Geri Dön

Karbonik anhidraz II'nin homosistein ve metilglioksal ile modifikasyonunun enzim aktivitesi ve antijenik özelliklerine etkisinin incelenmesi

Investigation of the effect of modification of carbonic anhydrase II with homocysteine and methylglyoxal on enzyme activity and antigenic properties

  1. Tez No: 893169
  2. Yazar: NESLİHAN SAĞLAM
  3. Danışmanlar: PROF. DR. AHMET ALVER
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2024
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Karadeniz Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 105

Özet

Karbonik anhidrazlar (CA'lar), karbondioksitin hidrasyonunu geri dönüşümlü olarak katalizleyen metalloenzimlerdir. CA enzim ailesinin posttranslasyonel modifikasyonlarına (PTM'larına) dair çalışmalar genellikle veritabanlarına dayanarak değerlendirilmiştir. PTM'ler ile CA'ların fonksiyonları arasında açık bir korelasyon olduğu ifade edilse de birçok modifikasyon olayı için yeterince deneysel çalışmalar yapılmamıştır. Bu çalışmada, geniş bir doku dağılımına sahip insan karbonik anhidraz II (hCAII) izoenziminin homosistein (HCY) ve metilglioksal (MGO) ile in vitro modifikasyonlarının enzimin aktivitesi ve antijenik özellikleri üzerine etkilerinin incelenmesi amaçlanmıştır. Bu amaçla, çalışmada kullandığımız saf hCAII izoenzimi, insan eritrositlerinden afinite kromotografisi ile saflaştırıldı. Elde edilen saf hCAII izoenzimi, HCY ve MGO ile in vitro olarak modifiye edildi. Modifikasyonların varlığı western blot ile teyit edildi. Modifiye edilen hCAII izoenzimlerinin hidrataz ve esteraz aktiviteleri ölçüldü. Modifiye olan hCAII izoenzimlerinin antijenik özeliklerini belirlemek için Balb-c fareler bu enzimlerle immünize edildi ve fare serumlarındaki antikor titreleri ELISA yöntemi ile ölçüldü. Enzim aktiviteleri ölçüldüğünde, hCAII enziminin HCY ve MGO ile modifikasyonlarında, N homosisteinilasyona bağlı olarak enzim aktivitesinde dozla ilişkili olarak inhibisyona neden olurken, glikasyona bağlı etkisininin ise düşük modifikasyon dozunda önemli ölçüde aktivasyona sebep olurken yüksek modifikasyon dozunda ise inhibisyona neden oldu. MGO ile modifikasyonun Balb-c farelerde yüksek antijenik cevap oluşturduğu, HCY'nin antijeniteyi değiştirmediği gözlendi. Sonuç olarak, MGO ile modifikasyonun hCAII enziminin hem aktivite hem de antijenik özelliklerini etkilediği, HCY ile modifikasyonun ise enzimin aktivitesinde önemli etkisi olduğu gözlenirken, antijenik olarak etkisi belirlenmemiştir.

Özet (Çeviri)

Carbonic anhydrases (CAs) are metalloenzymes that reversibly catalyse the hydration of carbon dioxide. Studies on posttranslational modifications (PTMs) of the CA enzyme family have been evaluated mainly based on databases. Although there is a clear correlation between PTMs and the function of CAs, many modification events have not been adequately studied experimentally. In this study, we aimed to investigate the effects of in vitro modifications of human carbonic anhydrase II (hCAII) isoenzyme with homocysteine (HCY) and methylglyoxal (MGO) on the activity and antigenic properties of the enzyme. For this purpose, pure hCAII isoenzyme was purified from human erythrocytes by affinity chromatography. The obtained pure hCAII isoenzyme was modified in vitro with HCY and MGO. The presence of modifications was confirmed by Western blotting. Hydratase and esterase activities of the modified hCAII isoenzymes were measured. To determine the antigenic properties of the modified hCAII isoenzymes, Balb-c mice were immunised with these enzymes and antibody titres in mouse sera were measured by ELISA. When the enzyme activities were measured, modifications of hCAII enzyme with HCY and MGO caused dose-related inhibition of the enzyme activity due to N-homocysteinylation, while the glycation-dependent effect caused significant activation at low modification dose and inhibition at high modification dose. It was observed that modification with MGO induced a high antigenic response in Balb-c mice, while HCY did not alter antigenicity. In conclusion, modification with MGO affected both the activity and antigenic properties of hCAII enzyme, while modification with HCY had a significant effect on the activity of the enzyme, but no antigenic effect was determined.

Benzer Tezler

  1. Siprofibratın insan karbonik anhidraz ıı ve glukoz 6-fosfat dehidrogenaz enzimlerinin aktiviteleri üzerine etkilerinin in vitro incelenmesi

    An investigation of the effects of ciprofibrate on human carbonic anhydrase ii and glucose 6- phosphate dehydrogenase enzymes activities in vitro

    DİLER US

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2009

    BiyokimyaKaradeniz Teknik Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. E.EDİP KEHA

  2. İnsan karbonik anhidraz ıı enziminin (hCA II) klonlanması, E. coli'de ekspresyonu, karakterizasyonu, yönlendirilmiş mutagenez ile mutant hCA II genlerinin eldesi ve mutant proteinlerin inhibitörlere karşı ilgisinin araştırılması

    Cloning, expression in E. coli, characterization of human carbonic anhydrase ii (hCA II) enzyme, production of mutant hCA II genes by site directed mutagenesis and investigation of affinity of mutant proteins to inhibitors

    DERYANUR KILIÇ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    KimyaAtatürk Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ÖMER İRFAN KÜFREVİOĞLU

  3. Deneysel obezite modelinde beyaz çayın karbonik anhdiraz II izoenzimi üzerine etkisinin incelenmesi

    Examining the effect of white TEA on carbonic anhydrase II isoenzyme in experimental obesity model

    ELİF BÜŞRA KORKMAZ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    BiyokimyaRecep Tayyip Erdoğan Üniversitesi

    Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. HÜLYA KILIÇ YILMAZ

  4. Moleküler modelleme yöntemleri kullanılarak bazı enzim ve proteinlerin alosterik etki ile inhibisyon ve aktivasyonlarının araştırılması

    Investigation of inhibition and activation of some enzymes and proteins by allosteric effect using molecular modeling methods

    MEHMET MURAT YAŞAR

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    Fizik ve Fizik MühendisliğiAkdeniz Üniversitesi

    Fizik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. İSMAİL HAKKI SARPÜN

    PROF. DR. EROL EROĞLU

  5. Allilik aminasyon ile rasemik sülfamatların ve ß-laktamların sentezi

    Synthesis of new sulfamates with allylicamination and synthesis of β-lactams

    SHAHLA DARYADEL

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    KimyaAtatürk Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MURAT ÇELİK