Geri Dön

İmmatür sığır oositlerinin parlak krezil mavisi (BCB) boyasıyla seçiminin embriyo gelişim oranlarına etkisi

The effect of selection of immature bovine oocytes with brillant cresyl blue (BCB) stain on embryo development rates

PDF İndir

  1. Tez No: 891927
  2. Yazar: CANSU GÖKTEPE TURHAN
  3. Danışmanlar: PROF. DR. YUNUS ÇETİN
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Veteriner Hekimliği, Veterinary Medicine
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2024
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Burdur Mehmet Akif Ersoy Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Doğum ve Jinekoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 65

Özet

Bu çalışmanın amacı farklı konsantrasyonlarda kullanılan PKM boyasının blastosist aşamasına kadar gelişimi destekleyecek immatür sığır oositlerin seçimindeki etkinliğini ortaya koymaktı. Tez çalışması için mezbahaneden getirilen ovaryumlar aspire edildikten sonra oositler rastgele iki guba ayrıldı. Morfolojik kriterlere göre seçilen A ve B kalite oositler kontrol grubu olarak kullanıldı. Kontrol grubundaki oositler direkt olarak maturasyon işlemine alındı. Boyama gruplarında ise oositler hiçbir kriter gözetilmeksizin boyama işlemine alındı. Parlak krezil mavisi boyası (B5388; Sigma) yıkama solüsyonu içerisinde 26, 13 ve 6,5 μM konsantrasyonlarda hazırlandı. Oositler DPBS ile 12 damlada yıkanarak PKM boyasında 90 dk inkübatörde bekletildi. Boya alan oositler (PKM+) ile boya almayan (PKM-) oositler ayrıldıktan sonra PKM+ oositler maturasyon işlemine alındı. Maturasyon %5 O₂, %5 CO₂ ve %90 N₂ içeren ortamda 21-22 saat sürede gerçekleşti. Maturasyon solüsyonundan arınan oositler IVF petrisine alındı. Fertilizasyon droplarına hazırlanan spermadan eklendi. Ardından petri 24 saat inkübatöre kaldırıldı. İn vitro fertilizasyon petrisinden alınan oositler içerisinde yıkama solüsyonu bulunan ependorflara alınarak 3 dk boyunca vortekslendi. Oositler 3 damlada kültür medyumunda yıkanarak kültür petrisine alındı. Muhtemel zigotlar 6 gün kültürde tutuldu. Fertilizasyon sonrası 4. günde zigotların klivaj oranları not edildi. Kültürün 6. ve 7. gününde ise blastosistlerin aşamaları kaydedildi. Boyama gruplarından PKM 26 цM konsantrasyonda 268 oositten 189 oositin (%70,5), 13 цM konsantrasyonda 254 oositten 193'ünün (%76) ve 6,5 цM konsantrasyonda 302 oositten 218 oositin (%72,2) boya aldığı tespit edildi. Kontrol grubunda maturasyona alınan oositlerin %97,3'ünün, boyama gruplarından PKM 26 цM konsantrasyonda %2,6'sının, 13 цM konsantrasyonda %4,1'nin, 6.5 цM konsantrasyonda ise %5'inin matür olduğu gözlemlendi. Kontrol grubunda kültüre alınan oositlerin %35,9'u blastosiste dönüşürken PKM 26 цM, 13 цM ve 6.5 цM konsantrasyonlarda ise bu oran %0 olarak tespit edildi. Sunulan çalışma sonucunda 26 μM, 13 μM ve 6.5 μM olmak üzere 3 farklı konsantrasyonda 90 dakika sürede kullanılan PKM boyası ile seçilen oositlerden blastosist üretimi yapılamamıştır. Literatürde PKM boyasının oosit seçiminde başarı ile kullanıldığı bildirilmiş olsa da toksite testleri olmayan bir kimyasal in vitro embriyo üretim prosedüründe kullanımına ihtiyatla yaklaşılmalıdır.

