İn Vitro koşullarda elde edilen sığır embriyolarının antifreeze protein III ile dondurulması ve çözüm sonrası değerlendirilmesi
Freezing of bovine embryos obtained under In Vitro conditions with antifreeze protein III and evaluation after thawing
- Tez No: 872270
- Danışmanlar: PROF. DR. MUSTAFA NUMAN BUCAK
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Veteriner Hekimliği, Veterinary Medicine
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2024
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Selçuk Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Dölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Dölerme ve Suni Tohumlama Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 75
Özet
Sunulan tez çalışmasında in vitro üretilen sığır embriyolarının vitrifikasyon yöntemi ile dondurulmasında vitrifikasyon solüsyonuna ilave edilen farklı dozlardaki tip III Antifreeze Protein (AFP-III)'in çözüm sonu 24. saatte reekspanse blastosist (hatched olmayan), hatched blastosist ve toplam canlı blastosist oranları ile blastosistteki hücre sayıları (iç hücre kitlesi, trofektoderm ve toplam hücre sayıları) oranları üzerindeki etkilerinin araştırılması amaçlandı. Mezbahanede kesim sonrası hayvanların ovaryumları toplanarak uygun ortamlarda laboratuvara getirildi ve ovaryumlar üzerinde bulunan 2-8 mm çapa sahip olan foliküller aspire edilerek oositler toplandı. Toplanan oositler kalitelerine göre sınıflandırılıp çalışmaya yalnızca A ve B kalite mature olmayan oositler dahil edildi. Oositlerin maturasyonu, fertilizasyonu, kültür işlemi ve blastosist oluşum süreci için IVF Bioscience firmasına ait ticari solüsyonlar kullanıldı. Oositlerin maturasyonu ve fertilizasyonu sırasıyla 22-24 saat ve 12-18 saat süreyle %5 CO2, 38,5˚C'de ve yüksek oranda nemli ortam sağlayan inkübatörde gerçekleştirildi. Fertilizasyon sonrası kültür işlemi %6 CO2, %6 O2, 38,5˚C ısı ve yüksek oranda nem içeren inkübatörde 6-9 gün süresince yapıldı. Fertilizasyon 0. gün kabul edilerek 6. günden itibaren in vitro kültür ortamında blastosist varlığı kontrol edildi. Vitrifikasyon işlemi için 3 aşamalı vitrifikasyon prosedürü (IVF Bioscience firmasının önerdiği şekilde) uygulandı. Çalışmanın vitrifikasyon deney grupları Kontrol (AFP-III 0), AFP-III 200 ng/ml, AFP-III 300 ng/ml ve AFP-III 400 ng/ml olacak şekilde oluşturuldu ve blastosistler bu deney gruplarıyla vitrifikasyon yöntemiyle donduruldu. Çözüm sonrası toplamda 166 adet embriyonun gelişimleri gözlenerek değerlendirmeye alındı. Çözüm sonrası 24. saatteki gelişmeleri izlenen embriyoların: Reekspanse (hatched olmayan), hatched blastosist ve toplam canlı blastosist oranları bakımından vitrifikasyon deney grupları arasında istatistiksel açıdan önemli bir fark görülmedi. Aynı şekilde, diferansiyel boyama sonrası elde edilen blastosistteki hücre sayıları ve oranları arasında yapılan istatistik analizlerde kontrol grubu ve farklı AFP-III dozları arasında herhangi bir önemli fark bulunmadı (p>0,05). Sonuç olarak, çözüm sonrası 24. saatteki blastosist gelişim oranları ve blastosistteki hücre sayıları üzerinde AFP-III'ün istatistiksel açıdan önemli bir fark oluşturmadığı gözlendi (p>0,05).
