Geri Dön

Establishment of reference intervals for kaolin-activated TEG and the STA compact automated analyzer for dogs and coagulation response in a canine model of endotoxemia

Kaolin ile aktive edilmiş TEG ve STA compact otomatik analiz cihazı için köpeklerde referans aralıklarının belirlenmesi ve bir köpek endotoksemi modelinde koagülasyon yanıtı

  1. Tez No: 892077
  2. Yazar: OYA ERALP İNAN
  3. Danışmanlar: PROF. DR. ANDREAS MORİTZ
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Veteriner Hekimliği, Veterinary Medicine
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2011
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Justus-Lıebıg-Unıversıtat Gıessen
  10. Enstitü: Yurtdışı Enstitü
  11. Ana Bilim Dalı: Veterinerlik İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

Amaç Çalışmanın ilk kısmı, köpeklerde kaolin ile aktive edilmiş tromboelastografi (TEG® 5000 Thrombelastography, Haemonetics Corporation; önceki adıyla Haemoscope Corporation; Braintree, MA, ABD) ve otomatik koagülasyon analiz cihazı STA Compact (STA Compact®, Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Almanya) için yöntem doğrulaması (intra-assay tekrarlanabilirlik, hemoliz ve lipemi etkisi, antikoagülan etkisi) ve referans aralıklarının değerlendirilmesini içermektedir. Çalışmanın ikinci kısmında ise endotoksemi modeli kullanılan bir köpek modelinde koagülasyon sisteminin yanıtı değerlendirildi. Materyal ve Metot Referans aralıklarının oluşturulmasından önce tekrarlanabilirlik ve etkiler değerlendirildi. İncelenen değişkenler arasında TEG değerleri R, K, α, MA ve G ile koagülasyon değişkenleri tek aşamalı protrombin zamanı (OSPT), aktive parsiyel tromboplastin zamanı (aPTT), trombin zamanı (TT), fibrinojen, Faktör VIII (FVIII), antitrombin (AT), protein C (PC), protein S (PS), aktive protein C'ye karşı direnç (APC oranı), plazminojen, D-dimer, anti-FXa STA Compact koagülasyon analiz cihazında ölçüldü. TEG değişkenleri için intra-assay tekrarlanabilirlik, 6 sağlıklı köpekten alınan çift ölçümlerle gerçekleştirildi. Varyans katsayısının hesaplanması için gerekli standart sapma, birleştirilmiş varyans tahmininin kökü ile tutarlıydı. Native tam kan veya sitratlı tam kan ile elde edilen TEG sonuçlarının karşılaştırılması, 16 sağlıklı köpek üzerinde yapıldı. Hemolizin TEG sonuçlarına etkisinin değerlendirilmesi için 17 sağlıklı köpek dahil edildi. Hemolitik örnekler mekanik stres (HM) ve donma-çözülme (HF) gibi iki teknikle hazırlandı. STA Compact ile test edilen değişkenlerin intra-assay tekrarlanabilirliği, bir sağlıklı köpekten alınan örnekle yapılan 15 tekrar ölçümle değerlendirildi. Yukarıda belirtilen değişkenler için intra-assay varyasyon tahmin edildi. Antikoagülan ve etkilerin değerlendirilmesi, eşleştirilmiş t-testi (veya Wilcoxon işaret sıralama testi) ile yapıldı. Referans aralıklarının oluşturulması için normal dağılım varsayımını doğrulamak amacıyla Anderson Darling testi uygulandı. Veriler normal veya log-normal dağılıma sahipse, çift yönlü referans aralıkları, ortalama±1.96 SD (standart sapma) hesaplanarak elde edildi. Böylece referans popülasyonunun %95'i dahil edildi. Veriler normal dağılmadığında, parametrik olmayan persantil yöntemi uygulandı. %95 çift yönlü referans aralığını elde etmek için %2.5 ve %97.5 persantilleri hesaplandı. Veriler, referans aralığı ve üst ve alt referans