Menstrual kandan izole edilen kök hücrelerin metformin uygulamasına cevabı ve infertilite ile ilişkisi
Response of stem cells isolated from menstrual blood to metformin administration and its relationship with infertility
- Tez No: 940710
- Danışmanlar: PROF. DR. HAFİZE SEDA VATANSEVER, DR. HİLAL KABADAYI ENSARİOĞLU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Histoloji ve Embriyoloji, Histology and Embryology
- Anahtar Kelimeler: Menstrual kan kök hücresi, infertilite, fertilite, metformin, kollajenaz I, Menstrual blood stem cell, infertility, fertility, metformin, collagenase I
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Manisa Celal Bayar Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 76
Özet
Giriş ve Amaç: Açıklanamayan infertilite sebebi belli olmayan, kadın veya erkeğe ait infertilite sebeplerinin tespit edilemediği bir durum olması nedeni ile günümüzde en önemli araştırma konularındandır. Diyabet hastalığı için kullanılan metforminin bu mekanizma üzerinde etkisi olduğu bilinmektedir. Çalışmada menstrual kandan izole edilen endometrial kaynaklı kök hücreler, sebebi açıklanamayan hastalar da olduğu gibi infertilite sebebini oluşturabilecek mekanizmaların çalışılabileceği bir kaynak olarak seçilmiştir. Bu doğrultuda infertil ve fertil hastalardan alınan menstrual kan örneklerinden kök hücre elde edilmesi, kültürü ve 30 gün metformin uygulaması sonrasında değişikliklerin immunositokimyasal analizlerle incelenmesi amaçlanmıştır. Yöntem: Fertil ve infertil hastalardan alınan menstrual kan örneklerinden kollajenaz I ve ficoll protokolleri ile kök hücreler (MenKH) elde edildi. Hücreler kültür vasatında (DMEMF12, %5 fötal sığır serumu, %1 Penisilin-streptomisin) kültüre edildikten sonra kök hücre karakterizasyonları CD34 ve CD44 indirekt immunoperkosidaz boyaması ve adipojenik, kondrojenik ve osteojenik soylara farklılaşma potansiyelleri sırasıyla Oil Red, Alcian Blue ve Alizarin Res S boyamaları ile gerçekleştirildi. Fertil ve infertil hastalardan elde edilen MenKH'lerin kontrol (grup 1 ve grup 2, sırasıyla) ve metformin uygulanan grup olarak (grup 3 ve grup 4, sırasıyla) ayrıldı. Metformin insanda kullanılan tedavi dozu (800 mg/gün) ve uygulama süresi (30 gün) dikkate alınarak uygulandı (9 x 10-7gr/ml). Tüm gruplarda OCT2, OCT3/4, MATE1, αVβ3 integrin, MUC1, LIF ve IGF-1 dağılımları indirekt immunositokimyasal analiz ile değerlendirildi. Bulgular: Ficoll ve kollajenaz I protokolü sonrasında kollajenaz I ile elde edilen hücrelerin kültürün 1. haftasında %85-90 konfluent olması, artan pasaj sayısında fibroblast benzeri özelliklerini koruduklarının izlenmesi üzerine MenKH'lerin eldesinde bu protokolün uygun olduğuna karar verildi. MenKH'lerde CD44 immunoreaktivitesi orta şiddette pozitif, CD34 immunoreaktivitesi ise negatif idi. MenKH'lerin 21 gün süren farklılaşmasında, Kollajenaz I protokolüyle elde edilen MenKH'lerde 7. gününde Oil Red ile pozitif boyanma saptanır iken, kondrojenik ve osteojenik farklılaşma boyamaları 14. günde az olmakla birlikte, 14. ve 21. günlerde saptandı. MATE1 immunoreaktivitesi grup 1 (fertil, kontrol) ve grup 4'de (infertil metformin uygulanan) kuvvetli (+++) şiddette pozitif iken, grup 2 (infertil, kontrol) ve grup 3'te (fertil, metformin uygulanan) orta (++) şiddette idi. OCT-2 immunoreaktivitesi grup 1 ve grup 3'te orta (++) şiddette, grup 2 ve grup 4'te ise kuvvetli (+++) şiddette idi. OCT3/4 immunoreaktivitesi grup 1, grup 2 ve grup 4'te negatif (-) iken grup 3'te zayıf (+) şiddette idi. IGF1 immunoreaktivitesinin grup 1 ve grup 3'te negatif (-) iken grup 2'de orta (++) şiddette, grup 4'te ise zayıf (+) şiddette idi. LIF immunoreaktivitesi grup 1 ve grup 2'de negatif (-) iken, grup 3 ve grup 4'te zayıf (+) şiddette idi. Tartışma: Kollajenaz I protokolü ile fertil ve infertil hasta örneklerinden elde edilen hücrelerin ficoll ile elde edilen hücrelere göre daha stabil ve morfolojik olarak daha tutarlı olması, MenKH elde edilmesinde uygun olan protokol olduğunu göstermektedir. MenKH'lerin hem mezenkimal kök hücre kaynağı olarak hem de infertil hastalarda kullanılan ilaç ile deneme çalışmalarında kullanılabilecek hücre kaynağı olabileceği sonucuna varıldı.
