Retinal pigment epitel hücrelerinde endoplazmik retikulum stresinin sifingolipid düzeyleri ve apoptotik yolak üzerindeki etkileri
Effect of er stress on sphingolipid levels and apoptotic pathways in retinal pigment epithelial cells
- Tez No: 989629
- Danışmanlar: PROF. MUTAY AYDIN ASLAN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Sfingolipid, tunikamisin, retinal pigment epitel hücreleri, Endoplazmik retikulum, Sphingolipid, tunicamycin, retinal pigment epithelial cells, Endoplasmic reticulum
- Yıl: 2021
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Akdeniz Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Tıbbi Biyokimya Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Amaç: Endoplazmik retikulum (ER) stresi oluşturulan insan retinal pigment epitel hücrelerinde (ARPE 19) sfingolipid düzeylerini belirlemeyi ve apoptotik yolları incelemeyi amaçladık. Yöntem: Hücreler, ER stresi oluşturmak için tunikamisin (TM) ile muamele edildi ve sitotoksisiteyi azaltmak için bir ER stres inhibitörü olan tauroursodeoksikolik asit (TUDCA) uygulandı. Hücre canlılığı MTT analizi ile ölçüldü. C16 – C24 sfingomyelin (SM) ve C16 – C24 seramid (CER) seviyeleri LC-MS / MS ile belirlendi. Glikozla düzenlenen protein 78-kd (GRP78) ve nükleer faktör kappa-b alt birim 1 (NFκB1) mRNA düzeyleri kantitatif PCR analizi ile GRP-78, NF-κB p65, cleaved kaspaz-3 ve kaspaz-12 proteinlerinin ekspresyon düzeyleri immünfloresans mikroskobi yöntemiyle değerlendirildi. Seramid-1-fosfat (C1P) seviyeleri immunoassay ile belirlendi. Hücre lizatlarındaki kaspaz −3 ve −12 aktivitesi ise florometrik bir yöntemle ölçüldü. Bulgular: Tunikamisin uygulanan hücrelerde ER stresinin varlığı, GRP78'in mRNA ve protein seviyelerinin önemli ölçüde artmış olması ile doğrulandı. Tunikamisin, kontrollere göre hücre canlılığını önemli ölçüde azalttı. Tunikamisin ile birlikte TUDCA uygulaması, TM grubuna göre hücre canlılığını önemli ölçüde artırdı. Kontrol grubu ile kıyaslandığında TM uygulanan hücrelerde C22 – C24 CER'ler, C1P, kaspaz-3, kaspaz-12, NFκB1 mRNA ve NF-κB p65 protein seviyelerinde önemli bir artış gözlendi. TUDCA'nın uygulanması, kaspaz-3 ve -12 aktivitesinde bir azalma ile birlikte GRP78 mRNA, NFκB1 mRNA, NF-κB p65 proteini, C22 – C24 CER'ler ve C1P seviyelerinde kısmi bir azalmaya yol açtı. Sonuç: Çalışmanın sonuçları ER stresine maruz kalan retina hücrelerinde uzun zincirli CER ile C1P'nin arttığını ve apoptotik belirteçlerin varlığını ortaya koymaktadır.