sınırlarının %90 güven aralığı ile birlikte histogramlar olarak gösterildi. Referans aralıkları üzerindeki cinsiyet etkisi, bağımsız t-testi veya benzer parametrik olmayan bir test (Mann Whitney U testi) kullanılarak değerlendirildi. Kontrol grubu ile endotoksin tedavi grubundaki farklılıklar, tekrarlı ölçümlerle varyans ve kovaryansın iki yönlü analizi ile değerlendirildi. Bulgular R, K, α, MA ve G için intra-assay varyasyon katsayıları sırasıyla %7.6, %17.7, %7.4, %2.9 ve %6.6 olarak bulundu. Hemolizli örnekler, anlamlı derecede düşük R değeri ile birlikte MA, G ve α değerlerinde azalmaya (P<0.001 ila <0.0001) neden oldu. Ayrıca, kontrol grubuna kıyasla anlamlı derecede yüksek K değeri gözlendi (P<0.01). Antikoagülanların TEG değişkenleri üzerinde anlamlı bir etkisi yoktu. Bireyler arası varyasyon, native örneklerde sitratlı tam kan örneklerine göre daha yüksekti. Koagülasyon parametreleri OSPT, aPTT, TT, fibrinojen, FVIII, AT, PC, PS, APC oranı, plazminojen, D-dimer ve anti-FXa için intra-assay varyasyon katsayıları sırasıyla %1.22, %1.02, %1.64, %5.6, %3.89, %4.68, %2.36, %1.4, %1.45, %20.16, %45.92 ve %12.83 idi. FVIII aktivitesi, antitrombin, protein C, protein S ve APC oranı hemolitik plazmada fazla tahmin edilirken, fibrinojen, TT ve aPTT düşük tahmin edildi. Lipemi sadece yanlış yüksek D-dimer sonuçlarına neden oldu. Kaolin ile aktive edilmiş TEG için referans aralıkları şu şekildeydi: R=1.8-8,6 dakika; açı α=36.9-74.6 derece; K=1.3-5.7 dakika; MA=42.9-67.9 mm ve G=3.2-9.6 Kdyn/cm2. STA Compact otomatik analiz cihazı için referans aralıkları ise şu şekildeydi: OSPT=5.7-8.0 saniye; aPTT=10.0-14.3 saniye; TT=11.9-18.3 saniye; fibrinojen=1.3-3.1 g/l; AT=%107.9-128.0; D-dimer=0.023-0.65 μg/ml; anti-FXa=0.04-0.26 IU/L; APC oranı= 2.0-3.0; PC=%74.4-160.5; PS=%75.5-118.9 ve FVIII=%70.9-136.4. PC, PS ve FVIII sonuçlarının köpek standart eğrisi ile karşılaştırılması gerektiği belirtildi. Her iki analiz cihazı için sonuçlar üzerinde cinsiyetin anlamlı bir etkisi bulunmadı. Çalışmanın ikinci kısmı: Endotoksin kaynaklı klinik belirtiler arasında letarji (n=5/5), ishal (n=4/5), kusma (n=4/5) ve karın ağrısı (n=2/5) yer aldı. Endotoksinin koagülasyon süreci üzerindeki etkisinin değerlendirilmesinde, 1. saat zaman noktasında şiddetli lökopeni (ortalama 2.5±0.7×109/l; P<.0001) ve D-dimerlerde anlamlı derecede 2.2 kat artış (P=0.001) gözlendi. 4. saat zaman noktasında vücut sıcaklığında (P=0.0006) ve OSPT'de (P=0.0042) anlamlı bir artışın yanı sıra fibrinojen (P=0.0007), protein C (P=0.0021) ve protein S'de (P=0.008) anlamlı bir azalma gözlendi. PLT'ler (P=0.0284) ve antitrombin (P=0.0170) 24. saatte en düşük seviyedeydi. TEG değişkenleri gruplar arasında anlamlı bir farklılık göstermedi. Sepsis grubunda APC oranı daha yüksekti (P=0.0348), ancak 4/5 köpekte referans aralığında kaldı. Sonuç Kaolin ile aktive edilmiş TEG ve STA Compact otomatik analiz cihazı için yararlı referans aralıkları sağlandı, ancak bazı insan testleri (örn., Protein C, protein S ve faktör VIII) modifiye edilmelidir. Endotokseminin hemostatik sistem üzerindeki etkisine gelince, sepsisle ilişkili koagülasyon anormalliklerinin en erken göstergesi D-dimerler olup, bunları OSPT'nin artışı ve protein C'nin azalması takip etti. APC oranı ve TEG değişkenlerinin erken sepsis/endotoksemi için iyi tarama değişkenleri olmadığı değerlendirildi.

