1.02) results were statistically acceptable. The 41% foreign diastase positivity percentage in 107 samples could be successfully reported with the new method. The novel method is fast, cost-effective, and accurate compared to activity-based assays, and foreign diastase adulteration can also be monitored simultaneously in honey.
Benzer Tezler
- Su ve etanol ile elde edilen Çin ve Siirt propolis ekstraklarının LC-MS/MS ile karakterizasyonu, antioksidan ve diyabet üzerine etkilerinin belirlenmesi
Başlık çevirisi yok
EDA ÖREN
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
BiyomühendislikÜsküdar ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ SALİH TUNCAY
DOÇ. DR. MESUT KARAHAN
- Sivas'ta yetişen berberis crataegina DC. ve teucrium polium L. türlerinin antidiyabetik, antikanser ve antiepileptik etkilerinin araştırılması
Berberis crataegina DC. and teucrium polium L. species from grown in sivas investigation of antidiabetic, anticancer and antiepileptic effects
MELAHAT HÜRMET
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
BiyokimyaSivas Cumhuriyet ÜniversitesiFarmasötik Biyokimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ÜMİT MUHAMMET KOÇYİĞİT
DR. ÖĞR. ÜYESİ HÜLYA ÖZPINAR
- Obezitenin önlenmesinde gıda uygulamaları: Gıdalarda doğal olarak bulunan yağ ve karbonhidrat sindirim enzim inhibitörleri
Food applications in the obesity prevention: Lipid and carbohydrate digestive enzyme inhibitors found naturally in foods
PINAR ERCAN
Doktora
Türkçe
2016
Gıda MühendisliğiEge ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SEDEF NEHİR EL
- Bisbenzimidazol yapısındaki bileşiklerin sentezi ve biyolojik aktiviteleri ile yapı-etki ilişkilerinin araştırılması
Synthesis of bisbenzimidazole structure compounds and investigation of their biological activity with structure-activity relationship
BURAK METE
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
Eczacılık ve FarmakolojiMersin ÜniversitesiFarmasötik Kimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ÖZTEKİN ALGÜL
- Centaurea amanicola HUB.-MOR. ve centaurea antitauri hayek. (asteraceae) türleri üzerindearaştırmalar
Studies on centaurea amanicola HUB.-MOR. and centaurea antitauri hayek (asteraceae) species
MOHADDESEH NOBARIREZAEYEH
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
Eczacılık ve FarmakolojiAtatürk ÜniversitesiFarmakognozi Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SONGÜL KARAKAYA