Özet (Çeviri)
Objective: We aimed to determine sphingolipid levels and examine apoptotic pathways in human retinal pigment epithelial cells (ARPE-19) undergoing endoplasmic reticulum (ER) stress. Method: Cells were treated with tunicamycin (TM) to induce ER stress and tauroursodeoxycholic acid (TUDCA), an ER stress inhibitor, was administered to decrease cytotoxicity. Cell viability was measured by MTT assay. Levels of C16–C24 sphingomyelins (SM) and C16–C24 ceramides (CERs) were determined by LC-MS/MS. Glucose- regulated protein 78-kd (GRP78) and nuclear factor kappa-b subunit 1 (NFκB1) gene expressions were evaluated by quantitative PCR analysis, while GRP 78, NF-κB p65, cleaved caspase-3 and caspase-12 protein levels were assesed by immunofluorescence. Ceramide-1-phosphate (C1P) levels were determined by immunoassay, while caspase −3 and −12 activity in cell lysates were measured via a fluorometric method. Results: Induction of ER stress in TM treated groups were confirmed by significantly increased mRNA and protein levels of GRP78. TM significantly decreased cell viability compared to controls. Treatment with TUDCA along with TM significantly increased cell viability compared to the TM group. A significant increase was observed in C22–C24 CERs, C1P, caspase-3, caspase-12, NFκB1 mRNA and NF-κB p65 protein levels in cells treated with TM compared to controls. Administration of TUDCA lead to a partial decrease in GRP78 expression, NFκB1 mRNA, NF-κB p65 protein, C22–C24 CERs and C1P levels along with a decrease in caspase-3 and -12 activity. Conclusion: The results of this study reveal the presence of increased long chain CERs, C1P and apoptotic markers in retinal cells undergoing ER stress.
Benzer Tezler
- Deneysel sıçan üveit modeli ve ARPE-19 hücre kültüründe tauroursodeoksikolik asidin oküler inflamasyon üzerine etkilerinin değerlendirilmesi
Evaluation of the effects of tauroursodeoxycholic acid on ocular inflammation in an experimental rat uveitis model and ARPE-19 cell culture
YUSUF SAMET ATLIHAN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2025
Göz HastalıklarıAkdeniz ÜniversitesiGöz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MEHMET ERKAN DOĞAN
- İnsan retinal pigment epitel (ARPE-19) hücrelerinde paeonol'ün miR-155 ve miR-210 aracılı hipoksi sinyalindeki rolü
The role of paeonol in miR-155 and miR-210 mediated hypoxia signaling in human retinal pigment epithelial (ARPE-19) cells
NAZLI ŞENAY BEŞİRİK
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
BiyoteknolojiTrakya ÜniversitesiBiyoteknoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ZEYNEP BANU DOĞANLAR
- Normal ve yüksek glukoz ile indüklenmiş diyabetik retinal pigment epitel (ARPE-19) hücrelerinde gemsitabin ve 5-FU kombinasyonunun oksidatif stres ve mitokondriyal apoptoz yolağı üzerine etkisi
The effect of gemcitabine and 5-fu combination on oxidative stress and mitochondrial apoptosis pathway in normal and high glucose-induced diabetic retinal pigment epithelium (ARPE-19) cells
ESMA SEBEN OK
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
Tıbbi BiyolojiTrakya ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ZEYNEP BANU DOĞANLAR
- Retina pigment epitel hücrelerinde (ARPE-19) hidrojen peroksit ile oluşturulan oksidatif streste pinosembrin ve pinostrobinin hücre canlılığı üzerindeki etkinliğinin araştırılması
Investigation of the effectiveness of oxidative stress pinocembrin and pinostrobin on cell viability of hydrogen peroxide in retinal pigment epithelial cells (ARPE-19)
DERYA KILIÇASLAN
Doktora
Türkçe
2018
BiyomühendislikKahramanmaraş Sütçü İmam ÜniversitesiBiyomühendislik ve Bilimleri Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
DOÇ. DR. AKİF HAKAN KURT
- Retina pigment epitel hücrelerinde (ARPE-19) oksidatif stres kaynaklı hücre hasarında beyaz dut (Morus alba) fitoöstrojeni oxyresveratrol'ün tedavi ve koruyucu etkilerindeki östrojen reseptörlerinin rolünün araştırılması
Investigation of the role of estrogen receptors in the treatment and protective effects of white mulberry (Morus alba) phytoestrogen oxyresveratrol in oxidative stress-induced cell damage in retinal pigment epithelial cells (ARPE-19)
CANSU KARA ÖZTABAĞ
Doktora
Türkçe
2022
Eczacılık ve FarmakolojiBolu Abant İzzet Baysal ÜniversitesiSinir Bilimleri Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
DOÇ. DR. AKİF HAKAN KURT