Uyarılmış adipoz doku kaynaklı mezenkimal kök hücrelerden elde edilen eksozomların Alzheimer modeli oluşturulmuş SH-SY5Y insan nöroblastoma hücre hattı ve Aβ degradasyonu üzerindeki etkilerinin incelenmesi
Investigation of the effects of exosomes from stimulated adipose tissue-derived mesenchymal stem cells on Alzheimer's modeled SH-SY5Y human neuroblastoma cell line and Aβ degradation
- Tez No: 846877
- Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ GÜLÇİN GACAR
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biyoteknoloji, Nöroloji, Biology, Biotechnology, Neurology
- Anahtar Kelimeler: Mezenkimal kök hücre, Eksozom, Alzheimer hastalığı, Mesenchymal stem cells, Exosome, Alzheimer disease
- Yıl: 2023
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Kocaeli Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kök Hücre ve Doku Yenilenmesi Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 103
Özet
Amaç: Bu tez çalışmasının amacı çeşitli oksidatif stres faktörleri olan H2O2 ve sitokin kompleksi (TNF-α + IL-1β + IFN-γ) ile uyarılan insan adipoz doku kaynaklı mezenkimal kök hücre eksozomlarının, SH-SY5Y insan nöroblastoma hücre hattının nörona farklılaştırılması ile elde edilen Alzheimer hastalığı modelinde Aβ plaklara etkisinin incelenmesidir. Yöntem: İnsan adipoz doku kaynaklı mezenkimal kök hücreler kültüre edildikten sonra H2O2 ve sitokin kompleksi ile ayrı ayrı uyarılarak ultrasantrifüjleme tekniği ile eksozomları elde edilmiştir. Alzheimer modeli; SH-SY5Y hücre hattının belirli faktörlerle muamele edilerek nörona farklılaştırılması ve Aβ1-42 peptidi ile ko-kültür yapılmasıyla elde edilmiştir. Eksozomlar elektron mikroskobu ile karakterize edilmiş, zeta sizer cihazı ile partikül boyutuna bakılmıştır. SH-SY5Y hücre hattının farklılaşması immünositokimya tekniği ile konfokal mikroskopta ve Real Time RT-PCR yöntemi ile gen düzeyinde incelenmiştir. Eksozomların Aβ üzerine etkisi immünositokimya ve ELISA tekniği ile değerlendirilmiştir. Bulgular: Canlılık testi analizleri sonucunda 24 saat süreyle 50 µM hidrojen peroksit ve 48 saat süreyle 20 ng sitokin kompleksinin adipoz doku kaynaklı mezenkimal kök hücrelerin uyarılması için optimum doz olduğu belirlenmiştir. Bu kök hücrelerden elde edilen eksozomların elektron görüntüleri incelendiğinde boyut olarak farklılıklar gözlemlenmiştir. Eksozomların protein miktarı değerlendirildiğinde en yüksek protein konsantrasyonu hidrojen peroksit ile uyarılan grupta görülmüştür. SH-SY5Y hücrelerinin nörona farklılaştırılması çeşitli kimyasallarla gerçekleştirilmiş, gen ekspresyonu analizlerinde kontrole göre farklılaşma belirteci olan NF-L ifadesinde anlamlı derecede artış olduğu görülmüştür. Çeşitli faktörlerle uyarılan kök hücre eksozomlarının Alzheimer hastalığı patolojisinden biri olan Aβ plaklar üzerine etkinliğine bakıldığında en fazla degradasyon sitokin kompleksi ile uyarılmış adipoz doku kök hücre eksozomlarının etkisiyle sağlanmıştır. Sonuç: Hidrojen peroksit ve sitokin kompleksi ile uyarılmış adipoz doku kaynaklı mezenkimal kök hücrelerin eksozomları, uyarılmamış eksozomlara (kontrol) göre, Alzheimer hastalığının önemli bir patolojisi olan Aβ plakların yıkımında etkin bir şekilde rol almıştır. Bu etki sitokin kompleksi grubunda hidrojen peroksit grubuna göre daha şiddetli görülmüştür.