Özet (Çeviri)
The purpose of this dissertation study was to freeze in vitro produced bovine embryos by the vitrification method and to investigate the effect of different doses type III antifreeze protein by adding to the vitrification solution used in the freezing process and evaluate its effect on reexpanding blastocyst (non-hatched), hatched blastocyst, total live blastocyst rates and cell numbers (inner cell mass, trophoectoderm and total cell number of blastocyst) 24th hour after thawing. After slaughter in the slaughterhouse, the ovaries of the animals were collected and brought to the laboratory in appropriate environments, and the follicles with a diameter of 2-8 mm on the ovaries were aspirated and the oocytes were collected. The collected oocytes were classified according to their quality, and only immature oocytes of quality A and B were included in the study. Commercial medias from IVF Bioscience were used for the maturation, fertilization, culture and blastocyst formation process of oocytes. Maturation and fertilization of oocytes were carried out in an incubator providing an environment of 5% CO2, 38.5˚C and high humidity for respectively 22-24 hours and 12-18 hours. Post-fertilization culture was carried out for 6-9 days in an incubator providing an environment of 6% CO2, 6% O2, 38.5˚C temperature and high humidity. Fertilization was considered to be day 0, and the presence of blastocysts in the in vitro culture medium was checked starting from day 6. For the vitrification process, the 3-stage vitrification procedure was applied as recommended by the IVF Bioscience company. The vitrification experimental groups of our study were created as Control (AFP-III 0), AFP-III 200 ng/ml, AFP-III 300 ng/ml and AFP-III 400 ng/ml, and blastocysts were frozen with these experimental groups by the vitrification method. After the warming procedure (according to IVF Bioscience procedure), the development of a total of 166 embryos was observed and evaluated. There was no statistically significant difference between the vitrification experimental groups in terms of reexpansion (non-hatched), hatched blastocyst and total live blastocyst rates of the embryos whose developments were monitored at the 24th hour after warming. Likewise, in the statistical analysis made between the cell numbers and ratios in the warmed blastocyst obtained after differential staining, no significant difference was found between the control group and different doses of AFP-III groups (p>0,05). As a result, it was observed that AFP-III did not make a statistically significant difference on blastocyst development rates and cell numbers in the vitrified blastocyst at the 24th hour after warming (p>0,05).
Benzer Tezler
- Blastosist sıvısı aspirasyonunun in vitro sığır embriyolarında dondurma sonrası viyabiliteye etkisi
Effect of artificial collapse method on freezed-post thawed bovine blastocysts viability
GÖKÇE ONUR ÜNAL
Doktora
Türkçe
2017
BiyoteknolojiAnkara ÜniversitesiDoğum ve Jinekoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MUSTAFA KAYMAZ
- Investigation of mechanoregulatory role of desmin protein
Investigation of mechanoregulatory role of desmin protein
NİLÜFER DÜZ
Doktora
Türkçe
2024
Tıbbi BiyolojiHacettepe ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. PERVİN RUKİYE DİNÇER
- The effect of FSH-priming on oocyte recovery, oocyte quality and in vitro embryo production in water buffaloes
Mandalarda FSH ile uyarmanın oosit kazanımı, kalitesi ve in vitro embriyo üretimi üzerine etkisi
GEORGIOS PETROVAS
Doktora
İngilizce
2022
Veteriner Hekimliğiİstanbul Üniversitesi-CerrahpaşaDölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SERHAT ALKAN
PROF. DR. GİUSEPPE CAMPANILLE
- Ortodontik mikro-implantların primer stabilitesinin in vitro koşullarda incelenmesi
The evaluation of the primary stability of the orthodontic micro-implants in vitro
SEÇİL ÇEHRELİ
Doktora
Türkçe
2011
Diş HekimliğiBaşkent ÜniversitesiOrtodonti Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AYÇA ARMAN ÖZÇIRPICI
- Yedi farklı ajanın sığır minesinin demineralizasyonunu azaltıcı etkilerinin araştırılması
Effects of seven different agents on inhibition of bovine enamel demineralization
FATMA BAHAR OSMAN