Özet (Çeviri)
Introduction and Aim: Unexplained infertility is one of the most important research topics today because it is a condition in which the cause of infertility is not clear and the causes of female or male infertility cannot be determined. Metformin used for diabetes is known to have an effect on this mechanism. In this study, endometrial-derived stem cells isolated from menstrual blood were chosen as a source to study the mechanisms that may cause infertility as in patients with unexplained infertility. Accordingly, it was aimed to obtain and culture stem cells from menstrual blood samples obtained from infertile and fertile patients and to examine the changes after 30 days of metformin administration by immunocytochemical analysis. Methods: Stem cells (MenSC) were derived from menstrual blood samples obtained from fertile and infertile patients by collagenase I and ficoll protocols. After the cells were cultured in culture medium (DMEMF12, 5% Fetal bovine serum, 1% Penicillin-streptomycin), stem cell characterization was performed by CD34 and CD44 indirect immunopercosidase staining and differentiation potential to adipogenic, chondrogenic and osteogenic lineages was performed by Oil Red, Alcian Blue and Alizarin Res S staining, respectively. MenSCs obtained from fertile and infertile patients were divided into control (group 1 and group 2, respectively) and metformin treated group (group 3 and group 4, respectively). Metformin was administered at the same therapeutic dose (800 mg/day) and duration of administration (30 days) as used in humans (9 x 10-7g/ml). OCT2, OCT3/4, MATE1, αVβ3 integrin, MUC1, LIF and IGF-1 distributions in all groups were evaluated by indirect immunocytochemical analysis. Results: After the Ficoll and Collagenase I protocol, it was decided that Collagenase I protocol was appropriate for obtaining MenSCs since the cells obtained with collagenase I were 85-90% confluent in the 1st week of culture and maintained their fibroblast-like properties with increasing passage number. CD44 immunoreactivity was moderately positive and CD34 immunoreactivity was negative in MenSC. In the differentiation of MenSCs lasting 21 days, positive staining with Oil Red was detected on the 7th day in MenSCs obtained with Collagenase I protocol, while chondrogenic and osteogenic differentiation staining was less on the 14th day, but was detected on the 14th and 21st days. MATE1 immunoreactivity was strongly (+++) positive in group 1 (fertile, control) and group 4 (infertile, metformin treated), while it was moderate (++) positive in group 2 (infertile, control) and group 3 (fertile, metformin treated). OCT-2 immunoreactivity was moderate (++) in group 1 and group 3 and strong (+++) in group 2 and group 4. OCT3/4 immunoreactivity was negative (-) in group 1, group 2 and group 4 and weak (+) in group 3. IGF1 immunoreactivity was negative (-) in group 1 and group 3, moderate (++) in group 2 and weak (+) in group 4. LIF immunoreactivity was negative (-) in group 1 and group 2, but weak (+) in group 3 and group 4. Conclusion: The fact that the cells obtained from fertile and infertile patient samples with the Collagenase I protocol were more stable and morphologically more consistent than the cells obtained with ficoll indicates that it is the appropriate protocol for obtaining MenSCs. It was concluded that MenSCs can be used both as a source of mesenchymal stem cells and as a cell source that can be used in trial studies with drugs used in infertile patients.
Benzer Tezler
- Collagen caffolds with in situ grown calcium phosphate for osteogenic differentiation of Wharton's jelly and menstrual blood stem cells
Göbek kordonu ve menstrüel kandan izole edilen kök hücrelerin kemiğe farklılaştırılması için hazırlanmış in situ kalsiyum fosfat içeren kollajen iskeleler
ÖZGE KARADAŞ
Yüksek Lisans
İngilizce
2011
BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoteknoloji Bölümü
PROF. DR. VASIF NEJAT HASIRCI
DOÇ. DR. GAMZE TORUN KÖSE
- Comparison of enzymatic and non-enzymatic isolation methods for menstrual blood mesenchymal stem cells in maintenance of stemness
Menstrüel kan mezenkimal kök hücrelerde kök hücre olma özelliğinin enzimatik ve enzimatik olmayan izolasyon yöntemleri ile karşılaştırılması
SERRA ŞENER
Yüksek Lisans
İngilizce
2022
BiyoteknolojiYeditepe ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. DİLEK TELCİ
PROF. DR. AHMET CEM BATUKAN
- Menstrüel / periferik kan ayrımında immünokromatografik d-dimer testinin spesifikliğinin postmortem kan örnekleri üzerinde araştırılması
Investigation of the specificity of immunochromatographic D-dimer test used in menstrual / peripheral blood separation on postmortem blood samples
ÖMER FARUK GEVŞEMEZOĞLU
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2020
Adli Tıpİstanbul Üniversitesi-CerrahpaşaAdli Tıp Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜRSEL ÇETİN
- Examination of various mirna markers in the differentiation of menstrual blood from peripheral blood
Menstruel kan-periferal kan ayırımında çeşitli mirna belirteçlerinin incelenmesi
GERTRUDE NAMULONDO
Yüksek Lisans
İngilizce
2023
Adli TıpÇukurova ÜniversitesiAdli Bilimler Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AYŞE SERİN