Mobilize kolistin direnci geninden lipid A fosfoetanolamin transferaz enziminin rekombinant üretimi
Recombinant expression of the lipid A phosphoethanolamine transferase enzyme encoded by the mobilized colistin resistance gene
- Tez No: 986146
- Danışmanlar: PROF. DR. CÜNEYT ÖZAKIN
- Tez Türü: Tıpta Uzmanlık
- Konular: Mikrobiyoloji, Biyoteknoloji, Genetik, Microbiology, Biotechnology, Genetics
- Anahtar Kelimeler: DNA-rekombinant, Kolistin, Plazmit DNA, Protein ekspresyonu, Protein saflaştırma, Protein sentezi, İlaçlara direnç-mikrobiyal, DNA-recombinant, Colistin, Plasmit DNA, Protein expression, Protein purification, Protein synthesis, Drug resistance-microbial
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Bursa Uludağ Üniversitesi
- Enstitü: Tıp Fakültesi
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Amaç: Çoklu ilaca dirençli Gram-negatif bakterilerin giderek artması, tedavide yeniden kolistin kullanımını ve buna karşı gelişen direnç mekanizmalarını gündeme getirmiştir. Özellikle mcr-1 aracılı plazmid kaynaklı direnç, konjugasyonla bakteriler arasında hızla yayılabilmesi nedeniyle ayrı bir önem taşımaktadır. Çalışmanın amacı MCR-1179–541 proteinin rekombinant olarak üretilmesidir. Gereç ve Yöntem: Escherichia coli NCTC 13846 suşundan amplifiye edilen mcr-1 geni, pET-41b(+) ekspresyon vektörünün XhoI ve NdeI restriksiyon bölgelerine entegre edildi. Rekombinant vektör E. coli BL21(DE3) hücrelerine transforme edildi ve IPTG ile indüklenerek ekspresyon sağlandı. Rekombinant protein, yapısındaki histidin etiketi sayesinde Ni-NTA HisTrap kolonu kullanılarak saflaştırıldı. Proteinin moleküler büyüklüğü ve çözünürlüğü SDS-PAGE yöntemiyle değerlendirildi. Western blot yöntemiyle rekombinant proteinin doğrulanmasında anti-HisTag antikoru kullanıldı. Bulgular ve Sonuç: Çalışmada elde edilen deneysel bulgular, rekombinant MCR-1179–541 proteini için yapılan in silico analizlerle uyumlu bulundu. DNA jel elektroforezinde elde edilen bant profilleri, amplifikasyon ve restriksiyon aşamalarının başarılı biçimde tamamlandığını gösterdi. SDS-PAGE analizinde 42 kDa'da gözlenen bantlarının çözünmeyen kısımda bulunması, proteinin zarla ilişkili yapısını desteklemektedir. Saflaştırma sonrası hem kromatogram hem de spektrofotometrik ölçümle proteinin yoğun şekilde bulunduğu saptandı. Western blot analizi ise rekombinant proteinin ekspresyon ve saflaştırma sürecinin başarıyla gerçekleştiğini ortaya koydu. Bu protein plazmid kaynaklı kolistin direncinin yapısal, fonksiyonel ve tanısal düzeyde araştırılmasında kullanılabilecek güvenilir bir model olarak değerlendirilebilir.
Özet (Çeviri)
Aim: The increasing prevalence of multidrug-resistant Gram-negative bacteria has brought the reintroduction of colistin in therapy and the emergence of resistance mechanisms against it to the forefront. In particular, plasmid-mediated resistance driven by mcr-1 is of special concern due to its rapid dissemination amongst bacteria via conjugation. The aim of this study is the production of the recombinant MCR-1179–541 protein. Material and Method: The mcr-1 gene, amplified from Escherichia coli NCTC 13846, was inserted into the XhoI and NdeI restriction sites of the pET-41b(+) expression vector. The recombinant vector was transformed into E. coli BL21(DE3) cells, and protein expression was induced with IPTG. The recombinant protein was purified using a Ni-NTA column via its histidine tag. The molecular size and solubility of the protein were evaluated by SDS-PAGE, and Western blot analysis with an anti-HisTag antibody was performed to confirm the recombinant protein. Results and Conclusion: The experimental findings obtained in this study were consistent with the in silico analyses performed for the recombinant MCR-1179–541 protein. The band profiles observed in the DNA gel electrophoresis demonstrated that the amplification and restriction steps were successfully completed. In SDS-PAGE analysis, the presence of 42 kDa bands in the insoluble fraction supported the membrane-associated structure of the protein. Following purification, both chromatogram and spectrophotometric measurements revealed that the protein was obtained in high amounts. Western blot analysis, in turn, demonstrated that the expression and purification process of the recombinant protein had been successfully achieved. This protein can be considered a reliable model that can be used in the investigation of plasmid-mediated colistin resistance at the structural, functional, and diagnostic levels.
Benzer Tezler
- Kanatlı patojenik Escherichia coli'lerde mobilize kolistin direnç geni-1'in araştırılması
Investigation of the mobile colistin resistance gene-1 in avian pathogenic Escherichia coli
ECENUR YILMAZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
Veteriner HekimliğiAydın Adnan Menderes ÜniversitesiVeterinerlik Mikrobiyolojisi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SÜHEYLA TÜRKYILMAZ
- Mobilize edilen çevresel kan aferez ürünlerinde aldehit dehidrojenaz aktivitesinin belirlenmesi ve kök hücre nakli sonrası engrafman ile ilişkisi
Determination of aldehyde dehydrogenase activity of mobilized peripheral apheresis products and its relationship with engraftment after stem cell transplantation
SİNEM CİVRİZ BOZDAĞ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2011
HematolojiAnkara Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AKIN UYSAL
- Eski eserlerin sürdürülebilir periyodik bakımında mobilize muayene bakım-onarım ve denetim sisteminin kurulması
Mobilize inspection maintenance and repair and inspection system in an inspirational periodical view of old works
MEHMET ŞİMŞEK DENİZ
Doktora
Türkçe
2018
MimarlıkFatih Sultan Mehmet Vakıf ÜniversitesiMimarlık Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. MİNE TOPÇUBAŞI ÇİLİNGİROĞLU
PROF. DR. İBRAHİM NUMAN
- Açık kalp ameliyatı sonrası mobilize olan hastalarda öz-bakım gücünün değerlendirilmesi
Evaluation of self-care pover in patients mobilized after the openheart surgery
AYDIN NART