Ökaryotlarda ağır metal direncinden sorumlu metalotiyonin geninin belirlenmesi
Identification of metalotiyonin gene, responsible from heavy metal resistance, in eucaryotes
- Tez No: 86452
- Danışmanlar: PROF. DR. ENGİN BERMEK
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyofizik, Biophysics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 1999
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyofizik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 48
Özet
ÖZET: Metalotiyoninler (MTler) sisteyince zengin, düşük molekül ağırlıklı ağır metal direncinden sorumlu proteinlerdir. Mayadan memelilere kadar çok çeşitli organizmalarda mevcutturlar. Metalotiyonin proteini ilk olarak 1957 yılında at böbreği korteksinde doğal olarak kadmiyum bağlanmasından sorumlu protein olarak tanımlanmıştır. MTler, ökaryotlarda glukokortikoid hormonuyla, ağır metallerle ve çeşitli büyüme hormonlarıyla indüklenirler. Bu tez çalışmasında, ökaryotik canlılara model sistem olarak tek hücreli ökaryotik bir canlı olan Dunaliella viridis yeşil algi kullanıldı. İlk olarak D.vf/idisTm büyüme koşullan optimize edildi. En iyi büyüme 25 °C sıcaklıkta, ışık atanda çalkalanmak suretiyle sağlandı. Alg hücrelerinden protein özütlenmesinde çeşitli kimyasal ve fiziksel yöntemler denendi ve en verimli parçalamanın hücreleri sıvı azot ile muamele ederek sağlandığı belirlendi. Bunu takiben farklı bakır derişimlerinde yetiştirilen alg hücrelerinde metalotiyoninin mRNA ve protein düzeyinde indüksiyonu incelendi. Farklı bakır derişimlerinde yetiştirilen alglerden izole edilen proteinler SDS-PAGE'de ayrıştırıldıktan sonra Western emdirimi ile indüklenen alg metalotiyonin proteini insan metalotiyonin antikoruyla belirlendi. Bunun yanısıra özütlenen proteinler denature etmeyen PAGE ile aynşunlıp, bakır iyonu ile etkileşerek kahverengi renk verdiği bilinen dietil-ditiyo karbomik asit ile boyandığında bakır bağlayan nativ MT proteinine ait kahverengi bant gözlendi. mRNA düzeyinde belirlemek için yapılan otoradyografide ise radyoaktif işaretli Douglas fir metalotiyonin geninin alg metalotiyonin mRNA'sıyla hibritlendiğini gösteren bulgular elde edildi. 35
Özet (Çeviri)
SUMMARY: Metallothioneins (MTs) are cysteine-rich, low-molecular weight proteins which are responsible for heavy metal resistance in organisms. They appears in very different organisms including yeast to mammals. MT was discovered in horse kidney cortex in 1957, as a cadmium-binding protein responsible for the natural accumulation of cadmium in this tissue. MTs are induced by glucocorticoid hormone, heavy metals and several growth hormones in eucaryotes. In this study; as a model organism, Dunaliella sriridis green alga, a single- celled eucaryotic organism was used. At first, growth conditions of D. viridis was optimised. The most appropriate growth was obtained by continous shaking under light at 25 °C. Different chemical and physical methods were tried to isolate proteins from alga cells. The most efficient lysis was obtained by treating cells with liquid nitrogen. After that, induction of metallothionein at tine level of protein and mRNA was studied in alga cells which were grown at different copper concentrations. Proteins isolated from cells which were grown at different copper concentrations were analyzed by SDS-PAGE. Then, induced MT were detected by using human MT antibody. In addition, isolated proteins were analyzed by non- denature PAGE and treated with diethyldithio-carbamic acid, which gives brown color when binds to copper ion. After treatment, detected brown colored band showed that this band belongs to native MT protein binding copper. Autoradiography results showed that radioactively labelled Douglas fir MT gene hibridized witti alga MT mRNA. 36
Benzer Tezler
- Molecular characterization of a boron-resistant yeast mutant obtained by evolutionary engineering
Evrimsel mühendislik ile elde edilmiş bor stresine dirençli mutant mayanın moleküler karakterizasyonu
MUSA TARTIK
Yüksek Lisans
İngilizce
2013
Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesiİleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ZEYNEP PETEK ÇAKAR
- Probing the arrangement of the conformational ensembles of DnaK
DnaK nükleotit bağlanma domeninin oluşturduğu konformasyonal popülasyonların araştırılması
MELİS KORKMAZ
Yüksek Lisans
İngilizce
2018
Biyoteknolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. GİZEM DİNLER DOĞANAY
- Schizosaccharomyces pombe'de ağır metal metabolizması üzerine çalışmalar
Studies on the heavy metal metabolism in schizosaccharomyces pombe
GÖKHAN AKMAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2002
Biyolojiİstanbul ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AYŞEGÜL TOPAL SARIKAYA
- Evolutionary engineering of Saccharomyces cerevisiae for improved industrial properties
Yönlendirilmiş evrim yöntemiyle Saccharomyces cerevisiae'nin endüstriyel açıdan önemli özelliklerinin geliştirilmesi
TUĞBA SEZGİN
Doktora
İngilizce
2011
Biyolojiİstanbul Teknik Üniversitesiİleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ZEYNEP PETEK ÇAKAR
- Molecular chracterization of oxidative stress resistant yeast
Oksidatif strese dirençli mutant mayanın karakterizasyonu
NAZLI KOCAEFE
Yüksek Lisans
İngilizce
2012
Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesiİleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ZEYNEP PETEK ÇAKAR