Kemoterapik ajan L-asparajinazın Cu(II) iyonları içeren polimerik nanopartiküllere immobilizasyonu ve etkinliğinin araştırılması
Immobilization of chemotherapy agent L-asparaginase to polymeric nanoparticles containing Cu(II) ions and investigation of its effectiveness
- Tez No: 904548
- Danışmanlar: PROF. DR. BİLGEN OSMAN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Kimya, Biochemistry, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2024
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Bursa Uludağ Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Biyokimya Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 101
Özet
Bu çalışmada, L-asparajinaz (L-ASNaz) enzimi metal şelat afinite tekniği ile poli(2- hidroksietil metakrilat-N-metakriloil-(l)-histidin metil ester-Cu(II)) [PHM-Cu2+] nanopartiküller üzerine immobilize edilmiş ve immobilize L-ASNaz enzimi, yapay serumda L-asparajin (L-Asn) hidrolizi için kullanılmıştır. Enerji dağıtıcı X-Ray analizi (EDX) ile birleştirilmiş taramalı elektron mikroskobu (SEM), Fourier Dönüşümlü kızılötesi spektroskopisi (FTIR), geçirimli elektron mikroskobu (TEM) ve Zeta potansiyel ve boyut analizi ile karakterize edilmiştir. İmmobilizasyon etkinliği değerlendirilmiştir ve immobilizasyon verimi %86.46 ± 3.32, aktivite verimi %73.65 ± 4.78, immobilizasyon etkinliği %85.18 ± 4.36 olarak hesaplanmıştır. Serbest ve immobilize enzimin bağıl aktiviteleri optimum reaksiyon koşulunu belirlemek için karşılaştırılmıştır. L-ASNaz'ın optimum pH'ı 8,5 sıcaklığı ise 45℃ olarak belirlenmiştir. PHM-Cu2+-L-ASNaz'ın optimum pH'ı 7.0 ve sıcaklığı 50℃ olarak belirlenmiştir. Her iki enzimin termal kararlılığı araştırılmış ve immobilize enzimin başlangıç aktivitesinin %60'ını, serbest enzimin ise sadece %34'ünü koruyabildiği belirlenmiştir. Depolama kararlılığı araştırılmış ve immobilize enzim 4 hafta aktivitesinin %80'nini korumuştur. PHM-Cu 2+ -L-ASNaz'ın 10 kez tekrar kullanımdan sonra başlangıç aktivitesinin %60'ını koruduğu tespit edilmiştir. Ayrıca metal iyonlarının ve organik çözücülerin enzim aktivitesine etkisi araştırılmıştır. PHM-Cu2+-L-ASNaz tripsin hidrolizine karşı aktivitesinin %45'ini korumuştur. L-ASNaz ve PHM-Cu2+-L-ASNaz enzimleri için kinetik hesaplamalar yapılmıştır. Yapay serum ortamında 7 günde L-ASNaz aktivitesinin %38.98'ini korurken, PHM-Cu2+-L-ASNaz %56.87'sini korumuştur. Sonuçlar, LASNaz'ın PHM-Cu2+-L-ASNaz nanopartikülleri üzerine immobilizasyonunun substrat afinitesini arttırdığını ve enzim-substrat bileşiklerinin oluşumunu desteklediğini göstermiştir.
Özet (Çeviri)
In this study, L-asparaginase (L-ASNase) enzyme was immobilized on poly(2- hydroxyethyl methacrylate-N-methacryloyl-(l)-histidine methyl ester-Cu(II)) [PHMCu2+] nanoparticles and immobilized L-ASNase enzyme was used for hydrolysis of Lasparagine (L-Asn) in artificial serum. Nanoparticles were characterized by scanning electron microscopy with energy dispersive X-ray (SEM-EDX), Fourier Transform infrared spectroscopy (FTIR), transmission electron microscopy (TEM), Zeta potential and size analysis. The immobilization efficiency was evaluated and the immobilization yield was calculated as 86.46 ± 3.32%, activity yield was 73.65 ± 4.78% and immobilization efficiency was 85.18 ± 4.36%. Relative activities of free and immobilized enzyme were compared to determine the optimum reaction condition. The optimum pH of L-ASNase was determined as 8.5 and temperature as 45℃. The optimum pH of PHMCu2+ -L-ASNase was determined as 7.0 and the temperature was 50℃. The thermal stability of both enzymes was investigated and the immobilized enzyme retained 60% of its activity while the free enzyme retained only 34%. Storage stability was investigated and the immobilized enzyme retained 80% of its activity after 4 weeks. PHM-Cu2+ -LASNase retained 60% of its initial activity after 10 times of reuse. The effect of metal ions and organic solvents on enzyme activity was also investigated. PHM-Cu2+ -LASNase retained 45% of its activity against trypsin hydrolysis. Kinetic calculations were performed for L-ASNase and PHM-Cu2+ -L-ASNase. L-ASNase retained 38.98% of its activity after 7 days in artificial, while PHM-Cu2+ -L-ASNase retained 56.87%. The results showed that immobilization of L-ASNase on PHM-Cu2+ -L-ASNase nanoparticles enhanced substrate affinity and promoted the formation of enzyme-substrate compounds.
Benzer Tezler
- Rekombinant geobacıllus kaustophılus L-asparajinaz II enziminin kinetik özelliklerinin belirlenmesi
Determination of kinetic properties of recombinant geobacillus kaustophilus L asparaginase II enzyme
ZEYNEP TANSU ATASAVUM
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
BiyoteknolojiGebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ FATMA İNCİ ÖZDEMİR
- Kemoterapötik Bir Ajan Olan L-asparaginazın Farklı Polimerik Yapılara İmmobilizasyonu ve Karakterizasyonu
Kemoterapötik Bir Ajan Olan L-asparaginazın Farklı Polimerik Yapılara İmmobilizasyonu ve Karakterizasyonu
AHMET ULU
- Biyolojik osmolitlerin termofilik Geobacillus kaustophilus DSM 7263t L-asparajinaz üzerindeki koruyucu etkisinin araştırılması ve akrilamidin giderimindeki etkisinin belirlenmesi
Investigaton of the protective effect ofbiological osmolites on thermophilic Geobacillus kaustophilus DSM 7263t L-asparaginase and determination oftheir effect on acrylamide removal
ÖZGE DEMİRTAŞ
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
BiyoteknolojiGebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. FATMA İNCİ ÖZDEMİR
- Rastgele mutasyonla yüksek L-asparajinaz aktivitesine sahip Enterobacter aerogenes suşlarının eldesi
To get Enterobacter aerogenes strains having high L-asparaginase activities via random mutation
MİRAÇ UÇKUN
- Gestasyonel trofoblastik tanısı alan olguların değerlendirilmesi
Evaluation of cases diagnosed with gestational trophoblastic disease
TUĞBA ALEMDAR
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2021
Kadın Hastalıkları ve DoğumTokat Gaziosmanpaşa ÜniversitesiKadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ SELİM GÜLÜCÜ