Özet (Çeviri)

The aim of this study was to determine the effectiveness of Brillant Cresyl Blue (PKM) dye used at different concentrations in the selection of immature bovine oocytes to support development until the blastocyst stage. Oocytes were randomly divided into two groups after aspirating the ovaries brought from the abattoir for the thesis study. A and B quality oocytes selected according to morphological criteria were used as control group. Oocytes in the control group were taken directly to maturation process. In the staining groups, oocytes were stained without any criteria. Brillant cresyl blue stain (B5388; Sigma) was prepared in washing solution at concentrations of 26, 13 and 6.5 μM. Oocytes were washed with DPBS in 12 drops and kept in the incubator for 90 min in PKM stain. After separating the oocytes that received dye (PKM +) and oocytes that did not receive dye (PKM -), PKM + oocytes were taken into maturation process. Maturation was performed for 21-22 hours in an environment containing 5% O₂, 5% CO₂ and 90% N₂. The oocytes were removed from the maturation solution and placed in the IVF petri dish. Prepared semen was added to the fertilisation drops. Then the petri was placed in the incubator for 24 hours. Oocytes taken from the in vitro fertilisation petri dish were placed in ependorfs containing washing solution and vortexed for 3 min. Oocytes were washed in 3 drops of culture medium and transferred to the culture petri dish. Possible zygotes were kept in culture for 6 days. The cleavage rates of zygotes were noted on the 4th day after fertilisation. On the 6th and 7th day of culture, the stages of blastocysts were recorded. Among the staining groups, 189 oocytes out of 268 oocytes (70.5%) at 26 цM concentration, 193 oocytes out of 254 oocytes (76%) at 13 цM concentration and 218 oocytes out of 302 oocytes (72.2%) at 6.5 цM concentration were stained. It was observed that 97.3% of the oocytes in the control group, 2.6% in the PKM 26 цM concentration, 4.1% in the 13 цM concentration and 5% in the 6.5 цM concentration were mature. While 35.9% of the oocytes cultured in the control group transformed into blastocyst, this rate was 0% in PKM 26 μM, 13 μM and 6.5 μM concentrations. As a result of the present study, blastocysts could not be produced from oocytes selected with PKM dye used at 3 different concentrations of 26 μM, 13 μM and 6.5 μM for 90 minutes. Although it has been reported in the literature that PKM dye has been used successfully in oocyte selection, it is cautious to use a chemical without toxicity tests in in vitro embryo production procedure.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    157550

    İmmatür sığır oositlerinin vitrifikasyon tekniği ile etilen glikol ve DMSO kullanarak payetlerde dondurulması

    Cryopreservation of immature bovine oocytes by vitrification with ethylene glycol and DMSO in straws

    YUNUS ÇETİN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2004

    Veteriner HekimliğiAnkara Üniversitesi

    Doğum ve Jinekoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. AYHAN BAŞTAN

  2. Tez No

    522941

    Farklı vitrifikasyon yöntemleri ile dondurulan sığır oositlerinin çözdürme sonrası in vitro maturasyon başarıları

    The achievements of in vitro maturation after thawing to the cryopreserved bovine oocytes by different vitrification methods

    ŞÖHRET GÜLER

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    Veteriner HekimliğiBurdur Mehmet Akif Ersoy Üniversitesi

    Doğum ve Jinekoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ AFŞİN KÖKER

  3. Tez No

    287572

    Arı sütü ve buzağı serumunun sığır oositlerinin vitrifikasyonu ve olgunlaşması üzerine etkilerinin araştırılması

    Effects of royal jelly and fetal bovine serum on the maturation and vitrification of bovine oocytes

    ZELİHA NECLA AKSU

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    BiyoteknolojiMustafa Kemal Üniversitesi

    Zootekni Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. ALİ GALİP ÖNAL

  4. Tez No

    872270

    İn Vitro koşullarda elde edilen sığır embriyolarının antifreeze protein III ile dondurulması ve çözüm sonrası değerlendirilmesi

    Freezing of bovine embryos obtained under In Vitro conditions with antifreeze protein III and evaluation after thawing

    AYŞE SARI

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    Veteriner HekimliğiSelçuk Üniversitesi

    Dölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı​

    PROF. DR. MUSTAFA NUMAN BUCAK

  5. Tez No

    649481

    Ön boynuz hastalıklarında süregelen denervasyon ve reinnervasyonun elektromiyografik olarak incelenmesi

    Electromyographic examination of ongoing denervation and reinnervation in anterior horn diseases

    PINAR BEKDİK ŞİRİNOCAK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2020

    Nörolojiİstanbul Üniversitesi

    Sinir Bilimi Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MEHMET BARIŞ BASLO

Geri Dön