Geri Dön

Çeşitli klinik örneklerden üretilen candida auris izolatlarının antifungal duyarlılıklarının ve virülans faktörlerinin araştırılması

Investigation of antifungal susceptibility and virulence factors of candida auris isolates recovered from various clinical samples

PDF İndir

  1. Tez No: 957064
  2. Yazar: ASLI ÇELİKKOL
  3. Danışmanlar: PROF. DR. AYDIN KARAARSLAN
  4. Tez Türü: Tıpta Uzmanlık
  5. Konular: Mikrobiyoloji, Microbiology
  6. Anahtar Kelimeler: Candida auris, Antifungal Duyarlılık, EUCAST, CLSI, Virülans, Candida auris, Antifungal Susceptibility, EUCAST, CLSI, Virulence
  7. Yıl: 2025
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Ankara Üniversitesi
  10. Enstitü: Tıp Fakültesi
  11. Ana Bilim Dalı: Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 121

Özet

Amaç: Candida auris, tanımlandığı ilk günden bu yana gösterdiği hızlı küresel yayılım, antifungal ilaçlara karşı çoklu direnç geliştirme kapasitesi ve virülans özellikleri ile önemli bir halk sağlığı sorunu haline gelmiştir. Çalışmamızda Ankara Üniversitesi Tıp Fakültesi İbn-i Sina Hastanesi Merkez Mikrobiyoloji Laboratuvarı'na gelen çeşitli klinik örneklerde üreyen Candida auris izolatlarının, Avrupa Antibiyotik Duyarlılık Testleri Komitesi (EUCAST) ve Klinik ve Laboratuvar Standartları Enstitüsü (CLSI) referans sıvı mikrodilüsyon yöntemi ile antifungal duyarlılıklarının belirlenmesi, her iki yöntem arasındaki uyumun değerlendirilmesi ve izolatların virülans özelliklerinin araştırılması amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem: Çalışmamızda, laboratuvarımızda çeşitli klinik örneklerin kültürlerinden izole edilen 90 C. auris izolatına EUCAST ve CLSI klavuzlarına göre sıvı mikrodilüsyon yöntemi ile flukonazol, vorikonazol, isavukonazol, anidulafungin, kaspofungin, mikafungin ve amfoterisin B için antifungal duyarlılık testi (AFDT) çalışılmıştır. Virülans faktörleri fenotipik yöntemlerle araştırılmıştır. Salgısal aspartil proteinaz aktivitesinin belirlenmesinde %1'lik sığır serum albümin içeren agar besiyeri; fosfolipaz aktivitesini belirlenmesinde yumurta sarılı agar besiyeri; hemolizin aktivitesinin belirlenmesinde %7 oranında koyun kanı içeren Sabouraud Dekstroz Agar (SDA) besiyeri kullanılmıştır. Biyofilm üretimi modifiye mikroplak yöntemi ile değerlendirilmiştir. Bulgular: AFDT ile elde edilen MİK değerleri, EUCAST ve CLSI kılavuzlarında C. auris için klinik sınır değerler tanımlanmadığından, Hastalık Kontrol ve Önleme Merkezi (CDC) tarafından önerilen geçici sınır değerlere göre yorumlanmıştır. Her iki yöntemle de izolatların tamamı (%100) flukonazole dirençli (MİK=64-512 µg/ml) bulunmuştur. Ekinokandin direnci EUCAST yöntemine göre mikafungin (MİK=0,125-≥16 µg/ml) ve anidulafungin (0,125-≥16 µg/ml) için %2,22, kaspofungin (MİK=0,25-≥16 