Bacillus spizizenii tarafından üretilen proteaz enziminin karakterizasyonu
Characterization of protease enzyme produced by bacillus spizizenii
- Tez No: 976304
- Danışmanlar: DOÇ. DR. YONCA YÜZÜGÜLLÜ KARAKUŞ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Mikrobiyoloji, Biyoteknoloji, Biyoloji, Microbiology, Biotechnology, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Kocaeli Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Biyoteknoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Bu çalışmada Bacillus spizizenii ATCC 6633 suşundan proteaz enziminin üretimi ve proteazın üçlü faz ayırma (ÜFA) ile saflaştırılıp karakterize edilmesi amaçlandı. B. spizizenii, iki farklı besiyerinde (nutrient broth ve dekstroz broth) büyütüldü, büyütmelerden elde edilen özütten proteaz aktivitesi bakıldı, sonuçlara göre verimli proteaz üretimi gerçekleştiren üretim besiyeri (dekstroz broth) seçildi. Buna göre, dekstroz broth besiyerinde 37 C'de 200 rpm çalkalama hızında 24 saat büyütülen B. spizizenii'den 114,5 U (120 U/mg) proteaz içeren ham enzim özütü elde edildi. %30 (a/a) amonyum sülfat ve ham enzim özütü:t-bütanol oranı 1,0:1,0 olacak şekilde hazırlanan sistemden proteaz enzimi %85 aktivite geri kazanım ile 2,5 kat saflaştırıldı. Saflığın kontrolü SDS-PAGE ile gerçekleştirilmiş olup 56 kDa molekül ağırlığına sahip tek bir bant gözlendi. Saf enzim örneğinin optimum sıcaklık ve pH değerleri sırasıyla 50 ℃ ve pH 9,0 olarak belirlendi. 20 ila 80 ℃ arasında bir saat inkübe edilen enzimin başlangıç aktivitesinin %60'tan fazlasını koruyabildiği gözlendi. Enzimin bir saat boyunca aktif olarak kaldığı pH aralığı ise 7,0-10,0 olarak belirlendi. Ayrıca enzimin 5mM konsantrasyonda K+, Na+, Ca+2, Co+2, Cu+2, Mg+2, Ni+2, Zn+2ve Mn+2 varlığında aktivitesinin arttığı tespit edildi. Sonuç olarak, B. spizizenii suşundan proteaz enzimi ilk defa üretilerek ÜFA ile yüksek verimde saflaştırıldı. Saf haldeki proteaz örneğinin sahip olduğu üstün özellikler (geniş sıcaklık ve pH stabilite aralığı, metal iyon aktivasyonu, vb) deterjan başta olmak üzere farklı endüstriyel uygulamalarda iyi bir biyokatalizör olarak kullanılabileceğine işaret etmektedir.
Özet (Çeviri)
In this study, the aim was to produce a protease enzyme from the strain Bacillus spizizenii ATCC 6633 and to purify and characterize the protease by three phase partitioning (TPP). B. spizizenii was grown in two different media (nutrient broth and dextrose broth), protease activity was measured in the extracts obtained from the cultures, and the production medium (dextrose broth) that allowed efficient protease production was selected based on the results. Accordingly, a crude enzyme extract containing 114.5 U (120 U/mg) of protease was obtained from B. spizizenii grown in dextrose broth at 37 °C and 200 rpm for 24 hours. The protease enzyme was purified 2.5-fold, with 85% of the activity obtained from a system prepared with 30% (w/w) ammonium sulfate and crude enzyme extract in a 1.0:1.0 ratio. The purity was confirmed by SDS-PAGE, which showed a single band with a molecular weight of 56 kDa. The optimum temperature and pH for the purified enzyme sample were determined to be 50 °C and pH 9.0, respectively. It was found that the enzyme retained more than 60% of its original activity when incubated at temperatures between 20 and 80 °C for one hour. The pH range in which the enzyme remained active for one hour was determined to be 7.0–10.0. It was also found that the activity of the enzyme increased in the presence of K+, Na+, Ca2+, Co2+, Cu2+, Mg2+, Ni2+, Zn2+ and Mn2+ at a concentration of 5 mM. This was the first time that the protease enzyme was produced from the B. spizizenii strain and purified in high yield using TPP. The excellent properties of the pure protease sample (wide temperature and pH stability range, metal ion activation, etc.) indicate that it can be used as an excellent biocatalyst in various industrial applications, especially in detergents.
Benzer Tezler
- Investigation of the effects of abrb and cody deletions on the bacilysin overproducer B. subtilis HWA strain
AbrB ve CodY yokluğunun basilisin yüksek üreticisi B. subtilis HWA suşundaki etkilerinin incelenmesi
GÖKSU TARTAR
Yüksek Lisans
İngilizce
2024
Genetikİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
PROF. DR. AYTEN KARATAŞ
- Halostabil ve termostabil alfa-amilaz üreten bir Bacillus türünün izolasyonu ve enzimin kısmi karakterizasyonu
Isolation of a Bacillus species producing halostable and thermostable alpha-amylase and partial characterization of the enzyme
KÜBRA BAŞEĞMEZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2026
BiyoteknolojiÇukurova ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
PROF. DR. BAHRİ DEVRİM ÖZCAN
- Ham petrol, sondaj çamuru ve çamur çukurundan izole edilen mikroorganizmalar ile petrol biyoyıkımının araştırılması
Investigation of petroleum biodegradation by microorganisms isolated from crude oil, drilling fluids and mud pit
SEZEN BİLEN ÖZYÜREK
Doktora
Türkçe
2016
BiyoteknolojiHacettepe ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. IŞIL SEYİS BİLKAY
- Spirulina platensis mikroalginden elde edilen ekstraktların antibakteriyel özelliklerinin incelenmesi
Antibacterial properties of extracts from Spirulina platensis
BEGÜM KURBE
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
MikrobiyolojiYalova ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ OYA IRMAK CEBECİ
- Artvin ilinde doğal yetişen bazı tıbbi ve aromatik bitki ekstraktlarının antimikrobiyal aktivitelerinin belirlenmesi
Determination of antimicrobial activities of some medicinal and aromatic plant extracts naturally growing in Artvin province
NURTEN ÇOBAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
BiyolojiArtvin Çoruh ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. NURCAN ALBAYRAK İSKENDER