Özet (Çeviri)

Objective The first part of the study included method validation(intra-assay-repeatability, impact of hemolysis and lipaemia, effect of anticoagulant) and evaluation of reference intervals for dogs for kaolin-activated thromboelastography (TEG® 5000 Thrombelastography, Haemonetics Corporation; formerly Haemoscope Corporation; Braintree, MA, USA) and the automated coagulation analyzer STA Compact (STA Compact®, Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Germany). In a second part of the study, the response of the coagulation system in a canine model of endotoxemia was evaluated. Material and Methods Before the establishment of reference intervals, repeatability and interferences were assessed. Investigated variables included the TEG values R, K, α, MA and G as well and the coagulation variables one stage prothrombin time (OSPT), activated partial thromboplastin time (aPTT), thrombin time (TT), fibrinogen, Factor VIII (FVIII), antithrombin (AT), protein C (PC), protein S (PS), resistance against activated protein C (APC-ratio), plasminogen, D-dimer, anti-FXa run on the coagulation analyzer STA Compact. Intra-assay repeatability for TEG variables was performed in 6 healthy dogs with duplicate measurements. The standard deviation required for calculation of the coefficient of variation (CV) was consistent with the root of the pooled variance estimate. The comparison between TEG results obtained with native whole blood or citrated whole blood was performed in 16 healthy dogs. For assessment of hemolysis on TEG results,17 healthy dogs were included. Hemolytic samples were prepared with two techniques: mechanical stress (HM) and as well as freeze and thawing (HF). The intra-assay repeatability for variables assayed with the STA Compact was assessed with 15 replicate measurements in a sample taken from one healthy dog. The intra-assay variation was estimated for variables mentioned above. To assess the effect of anticoagulant and interferences was assessed by a paired t-test (or Wilcoxin signed rank sum test). For the establishment of the reference intervals, an Anderson Darling test was performed to verify the assumption of normality. In case of normal and log normal distribution of data, double sided reference intervals were obtained by calculating the mean±1.96 SD (standard deviation) so that 95% of the reference population was included. If non-normal distribution of data was present, the non-parametric percentile method was applied. The 2.5 and 97.5 percentiles were calculated to obtain the 95% double sided reference interval. Data were depicted as histograms with the reference interval as well as the 90% confidence interval of the upper and lower reference limits. The influence of sex on the reference intervals was assessed by using an unpaired t-test or a comparable non-parametric test (Mann Whitney U test). The differences between control group and endotoxin treatment group were assessed with a two way analysis of varience and covariance with repeated measures. Results Intra-assay CVs for R; K; α; MA and G were 7.6%; 17.7%; 7.4%; 2.9% and 6.6% respectivley. Samples with hemolysis resulted in a significantly decreased R value and decreased MA, G and α value (P<0.001 to <0.0001). Furthermore, a significantly high K value was seen compared to the control group (P<0.01). There was no significant impact of anticoagulant on TEG variables.Inter-individual variation was higher in native samples than in citrated whole blood. Intra-assay CVs for the coagulation parameters OSPT, aPTT, TT, fibrinogen, FVIII, AT, PC, PS, APC-ratio, plasminogen, D-dimer and anti-FXa were 1.22%, 1.02%, 1.64%, 5.6%, 3.89%, 4.68%, 2.36%, 1.4%, 1.45%, 20.16%, 45.92% and 12.83%. FVIII-activity, antithrombin, proteinC, protein S, and APC-ratio were overestimated in haemolytic plasma, whereas fibrinogen, TT, and aPTT were underestimated. Lipemia resulted only in false high D-dimers. Reference intervals for the kaolin activated TEG were as follows: R=1.8-8,6min.; angleα=36.9-74.6 degrees; K=1.3-5.7 min.; MA=42.9-67.9 mm and G=3.2-9.6 Kdyn/cm2. Reference intervals for the STA Compact automated analyzer were as follows: OSPT=5.7-8.0 sec.; aPTT=10.0-14.3 sec.; TT=11.9-18.3 sec.; fibrinogen=1.3-3.1 g/l; AT=107.9-128.0 %; D dimer=0.023-0.65 μg/ml; anti-FXa=0.04-0.26 IU/L; APCratio= 2.0-3.0; PC=74.4-160.5 %; PS=75.5-118.9 % and FVIII=70.9-136.4 %. The results for PC, PS and FVIII have to be compared to a canine standard curve. There was no significant impact of sex on results of both analyzers. Second part of the study: The endotoxin-induced clinical signs included lethargy (n=5/5), diarrhea (n=4/5), vomitus (n=4/5) and abdominal pain (2/5). Regarding the evaluation of the impact of endotoxin on the coagulation process severe leukopenia (mean 2.5±0.7×109/l; P<.0001) and a significiant 2.2-fold increase in D-dimers (P=0.001) were observed at time point 1 hour. At time point 4 hours, a significant raise in body temperature (P=0.0006) and in OSPT (P=0.0042) was seen as well as a significant decrease in fibrinogen (P=0.0007), protein C (P=0.0021) and protein S (P=0.008). PLTs (P=.0284) and antithrombin (P=.0170) were lowest at time point 24 hours. TEG variables did not significantly differ between the groups. APCratio was higher in the sepsis group (P=0.0348), however, remained within the reference interval in 4/5 dogs. Conclusion The data provided useful reference ranges for kaolin-activated TEG and for the STA Compact automated analyser but some human tests (e.g., Protein C, protein S and factor VIII) have to be modified. Regarding the impact of endotoxemia on the hemostatic system, the earliest indicator of sepsis-associated coagulation abnormalities were D-dimers which were followed by increased OSPT and decreased protein C. APC-ratio and TEG variables were not considered to be good screening variables in early sepsis/endotoxemia.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    417345