µg/ml) için %3,33 iken, CLSI yöntemine göre mikafungin (MİK=0,125-4 µg/ml), anidulafungin (MİK=0,25-4 µg/ml) ve kaspofungin (MİK=0,25-4 µg/ml) için %2,22 olarak belirlenmiştir. Amfoterisin B direnci ise EUCAST yöntemiyle %13,33 (MİK=1-2 µg/ml) ve CLSI yöntemiyle %4,44 (MİK=1-2 µg/ml) olarak tespit edilmiştir. Vorikonazol ve isavukonazol için geçici sınır değeri belirlenmediğinden duyarlılık kategorileri belirlenememiştir. Vorikonazol için MİK değerleri EUCAST metodolojisi ile 0,125-0,5 µg/ml (MİK50: 0,5 µg/ml, MİK90: 0,5 µg/ml) ve CLSI metodolojisi ile 0,25-0,5 µg/ml (MİK50: 0,5 µg/ml, MİK90: 0,5 µg/ml) aralığında saptanmıştır. İsavukonazol için MİK değerleri EUCAST ile 0,125-0,5 µg/ml (MİK50: 0,25 µg/ml, MİK90: 0,25 µg/ml) ve CLSI ile 0,125-0,25 µg/ml (MİK50: 0,25 µg/ml, MİK90: 0,25 µg/ml) aralığında bulunmuştur. EUCAST ve CLSI klavuzlarına göre sıvı mikrodilüsyon yöntemleri arasında yüksek düzeyde esansiyel ve kategorik uyum saptanmıştır. Amfoterisin B ve vorikonazol için esansiyel uyum %100, flukonazol ve isavukonazol için %98,88, mikafungin ve kaspofungin için %97,77, anidulafungin için ise %96,66 olarak hesaplanmıştır. Kategorik uyum oranları ise flukonazol, anidulafungin ve mikafungin için %100, kaspofungin için %98,88, amfoterisin B için %91,11 olarak bulunmuştur. İki yöntemle elde edilen geometrik ortalama MİK, MİK50 ve MİK90 değerleri arasında ise fark bir kat dilüsyonu geçmemiştir. İzolatların %70'inde güçlü salgısal aspartil proteinaz aktivitesi saptanırken, hiçbir izolatta fosfolipaz ve hemolizin aktivitesi tespit edilmemiştir. Biyofilm üretimi izolatların %35,55 inde pozitif olarak saptanırken, biyofilm üretim düzeyleri %30'unda zayıf, %2,22'sinde orta, %3,33'ünde güçlü olarak belirlenmiştir. Antifungaller için elde edilen MİK değerleri ile salgısal aspartil proteinaz ve biyofilm üretimi arasında anlamlı bir ilişki saptanmamıştır. Sonuç: C. auris izolatlarında flukonazole karşı yüksek direnç oranı dikkat çekerken, ekinokandinlere ve amfoterisin B'ye karşı sınırlı düzeyde direnç saptanmıştır. Ekinokandinlere karşı tespit edilen düşük direnç oranları, bu antifungallerin C. auris enfeksiyonlarının tedavisinde ilk basamakta tercih edilmesini desteklemektedir. Vorikonazol ve isavukonazol için düşük MİK değerleri gözlenmekle birlikte, geçici sınır değerlerin olmaması yorumlamayı kısıtlamaktadır. İki yöntem arasında hem esansiyel hem de kategorik uyum oranlarının yüksek olması, her iki yöntemin karşılaştırılabilirliğini ortaya koymuştur. İzolatların büyük çoğunluğunda proteinaz aktivitesinin saptanması, bu enzimin C. auris'in virülansında önemli olabileceğini düşündürmektedir. Bu çalışma, C. auris izolatlarına ait antifungal duyarlılık ve virülans verilerini eş zamanlı sunarak, yerel epidemiyolojik değerlendirmelere bilimsel katkı sağlamaktadır.

