Functional analysis of HSD3B2 gene mutation
HSD3B2 gen mutasyonunun fonksiyonel analizi
- Tez No: 955844
- Danışmanlar: PROF. DR. BAYRAM YILMAZ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Fizyoloji, Physiology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2024
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Yeditepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Fizyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 72
Özet
HSD3B3 eksikliği, HSD3B2 genini inaktive edici mutasyondan kaynaklanan konjenital adrenal hiperplazinin nadir bir şeklidir. Dünyada sık görülmese de HSD3B2 eksikliğinin görülme sıklığı Türkiye'de daha yüksektir. Bu hastalık, adrenal bez ve gonadlarda adrenal steroid sentezindeki kusurlar olarak tanımlanır. Bu nedenle mutasyon bölgesinin anlaşılması ve karakterizasyonu çok önemlidir. Ayrıca mutasyonun olası etkisi, mutasyonun HSD3B2 genindeki konumuna bağlı olarak değişebilmektedir. Bu çalışmanın amacı, HSD3B2 enziminin p.L304P mutantı ile in vitro karakterizasyonunu belirlemek ve moleküler yapı ile klinik semptomlar arasındaki ilişkiyi anlamaya çalışmaktır. Ayrıca p.L304P mutasyonunun, HSD3B2 enzimatik aktivitesi ve 17 OH pregnenolon dönüşüm hızı üzerindeki etkisi araştırıldı. Deneyde pCMV3-HSD3B2 vektörü kullanılmış ve alan hedefli mutajenez ile p.L304P mutasyonu oluşturulmuştur. Tüm plazmitler DH5 alfaya transformasyon ile aktarıldı. p.L304P mutasyonunun ve yabani tip HSD3B2 geninin sekansı, sanger dizilimi ile kontrol edildi. Daha sonra yabani tip ve mutant plazmitler HEK293T hücre hattına transfekte edildi. Transfeksiyondan sonra hücreler, DMEM içinde çözünen 17 hidroksipregnenolon ile işleme tabi tutuldu. İşlem farklı zaman aralıklarında ve farklı substrat konsantrasyonlarında yapıldı. Son aşamada DMEM çıkarıldı ve LCMS/MS ile 17 hidroksiprogesteron miktarı ölçüldü. Sonuç olarak, deneysel bulgumuz, mutasyonun dramatik bir şekilde 17 hidroksiprogesteron seviyesinde düşüşe neden olduğunu gösterdi. Ayrıca 17 hidroksipregnenolon miktarının yabani tipte mutant hücre hatlarına kıyasla daha yüksek olduğu tespit edildi.
Özet (Çeviri)
HSD3B3 deficiency is rare form of the congenital adrenal hyperplasia arised from the inactivating mutation of HSD3B2 gene (3β-hydroxysteroid dehydrogenase). Even though it is not frequently seen in the world, the prevalence of the HSD3B2 deficiency is higher specifically in the Turkey. This disease is defined as defects in adrenal steroid synthesis in adrenal gland and gonads. Therefore, understanding and characterisation of the mutational area is very crucial. Also, the possible influence of the mutation can be changed depending on the position of the mutation in HSD3B2 gene. The aim of this study to determine in vitro characterisation of the HSD3B2 enzyme with p.L304P mutant and try to understand the relationship the molecular structure and clinical symptoms. Also, influence of the p.L304P mutation on HSD3B2 enzymatic activity and rate of 17 OH pregnenolone conversion was investigated. In the experiment, pCMV3-HSD3B2 vector was used and target p.L304P mutation was created with site directed mutagenesis. All plasmids were transformed into the DH5 alpha. The presence of the p.L304P mutation and wild type HSD3B2 gene were controlled by sanger sequencing. Later, the plasmids with wild type and mutant were transfected into the HEK293T cell line. After the transfection, the cells were treated with 17 hydroxypregnenolone that is dissolved in the DMEM. The treatment was done at different time interval and different substrate concentrations. At last step, the DMEM was removed and the amount of 17 hydroxyprogesterone was measured with LCMS/MS. In conclusion, our experimental finding showed that the mutation dramatically cause decline in 17 hydroxyprogesterone. Also, the amount of the 17 hydroxypregnenolone was detected higher in wildtype as compared with mutant cell lines.
Benzer Tezler
- Premenapozal hirsut/hiperandrojenizmli kadınlarda CYP21A2, CYP11B1, HSD3β2 ve NR3C4 (AR) lokuslarına ait genetik değişikliklerin araştırılması
Study of polymorphisms of CYP11b1, CYP21a2, 3βHSD2 and NR3C4 (AR genes in hirsute/hyperandrogenemia women
SEHER POLAT
Doktora
Türkçe
2015
Moleküler TıpErciyes ÜniversitesiTıbbi Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MUNİS DÜNDAR
- Thermus Scotoductus K6' Dan İzole Edilen Yeni, Kriptik, Küçük, Çok Kopyali Bir Plazmitin (pHIG22) Fonksiyonel Analizi
Functional Analysis Of A Novel, Cryptic, Small And Multicopy Plasmid (pHIG22) From Thermus Scotoductus K6
HALİL İBRAHİM GÜLER
Doktora
Türkçe
2015
BiyolojiKaradeniz Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ALİ OSMAN BELDÜZ
- Subtractıve cDNA hibridizasyon kütüphanesinden seçilen taube nuss geninin fonksiyonel analizi
Functional Analysis of Taube Nuss Gene Selected from Subtractive cDNA Hybridization Library.
AYŞE BERNA YÜZBAŞIOĞULLARI
Yüksek Lisans
Türkçe
2009
Genetikİstanbul ÜniversitesiGenetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NİHAN ERGİNEL-ÜNALTUNA
- Functional analysis of fungal effector candidate SSP (small secreted protein) genes of septoria leaf blotch pathogen (Zymoseptoria tritici) in wheat
Buğdayda sorun olan septorya yaprak lekesi (Zymoseptoria tritici) patojeninde fungal efektör adayı SSP (small secreted protein) genlerinin fonksiyonel analizi
ZEMRAN MUSTAFA
Doktora
İngilizce
2019
BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MAHİNUR S. AKKAYA
DR. ÖĞR. ÜYESİ FATİH ÖLMEZ
- Functional analysis of a mirna putatively involved in powdery mildew disease susceptibility in barley
Arpada külleme hastalığı oluşumunda görev aldığı varsayılan bir mirna?nın fonksiyonel analizi
GÜLAY DAĞDAŞ
Yüksek Lisans
İngilizce
2009
BiyokimyaOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. MAHİNUR S. AKKAYA