    Mukopolisakkaridoz tarama - tanı testlerinin kurulması ve referans aralıklarının belirlenmesi

    Establishment of screening and diagnostic laboratory tests for mucopolysaccharidoses and determination of reference intervals

    KHALED EL MOUSTAFA

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    BiyokimyaHacettepe Üniversitesi

    Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. İNCİLAY LAY

  2. Tez No

    293534

    Klinik biyokimya analitlerine ait referans aralıkların numune kabul zamanına göre indirekt yöntemle tespiti

    Establishment of reference intervals of some clinical chemistry analytes in an indirect mode partitioned by sampling times

    MEHMET GÜNGÖR

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    Biyokimyaİnönü Üniversitesi

    Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. AHMET ÇIĞLI

  3. Tez No

    599709

    Experimenting with some data mining techniques to establish pediatric reference intervals for clinical laboratory tests

    Tıbbi laboratuvar testlerinin pediyatrik referans aralıklarının belirlenmesi için bazı veri madenciliği teknikleri ile deneyler

    DENİZ ERASLAN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2019

    Bilgisayar Mühendisliği Bilimleri-Bilgisayar ve KontrolDokuz Eylül Üniversitesi

    Bilgisayar Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SÜLEYMAN SEVİNÇ

  4. Tez No

    353928

    Gaziantep ilinde yaşayan 18-45 yaş arası bireylerde bazı kan biyokimya parametreleri için referans aralıklarının hesaplanması

    Calculation of reference ranges for some blood biochemical parameters between 18-45 aged individuals living in Gaziantep

    MUSTAFA ÖRKMEZ

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    BiyokimyaGaziantep Üniversitesi

    Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MEHMET TARAKÇIOĞLU

  5. Tez No

    937711

    Erişkin bireylerde tam kan sayımı testlerinin referans aralıklarının indirekt yöntemle belirlenmesi

    Determination of reference intervals of complete blood count tests in adult individuals by indirect method

    ÖMER FARUK SAZ

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2025

    BiyokimyaKaradeniz Teknik Üniversitesi

    Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. YÜKSEL ALİYAZICIOĞLU

Geri Dön