In Vitro elde edilen sığır blastosistlerinde blastosist sıvısından genomik DNA izolasyonu
Isolation of genomic DNA from blastocyst fluid in bovine blastocysts produced In Vitro
- Tez No: 930066
- Danışmanlar: PROF. DR. MUSTAFA KAYMAZ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Veteriner Hekimliği, Veterinary Medicine
- Anahtar Kelimeler: Dizi analizi-DNA, Fertilizasyon-in vitro, Üreme biyoteknolojisi, Sequence analysis-DNA, Fertilization-in vitro, Reproductive biotechnology
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ankara Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Veteriner Doğum ve Jinekoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Biyoteknoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Bu tez çalışmasında in vitro koşullarda üretilen sığır blastosistlerine iç hücre kümesi ve trofektoderm biyopsisi ile blastosist sıvı aspirasyonu yapılmış, elde edilen biyopsi örneklerine yapılan genetik analizlerin sonuçları karşılaştırılarak blastosist sıvısındaki genomik deoksiribonükleik asit (gDNA) varlığının araştırılması amaçlanmıştır. Ayrıca çalışmada defined medyum (Grup I) ve undefined medyum (Grup II) olmak üzere iki farklı kültür solüsyonu kullanılmış ve blastosist elde etme yüzdesi ile biyopsi örneklerine yapılan genetik analizlerin sonuçlarının karşılaştırılması amaçlanmıştır. Çalışmada Ankara ve Konya illerinde bulunan mezbahalardan toplanan ovaryumlar (Grup I, n: 30; Grup II, n: 54) kullanıldı. Defined medyum (Grup I, n:112) ile elde edilen oositler in vitro maturasyon, in vitro fertilizasyon ve in vitro embriyo kültürüne alındı. In vitro kültürün 7.-9. günü Kalite kodu I olan expanded blastosistlere (Grup I, n:29) sırasıyla blastosist sıvı aspirasyonu, trofektoderm biyopsisi ve iç hücre kümesi biyopsisi (Grup I, n:20) mikromanipülatör ile yapıldı. Undefined medyum (Grup I, n:226) ile elde edilen oositler in vitro maturasyon, in vitro fertilizasyon ve in vitro embriyo kültürüne alındı. In vitro kültürün 7.-9. günü Kalite kodu I olan expanded blastosistlere (Grup II, n:70) sırasıyla blastosist sıvı aspirasyonu, trofektoderm biyopsisi ve iç hücre kümesi biyopsisi (Grup II, n:20) mikromanipülatör ile yapıldı. Blastosist elde etme yüzdesi; Grup I (%25,89) ve Grup II (%30,97) olarak bulundu. Biyopsi örneklerinden elde edilen deoksiribonükleik asit (DNA) kalitesi DNA zenginleştirme işlemi sonrası nanodrop konsantrasyon ölçümü ile belirlendi. Nanodrop ölçümler karşılaştırıldığında gruplar arasında fark bulunamadı. Embriyoların elde edildiği sığırlara ait uterus dokularından (Grup I, n:10; Grup II, n:16) örnekler alındı ve DNA izolasyonu yapıldı. DNA zenginleştirme ve DNA izolasyonu işlemi sonrası Grup I ve uterus doku örnekleri ile Grup II ve uterus doku örnekleri 19 primer içeren kısa tandem tekrar dizileri analizine alındı. Bu analiz ile anneden aktarılan allel genlerin varlığı araştırıldı. Grup I ve Grup II iç hücre kümesi ve trofektoderm biyopsilerinde anne ile uyum bulunurken, blastosist sıvısında Grup II'de bir örnekte iki primer belirlendi diğer örneklerde anne ile uyum belirlenemedi. Bu çalışmada, blastosist sıvısının miktarının azlığı nedeniyle tüm genom amplifikasyonunda yeterli DNA edilemeyeceği ve daha farklı analiz yöntemleri ile çalışmaların yapılması gerektiği kanısına varıldı.
Özet (Çeviri)
In this study, inner cell mass and trophectoderm biopsy and blastocyst fluid aspiration were performed on bovine blastocysts produced under in vitro conditions, and it was aimed to investigate the presence of genomic deoxyribonucleic acid (gDNA) in the blastocyst fluid by comparing the results of genetic analyses performed on the biopsy samples obtained. In addition, two different culture solutions, defined medium (Group I) and undefined medium (Group II), were used in the study and it was aimed to compare the percentage of blastocysts obtained and the results of genetic analysis of biopsy samples. Ovaries collected from slaughterhouses in Ankara and Konya provinces (Group I, n: 30; Group II, n: 54) were used in the study. Oocytes obtained with defined medium (Group I, n: 112) were cultured for in vitro maturation, in vitro fertilization and in vitro embryo culture. On the 7th-9th day of in vitro culture, blastocyst fluid aspiration, trophectoderm biopsy and inner cell mass biopsy (Group I, n:20) were performed with micromanipulator on expanded blastocysts (Group I, n:29) with Quality code I, respectively. Oocytes obtained with undefined medium (Group I, n:226) were cultured for in vitro maturation, in vitro fertilization and in vitro embryo culture. On the 7th-9th day of in vitro culture, blastocyst fluid aspiration, trophectoderm biopsy and inner cell mass biopsy (Group II, n:20) were performed with micromanipulator on expanded blastocysts with Quality code I (Group II, n:70), respectively. The percentage of blastocyst retrieval was found as Group I (25.89%) and Group II (30.97%). The quality of deoxyribonucleic acid (DNA) obtained from biopsy samples was determined by nanodrop concentration measurement after DNA enrichment. No difference was found between the groups when nanodrop measurements were compared. Samples were taken from the uterine tissues of cattle from which embryos were obtained (Group I, n:10; Group II, n:16) and DNA isolation was performed. After DNA enrichment and DNA isolation, Group I and uterine tissue samples and Group II and uterine tissue samples were subjected to short tandem repeat sequence analysis with 19 primers. With this analysis, the presence of maternally transmitted allelic genes was investigated. While maternal concordance was found in Group I and Group II inner cell mass and trophectoderm biopsies, two primers were detected in one sample in Group II in blastocyst fluid and no maternal concordance was detected in the other samples. In this study, it was concluded that due to the small amount of blastocyst fluid, whole genome amplification of DNA was not sufficient and studies with different analysis methods should be performed.
Benzer Tezler
- Ovulasyon indüksiyonu tedavisinde folliküler gelişimin ultrasonografik takibi
Başlık çevirisi yok
MERİH BAYRAM
- Bazı esterlerin kinetik incelenmesi ve termodinamik parametrelerin belirlenmesi
Kinetic study and detesmination of thermodnamic parameters of some esters
İBRAHİM TAŞ
- İzmir'de bazı yolların kapatılarak yaya bölgeleri oluşturma da kent peyzajını geliştirme açısından yeniden planlanması üzerinde araştırmalar
Başlık çevirisi yok
BAHAR TÜRKYILMAZ
- Atherosklerotik kalp hastalıklarında risk faktörleri
Risk factors in the coronary artery disease
MURAT SUHER