Özet (Çeviri)
Objective: The aim of the study is; understanding the effects of human adipose tissuederived mesenchymal stem cell exosomes stimulated with H2O2 and cytokine complex (TNF-α + IL-1β + IFN-γ), which are various oxidative stress factors, into Aβ plaques in Alzheimer Disease model which obtained by the differentiation of SH-SY5Y human neuroblastoma cell line into neurons Method: After culturing human adipose tissue-derived mesenchymal stem cells, exosomes were obtained by ultracentrifugation technique following the stimulation by H2O2 and cytokine complex. The Alzheimer model was obtained by differentiation of SH-SY5Y cell line into neurons by treatment with certain factors and co-culture with Aβ1-42 peptide. Exosomes were characterized by electron microscopy and particle size was measured with the zetasizer instrument. The differentiation of the SH-SY5Y cell line was investigated by immunocytochemistry technique, confocal microscope and Real Time RT-PCR method at gene level. The effect of exosomes on Aβ was evaluated by immunocytochemistry and ELISA technique. Results: As a result of viability test analysis, 50 µM hydrogen peroxide for 24 hours and 20 ng cytokine complex for 48 hours were determined as the optimum dose for stimulating adipose tissue-derived mesenchymal stem cells. The ultrastructural image analyses of the exosomes obtained from these stem cells were examined, and significant differences in size were observed. When the protein content of exosomes was evaluated, the highest protein concentration was observed in the group stimulated with hydrogen peroxide. Differentiation of SH-SY5Y cells into neurons was performed with various chemicals, and gene expression analysis showed a significant increase in NF-L expression when compared to control. Considering the effectiveness of stem cell exosomes stimulated by various factors on Aβ plaques, which is one of the pathologies of Alzheimer's disease, the most degradation level was achieved by the effect of cytokine complex stimulated adipose tissue stem cell exosomes. Conclusion: Compared to unstimulated exosomes, the exosomes of adipose tissue-derived mesenchymal stem cells stimulated with hydrogen peroxide and cytokine complex was found to play an active role in the reduction of Aβ plaques, which are an important pathology of Alzheimer's disease. This effect was more severe in the cytokine complex group than in the hydrogen peroxide group.
Benzer Tezler
- İnsan adipoz doku ve kemik iliği kaynaklı mezenkimal kök hücrelerin in-vitro koşullarda deneysel apopitoza yanıtları: Karşılaştırmalı çalışma
In-vitro anti-apoptotic ability of mesenchymal stem cells isolated from human bone marrow and adipose tissue: Comparative study
GÖKHAN ERTAŞ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2010
KardiyolojiKocaeli ÜniversitesiKardiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ERTAN URAL
- Sıçanda miyokardiyal iskemi sonrası doku onarımında insan göbek kordonu stroması kaynaklı mezenkimal kök hücrelerin tedavi edici etkisinin araştırılması
Investigating the therapeutic effects of human umbilical cord derived mesenchymal stromal stem cells in tissue repair after myocardial ischemia in rats
ZEYNEP YIĞMAN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2015
Göğüs Kalp ve Damar CerrahisiAnkara ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ALP CAN
- Resistin uyarımı ile vasküler düz kas hücrelerinin proliferasyonu yolağında PLC ve PKC'nin rolü
The role of PLC and PKC in resistin-induced vascular smooth muscle cells proliferation pathway
FATİH UZUNER
Doktora
Türkçe
2016
BiyokimyaAkdeniz ÜniversitesiTıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AKIN YEŞİLKAYA
- Adipoz doku kökenli mezenkimal kök hücrelerin, TLT4 üzerinden pankreas kanseri hücrelerindeki antikanserojenik etkilerinin incelenmesi
Investigation of anticarcinogenic effects of adipose tissue derivedmesenchymal stem cells on pancreatic cancer cells via TLR4
DEMET KAÇAROĞLU
Doktora
Türkçe
2023
OnkolojiSüleyman Demirel ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NİLGÜN GÜRBÜZ
DR. ÖĞR. ÜYESİ SEHER YAYLACI
- AGRP nöronlarının spesifik uyarımının kan lipit profili ve vücut kompozisyonu üzerine etkisinin araştırılması
Investigation of the effect of specific stimulation of AGRP neurons on blood lipid profile and body composition
RUMEYSA ATAYOLU
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
Beslenme ve Diyetetikİstanbul Medipol ÜniversitesiBeslenme ve Diyetetik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ MUHAMMED İKBAL ALP