Yonuz erik (Prunus divaricata var) polifenol oksidazının biyokimyasal özelliklerinin incelenmesi
Investigation of biochemical properties of Yonuz plum (Prunus divaricata var) polyphenol oxidase
- Tez No: 928310
- Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ ELİF DUYGU KAYA
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Polifenol oksidaz, Saflaştırma, İnhibisyon, Polyphenol oxidase, Purification, Inhibition
- Yıl: 2023
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Iğdır Üniversitesi
- Enstitü: Lisansüstü Eğitim Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyomühendislik ve Bilimleri Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Bu çalışmada polifenol oksidaz enzimi Yonuz erikten (Prunus divaricata var) afinite kromatografisi metodu ile Sepharose-4B-L-tirosin-p-aminobenzoik asit afinite jeli kullanılarak %5,97 verimle 12,80 kat saflaĢtırıldı. Enzimin saflığının kontrolü ve molekül ağırlığının tespiti SDS-poliakrilamid jel elektroforezi ile gerçekleĢtirildi. Saflaştırılan polifenol oksidazın SDS-PAGE ile tek bant halinde, 83,06 kDa ağırlığında olduğu belirlendi. Enzimin monofeolik ve difenolik substratları varlığında aktivite tayini yapıldı ve en iyi aktiviteyi 4-metil katekol varlığında gösterdiği belirlendi. Yonuz erikten saflaĢtırılan, polifenol oksidaz enziminin kinetik karakterizasyonu en yüksek aktivite gösterdiği, 4-metil katekol, katekol ve DHPPA substratları varlığında gerçekleĢtirildi. Enzimin optimum pH değeri 4-metil katekol ve DHPPA substratları kullanıldığında 7,0, katekol substratı kullanıldığında 6,0 olarak belirlendi. Optimum sıcaklık 4-metil katekol, katekol ve DHPPA substratları varlığında sırası ile 20 ℃, 40 ℃ ve 30 ℃ olarak belirlendi. Polifenol oksidazın Km ve Vmax değerleri ile substrat spresifikliğinin bir göstergesi olan Vmax/Km değerleri Lineweaver-Burk grafiklerinden faydalanarak belirlendi. En etkili substratının en yüksek olan Vmax/Km değerine sahip olan 4-metil katekol (1666,67 EU/mL/mM) olduğu, bunu DHPPA (1253,13 EU/mL/mM) ve katekol (452,08/ EU/mL/mM) substratlarının izlediği tespit edildi. Polifenol oksidazının inhibisyonu amacı ile yaygın kullanılan esmerleşme karşıtı kimyasal ajanlar incelendi. Bu amaçla askorbik asit, sitrik asit, sodyum metabisülfit, L- sistein, kafeik asit, fumarik asit, maleik asit ve tartarik asit için PFO aktivitesini yarıya düĢüren inhibitör konsantrasyonu (IC50) değerleri belirlendi. Enzimin en etkili inhibitörünün en düşük IC50 değerine sahip askorbik asit (IC50: 0,0564 mM) olduğu en zayıf inhibitörünün ise en yüksek IC50 değerine sahip sitrik asit (IC50: 17,465 mM) olduğunu belirlenmiştir.
Özet (Çeviri)
In this study, polyphenol oxidase enzyme was purified 12.80 times with 5.97% yield by affinity chromatography method and Sepharose-4B-L-tyrosine-p-aminobenzoic acid affinity gel from Yonuzu plum (Prunus divaricata var). Control of the purity of the enzyme and determination of its molecular weight were carried out by SDS- polyacrylamide gel electrophoresis. The purified polyphenol oxidase was determined by SDS-PAGE to be a single band, weighing 83.06 kDa. The activity of the enzyme was determined in the presence of monopheolic and diphenolic substrates and it was determined that it showed the best activity in the presence of 4-methyl catechol. Kinetic characterization of the polyphenol oxidase enzyme purified from plum was performed in the presence of the substrates 4-methyl catechol, catechol and DHPPA, where it showed the highest activity. The optimum pH value of the enzyme was determined as 7.0 when 4-methyl catechol and DHPPA substrates were used, and 6.0 when the catechol substrate was used. The optimum temperature was determined as 20 ℃, 40 ℃ and 30 ℃ in the presence of 4-methyl catechol, catechol and DHPPA substrates, respectively. Km and Vmax values of polyphenol oxidase and Vmax/Km values, which are an indicator of substrate specificity, were determined using Lineweaver-Burk graphs. The most effective substrate was 4-methyl catechol (1666.67 EU/mL/mM), which had the highest Vmax/Km value, followed by DHPPA (1253.13 EU/mL/mM) and catechol (452.08/EU/mL). /mM) substrates were detected. Commonly used anti-browning chemical agents for the inhibition of polyphenol oxidase were examined. For this purpose, inhibitor concentration (IC50) values that reduce PFO activity by half were determined for ascorbic acid, citric acid, sodium metabisulfite, L-cysteine, caffeic acid, fumaric acid, maleic acid and tartaric acid. It was determined that the most effective inhibitor of the enzyme was ascorbic acid (IC50: 0.0564 mM) with the lowest IC50 value, and the weakest inhibitor was citric acid (IC50: 17.465 mM) with the highest IC50 value.
Benzer Tezler
- Makro besin elementlerinin (NPK) İzmir'de Mayıs ayında açığa dikilen 4-6 cm çevre büyüklüğündeki Gladiolus cinsine ait“hunting song”ve“Novalüx”kültür çeşitlerinin yumrularının gelişmeleri üzerine etkileri
Başlık çevirisi yok
TAHA ALİ AMEN
Yüksek Lisans
Türkçe
1985
ZiraatEge ÜniversitesiPeyzaj Mimarlığı Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ADNAN HATİPOĞLU
- Çeltikte farklı tuz konsantrasyonlarında bazı agronomik karakterlerin varyasyonu
Başlık çevirisi yok
GÜLNAZ AGAR
- Örgüt-çevre yönetim ilişkilerinde değişmenin yönü ve bir araştırma denemesi
Başlık çevirisi yok
ENDER YÖNET
- Pik demiri ve karbon çeliğinin sulu çözeltiler içindeki korozyon hızının tayini
Determination of the rate of corrosion of the cast iran and carbon steel in the aqueous solutions
EMİNE NAZAN ÜNAL
Yüksek Lisans
Türkçe
1985
Kimya MühendisliğiGazi ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. HAYRİ YALÇIN
- Çekirdeksiz kuru üzümde uygulanan politikanın Ege Bölgesinde üretim ve üretici açısından sonuçlarının değerlendirilmesi
Başlık çevirisi yok
GÜVEN ÖZERİN