Özet (Çeviri)

Aim: Candida auris has become an important public health problem due to its rapid global spread, its capacity to develop multiple resistance to antifungal drugs and its virulence since its first identification. The aim of this study was to determine the antifungal susceptibility of C. auris strains grown on isolated from various clinical specimens submitted to Ankara University Faculty of Medicine Ibn-i Sina Hospital Central Microbiology Laboratory by European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST) and Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) reference broth microdilution methods, to evaluate the agreement between both methods and to investigate the virulence characteristics of the isolates. Materials and Methods: In our study, antifungal susceptibility tests (AFST) for fluconazole, voriconazole, isavuconazole, isavuconazole, anidulafungin, caspofungin, micafungin and amphotericin B were performed by broth microdilution method according to the EUCAST and CLSI guidelines on 90 Candida auris isolates isolated from cultures of various clinical samples in our laboratory. Virulence factors were investigated by phenotypic methods. Agar medium containing 1% bovine serum albumin was used to determine secretory aspartic proteinase activity; egg yolk agar medium was used to determine phospholipase activity; Sabouraud Dextrose Agar (SDA) medium containing 7% sheep blood was used to determine hemolysin activity. Biofilm production was evaluated by modified microplate method. Results: MIC values obtained by AFST were interpreted according to the tentative breakpoint recommended by the Center for Disease Control and Prevention (CDC), since clinical or epidemiological cut-off values for C. auris species are not defined in EUCAST and CLSI guidelines. All isolates (100%) were resistant to fluconazole (MIC=64-512 µg/ml) by both methods. Echinocandin resistance was 2.22% for micafungin (MIC=0,125-≥16 µg/ml) and anidulafungin (MIC=0,125-≥16 µg/ml) and 3.33% for caspofungin (MIC=0,25-≥16 µg/ml) according to the EUCAST method, while it was 2.22% for micafungin (MIC=0,125-4 µg/ml), anidulafungin (MIC=0,25-4 µg/ml) and caspofungin (MIC=0,25-4 µg/ml) according to the CLSI method. Amphotericin B resistance was 13.3% by EUCAST methodology and 4.44% by CLSI methodology. Susceptibility categories could not be determined for voriconazole and isavuconazole since tentative cut-off values also were not determined by the CDC. MIC values for voriconazole were 0.125-0.50 µg/ml (MIC50: 0.50 µg/ml, MIC90: 0.50 µg/ml) with the EUCAST methodology and 0.25-0.5 µg/ml (MIC50: 0.50 µg/ml, MIC90: 0.50 µg/ml) with the CLSI methodology. MIC values for isavuconazole were found in the range of 0.125-0.50 µg/ml (MIC50: 0.25 µg/ml, MIC90: 0.25 µg/ml) with the EUCAST methodology and 0.125-0.25 µg/ml (MIC50: 0.25 µg/ml, MIC90: 0.25 µg/ml) with the CLSI methodology. A high level of essential and categorical agreement was found between broth microdilution methods according to the EUCAST and CLSI guidelines. Essential agreement was 100% for amphotericin B and voriconazole, 98.88% for fluconazole and isavuconazole, 97.77% for micafungin and caspofungin, and 96.66% for anidulafungin. Categorical agreement rates were 100% for fluconazole, anidulafungin and micafungin, 98.88% for caspofungin and 91.11% for amphotericin B. The difference between the geometric mean MIC, MIC50 and MIC90 values obtained by the two methods did not exceed one fold dilution. Strong secretory aspartic proteinase activity was detected in 70% of the isolates, while phospholipase and hemolysin activity were not detected in any isolate. Biofilm production was positive in 35.55% of the isolates, while biofilm production levels were weak in 30%, moderate in 2.22% and strong in 3.33%. No significant correlation was found between the MIC values obtained for antifungals and secretory aspartyl proteinase and biofilm production. Conclusions: C. auris isolates showed high resistance rates to fluconazole and limited resistance to echinocandins and amphotericin B. The low resistance rates detected against echinocandins support the preference of these antifungals in the first-line treatment of C. auris infections. Although low MIC values were observed for voriconazole and isavuconazole, the lack of provisional cut-off values limits interpretation. The high rates of both essential and categorical agreement between the two methods demonstrated the comparability of both methods. The detection of proteinase activity in the majority of isolates suggests that this enzyme may be important in the virulence of C. auris. This study provides a scientific contribution to local epidemiologic evaluations by presenting antifungal susceptibility and virulence data of C. auris isolates simultaneously.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    4508

    Kandida'ların tiplendirilmesinde rutin testlerin uygulanması ve salgısal asid proteinaz enziminin saptanması

    Başlık çevirisi yok

    HALE ELNAHİ

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    1988

    MikrobiyolojiGazi Üniversitesi

    Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. SEMRA KUŞTİMUR

  2. Tez No

    299518

    Actinomyces'in insan serviko-vajinal örnekleri ile sitolojik, mikrobiyolojik ve polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) yöntemleri kullanılarak araştırılması

    The investigation of actinomyces using cytological, microbiological and polymerase chain reaction (PCR) techniques in human cervico-vaginal smears

    DİLEK KAYA

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    BiyolojiHacettepe Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ŞAYESTE DEMİREZEN

  3. Tez No

    362428

    Stafilokok türlerinin ayırımında kullanılan invitro testlerin sonuçları

    Başlık çevirisi yok

    YAVUZ BOZKURT

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    1990

    Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik MikrobiyolojiTrakya Üniversitesi

    Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. DANIŞMAN YOK

  4. Tez No

    225813

    Çeşitli klinik örneklerden üretilen gram negatif bakterilerde metallo-beta-laktamaz varlığının araştırılması

    Investigation of metallo-beta-lactamase being in gram negative bacteria produced from various clinical specimens

    PINAR KAYMAK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2009

    BiyolojiCumhuriyet Üniversitesi

    Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. A. YASEMİN ÖZTOP

  5. Tez No

    702548

    Çeşitli klinik örneklerden izole edilen hipervirülan ve klasik klebsiella pneumoniae izolatlarında virülans genleri ve karbapenem direnç genlerinin araştırılması

    Investigation of virulence genes and carbapenem resistance genes in hypervirulent and classical klebsiella pneumoniae isolates isolated from various clinical specimens

    MERVE YÜREK

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    MikrobiyolojiAnkara Yıldırım Beyazıt Üniversitesi

    Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NURAL CEVAHİR

Geri Dön