Geri Dön

İmmobilize edilmiş proteazlarda düşük su içeren organik ortamlarda peptid sentezi

Peptide synthesis catalyzed by modified proteases in low-water organik media

  1. Tez No: 84818
  2. Yazar: YEŞİM YEŞİLOĞLU
  3. Danışmanlar: Y.DOÇ.DR. AYTEN SAĞIROĞLU
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Kimya, Chemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 1999
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Trakya Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 105

Özet

ÖZET Bu çalışmada CNBr ile aktive edilmiş Sepharose CL-6B'de kovalent bağlanma, Amberlite IRA-900 reçinesinde iyonik bağlanma ve Naylon-6, Alümina ve Bentonit'te ^djoj^sjysm__yöntemleri ile tripsin enziminin immobilizasyonlan gerçekleştirildi. Her immobilizasyon sonunda Lowry Yöntemine göre protein tayini yapılarak Alümina'ya immobilize edilen tripsinin, amaçlanan peptidasyon reaksiyonları için uygun olduğu tesbit edildi. Ayrıca, herbir aşamada tripsinin aktivitesi tayini spektrofotometrik metod kullanılarak yapıldı ve tripsin varlığında Benzoil arginin (BA) ve Lösin amid (Leu-NKfe) arasında peptidleşme reaksiyonları gerçekleştirildi. Optimum pH ve optimum sıcaklık çalışmaları yapıldı ve sırası ile pH:7 ve 25°C olarak bulundu. Su içeriği çalışıldı ve enzim için ortamın optimum su içeriğinin % 5 olduğu belirlendi. Çözücü cinsinin belirlenmesi amacıyla yapılan denemelerde BA ve Leu-NIVnin asetonitril(ACN), tetrahidrofuran (THF) veya izo amilalkolle reaksiyonların değişik şekillerde gerçekleştiği gözlendi ve deneylerde asetonitril kullanıldı. Zamanın enzim aktivitesine etkisini belirlemek amacıyla substrat olarak BA ve Leu-NHî kullanılarak 15 ay süreyle aktivite denemeleri yapıldı. Aynı substratlar için tripsine ait Km ve Vmax değerleri sırası ile 2.5xl0"3 M ve 3.35 mM/saat olarak hesaplandı. Ürün analizleri İnce tabaka kromatografisi (TLC), Yüksek Performans Likid Kromatografisi(HPLC) ve İnfrared(IR) ve Kütle(Mass) spektrofotometresi kullanılarak yapılmıştır.

Özet (Çeviri)

n ABSTRACT In this study, the covalent attachment on the Sepharose CL-6B activated by CNBr, the ionic attachment in the Amberlite IRA-900 resin, and the immobilizations of trypsin enzyme on Nylon-6, Alumin and Bentonite were performed by the adsorption methods. It was determined that trypsin immobilized onto Alumin was suitable for the peptidation reactions aimed by determining protein according to the Lowry method at the end of each immobilization. In addition, the determination of the trypsin activity on each stage was carried out by using the spectrophotometric method, and the peptidation reactions between Benzoyl arginine(BA) and Leucin amide(Leu-NH2) were realized in the presence of trypsin. The studies for optimum pH and optimum temperature were carried out, and it was found as pH:7 and 25°C, respectively. The water content was studied, and it was determined that optimum water content of medium was 5% for trypsin. It was observed that reactions of BA and Leu-NHî with acetonitryl, tetrahydrophuran and iso amylalcohol were realized in the different states in the experiments for the purpose of the determination of solvent kind. The activity experiments were carried out by using BA and Leu-Ntt as the substrate for the purpose of the determination of the effect of time on the trypsin activity within 15 months. The values of Km and Vmax were calculated as 2.5xl0"3 M and 3.35 mM/h with respect to trypsin for the same substrates. The product analysis were carried out by using the Thin-layer, High Performance Liquid Chromatography, IR and Mass Spectrophotometers.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    397807

    Development of enzyme-based coating methods for the prevention of bacterial biofilm formation

    Bakteriyel biyofilm oluşumunu engellemeye yönelik enzim bazlı kaplama yöntemlerinin geliştirilmesi

    ABDULLAH SERT

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2014

    Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. NEVİN GÜL-KARAGÜLER

    PROF. DR. MELEK TÜTER

  2. Tez No

    829670

    Proteaz enziminin polivinil alkol içerisine immobilizasyonu

    Immobilization of protease in polyvinyl alcohol

    FATİH MEHMET HASBEK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    BiyoteknolojiÇukurova Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. DENİZ YILDIRIM

  3. Tez No

    815755

    The productıon and pegylatıon of recombinant human granulocyte colony-stımulatıng factor produced ın e. coli

    Rekombinant insan granulosit koloni stimülan faktörünün e. coli'de üretimi ve pegilasyonu

    NAZLI DİLARA ERDOĞDU

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    Biyokimyaİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY

  4. Tez No

    488156

    Investigation of chymotrypsin-poly (acrylic acid) complex activities by fluorometric methods

    Kimyotripsin-poly (akrilik asit) kompleksi aktivitelerinin florometrik yöntemler ile incelenmesi

    SAMA AMER

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2017

    BiyokimyaYıldız Teknik Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. EMİNE KARAKUŞ

  5. Tez No

    488141

    Floresans ömür dağılımı kullanılarak poliakrilik asit-tripsin konjugatı ve serbest tripsinin proteolitik aktivitesindeki değişimlerin incelenmesi

    Investigation of changes in proteolytic activity of polyacrylic acid-trypsin conjugated and free trypsin using fluorescence lifetime distribution

    ÜMMÜGÜLSÜM POLAT

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    BiyokimyaYıldız Teknik Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. EMİNE KARAKUŞ

Geri Dön