Tirozinaz enziminin rekombinant escherichia coli ileüretilmesi saflaştırılması ve enkapsülasyonu
Production, purification and encapsulation of tyrosinaseenzyme by recombinant escherichia coli
- Tez No: 977346
- Danışmanlar: PROF. DR. YONCA DUMAN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Enkapsülasyon, Karakterizasyon, Klonlama, Rekombinant, SDSPAGE, Characterization, Cloning, Encapsulation, Recombinant, SDS-PAGE
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Kocaeli Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Bu çalışma, Clostridium cochlearum suşuna ait tirozinaz enziminin klonlanması, rekombinant üretimi, saflaştırılması, SDS-PAGE analizi, enzim karakterizasyonu, kinetik analizler ve enzim enkapsülasyonunu kapsamaktadır. Tirozinaz enzimi, Escherichia coli BL21 hücrelerine transformasyonla aktarılmış, rekombinant koloniler LB-agar ortamında çoğaltılmış ve uygun koşullarda kültürlenmiştir. Elde edilen rekombinant tirozinaz, SDSPAGE ile doğrulanmış ve yaklaşık 52,93 kDa protein bandı tespit edilmiştir. Saflaştırılan enzim, 1 mM L-DOPA – 1 mM CuSO₄·5H₂O substratı ile yüksek aktivite göstermiştir. Enzim karakterizasyonunda optimum sıcaklık ve pH değerleri sırasıyla 55 °C ve pH 5 olarak belirlenmiş; Km ve Vmax değerleri ise 0,125 mM ve 4,91 × 10⁻⁴ olarak hesaplanmıştır. Enzim, farklı aljinat ve glutaraldehit konsantrasyonlarında enkapsüle edilmiştir. En yüksek aktivite %6 Na-aljinat ve %9 glutaraldehit koşullarında sağlanmıştır. Aljinat-enzim oranı optimizasyonunda, en yüksek enkapsülasyon verimi 0,1 g : 1200 μL oranında saptanmış, enzim-aljinat optimizasyonunda ise 0,6 g : 1200 μL oranında hazırlanan kapsüller en yüksek aktiviteyi göstermiştir. Glutaraldehit ve enzim muamele süreleri optimizasyonunda en yüksek aktivite sırasıyla 120 ve 90 dakikalık uygulamalarda elde edilmiştir. Enkapsüle enzimin optimum pH değeri 8, optimum sıcaklığı ise 65 °C olarak belirlenmiştir. Tekrar kullanılabilirlik testlerinde ise aktivitenin altı kullanıma kadar korunduğu tespit edilmiştir.
Özet (Çeviri)
This study encompasses the cloning, recombinant production, purification, SDS-PAGE analysis, enzyme characterization, kinetic analyses, and enzyme encapsulation of tyrosinase from Clostridium cochlearum strain. The tyrosinase gene was transformed into Escherichia coli BL21 cells, recombinant colonies were cultured on LB-agar plates, and appropriate growth conditions were maintained. The recombinant tyrosinase was confirmed by SDSPAGE analysis, revealing a protein band approximately 52.93 kDa in size. The purified enzyme exhibited high activity when treated with 1 mM L-DOPA and 1 mM CuSO₄·5H₂O substrate. Characterization studies determined the optimum temperature and pH as 55 °C and pH 5, respectively, with kinetic parameters Km and Vmax calculated as 0.125 mM and 4.91 × 10⁻⁴, respectively. The enzyme was encapsulated in solutions with varying concentrations of alginate and glutaraldehyde. The highest enzymatic activity was observed under encapsulation conditions of 6% sodium alginate and 9% glutaraldehyde. During alginateenzyme ratio optimization, the maximum encapsulation efficiency was found at 0.1 g : 1200 μL, while in enzyme-alginate optimization, capsules prepared with 0.6 g : 1200 μL showed the highest enzyme activity. Optimization of glutaraldehyde and enzyme treatment durations revealed peak activities at 120 and 90 minutes, respectively. The encapsulated enzyme exhibited optimal activity at pH 8 and 65 °C. Reusability tests demonstrated that the encapsulated enzyme maintained its activity for up to six successive uses.
Benzer Tezler
- Therapeutic targeting of Syk in AML: in silico drug repurposing and functional validation of BI 1002494
Akut miyeloid lösemide Syk enziminin hedeflenmesi: BI 1002494'ün ın silico ilaç yeniden konumlandırımı ve işlevsel doğrulaması
ŞEVKET OĞUZHAN TEKDEN
Yüksek Lisans
İngilizce
2025
BiyomühendislikAbdullah Gül ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ EMEL BAŞAK GENCER AKÇOK
DR. ÖĞR. ÜYESİ İSMAİL AKÇOK
- Termofilik Geobacillus caldoxylosilyticus TK4 suşundan DNA polimeraz I'in klonlanması ve karakterizasyonu
Cloning and characterization of the dna polymerase I from thermophilic Geobacillus caldoxylosilyticus TK4
CEMAL SANDALLI
Doktora
Türkçe
2007
BiyoteknolojiKaradeniz Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ALİ OSMAN BELDÜZ
- Isolation and characterization of a novel tyrosinase enzyme from native bacterial straine, production of the enzyme by cloning, characterization of the recombinant enzyme and analysis of its biotechnological applications such as production of l-dopa and melanin
Doğal bakteri suşlarından tirozinaz enzim izolasyonu, karakterizasyonu, üretici genin klonlanması, rekombinant enzimin karakterizasyonu ve l-dopa ve melanin üretimi gibi biyoteknolojide kullanılabilirliği
EBRAHİM VALİPOUR
Doktora
İngilizce
2015
MikrobiyolojiÇukurova ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BURHAN ARIKAN
- Recombinant production and biochemical characterization of novel CYP102S from hisaralan and antarctica identified by metagenomics approaches
Hisaralan ve antarktika'dan metagenomik yaklaşımla yeni tanımlanan CYP102S enzimlerinin rekombinant üretimi ve biyokimyasal karakterizasyonu
ELİF MEHVEŞ ÖZER
Yüksek Lisans
İngilizce
2026
Biyokimyaİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
PROF. DR. NEVİN GÜL KARAGÜLER
- Increasing the substrate specificity of geobacillus stearothermophilus LDH by using iterative saturation mutagenesis
Tekrarlamalı doygunluk mutagenez yöntemi ile geobacıllus stearothermophılus LDH'ın substrat özgüllüğünün artırılması
AŞKIN SEVİNÇ ASLAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2016
Biyoteknolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
YRD. DOÇ. DR. NEVİN GÜL-KARAGÜLER