İntestinal epitel hücrelerinde trokserutin uygulamasının Salmonella maruziyetinde inflammazom mekanizmaları üzerine etkisinin değerlendirilmesi
Evaluation of the effect of troxerutin administration on inflammasomes in Salmonella exposure in intestinal epithelial cells
- Tez No: 1002793
- Danışmanlar: DOÇ. DR. SERHAT AL
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Beslenme ve Diyetetik, Mikrobiyoloji, Besin Hijyeni ve Teknolojisi, Nutrition and Dietetics, Microbiology, Food Hygiene and Technology
- Anahtar Kelimeler: Beslenme, Nutrition
- Yıl: 2026
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Erciyes Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Veteriner Besin Hijyeni ve Teknolojisi Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Gıda kaynaklı Salmonella enfeksiyonları, intestinal epitel hücrelerinde invazyon ve intestinal dokularda inflamatuar ve hücre ölümü yanıtlarını tetikleme kapasiteleri nedeniyle önemli bir halk sağlığı sorunudur. Antioksidan ve anti-inflamatuar özelliklere sahip olduğu bildirilen nutrasötik bileşikler, bağırsak lümeninde konak-patojen etkileşimlerini hafifletmek için potansiyel yardımcı stratejiler olarak giderek artan bir ilgi görmektedir. Bir flavonoid türevi olan trokserutin (TRX), epitel bağışıklık yanıtlarını modüle etmeye aday bir molekül olarak dikkat çekmektedir. Bununla birlikte, Salmonella-epitel etkileşimleri üzerindeki mekanistik etkisinin tam olarak belirlenmediği görülmektedir. Bu yüksek lisans tezinde, in vitro Salmonella maruziyetinde TRX'in insan epitel hücre hatlarında inflamatuar sinyalizasyon, inflammazom ilişkili yolaklar, apoptotik yanıtlar ve bakteriyel invazyon üzerindeki etkilerini sistematik olarak değerlendirilmesi amaçlandı. Bu amaçla in vitro uygun koşullarda kültüre edilen insan kolorektal adenokarsinoma (Caco-2) hücre hatları Salmonella Typhimurium ATCC 13311 ile enfeksiyon çokluğu (MOI) ~50 düzeyinde enfekte edildi. Daha sonra kurgulanan araştırma gruplarında gentamisin koruma deneyi ile invaze canlı Salmonella düzeyleri kontrol ve TRX uygulanan gruplarda karşılaştırılarak TRX'in bakteriyel invazyon üzerine etkisi araştırıldı. Uygulanan TRX dozunun sitotoksik güvenliği MTT analizleri ile belirlendi. Bu iş paketlerinin yanı sıra Salmonella maruziyetinden bir saat önce araştırma grubu olarak kurgulanan hücre hatlarına TRX ön uygulaması yapıldı. Salmonella uygulamasından (post-enfeksiyon; PI) altı saat sonra hücre hatlarından total RNA ve protein örnekleri elde edildi. Total RNA izolatları transkriptom ve RT-qPCR analizlerine tabi tutuldu. Çalışmada RNA tabanlı ekspresyon analizlerinde inflammazom (NLRC4, NLRP3, CASP4 ve CASP5) ve doğal yanıt ilişkili sitokin ve kemokinler (TNF-α, NF-κB, IL-1β ve IL-18) hedef alındı. Protein lizatları ise GSDMD protein ekspresyonu ve aktivasyonu analizleri için western blotting analizlerinde değerlendirildi. Enfeksiyon sonrası aynı inkübasyon süresi sonrasında hücreler uygun şekilde elde edilerek total apoptotik yüzdelerin belirlenmesi amacıyla Annexin V/propidium iyodür boyama kullanılarak akış sitometrisi analizleri gerçekleştirildi. Tüm deneysel sonuçlarda, TRX uygulamasının, tedavi edilmemiş enfekte kontrollerle karşılaştırıldığında istatistiksel olarak anlamlı farklılıklara yol açmadığı belirlendi (P>0.05). Transkripsiyonel analizler, doğal yanıt reseptörleri, hücre içi inflammazom sensörleri, inflamatuar sitokinler ve kaspaz genleri için kararlı ekspresyon profilleri ortaya koydu ve katlanma değişim değerleri başlangıç değerlerine yakın kaldığı gözlendi. Benzer şekilde, TRX uygulamasının PI altıncı ve 12. saatlerinde toplam apoptotik hücre oranlarını istatistiksel olarak önemli ölçüde değiştirmediği ve Salmonella'nın epitel hücrelerine invazyon düzeylerini etkilemediği belirlendi (P>0.05). Özellikle, bağımsız deneylerdeki bütüncül olarak bulguların tutarlılığı, uygulanan deneysel koşullar altında epitel inflamatuar sinyal mekanizmaları, apoptoz yanıtları veya bakteriyel invazyon üzerinde TRX'in ölçülebilir bir modülatör etki göstermediği sonucunu desteklemektedir. Bu bulgular, TRX'in Salmonella enfeksiyonu sırasında intestinal epitel hücrelerinde doğrudan immünomodülatör etki göstermediğini veya etkilerin kurgulanan deneysel dizaynda gözlenmediği düşünülmektedir. Bu hususta olası açıklamalar arasında epitel doğal yanıtın, uygulanan doz ve MOI gerekçeli oluşan enfeksiyon doygunluğu nedeniyle olabileceği görülmektedir. Gelecekteki çalışmalarda, TRX'in kompleks biyolojik ilişkileri daha yakından yansıtan koşullar altında immünomodülatör etkiler gösterip göstermediğini belirlemek için alternatif hücre hatlarında veya in vivo modellerde araştırılmasını gerekli olduğunu göstermektedir. Bu sonuçlar, besin takviyesi-konak-patojen etkileşimlerinin mekanistik olarak temellendirilmiş bir anlayışına katkıda bulunarak fonksiyonel gıda ve enfeksiyon biyolojisi araştırmalarında titiz, çok boyutlu değerlendirmenin önemini vurgulamaktadır.
Özet (Çeviri)
Foodborne Salmonella infections are a significant public health problem due to their capacity to invade intestinal epithelial cells and trigger inflammatory and cell death responses in intestinal tissues. Nutraceutical compounds, reported to possess antioxidant and anti-inflammatory properties, are attracting increasing interest as potential supportive strategies to mitigate host-pathogen interactions in the intestinal lumen. Troxerutin (TRX), a flavonoid derivative, is a promising molecule for modulating epithelial immune responses. However, its mechanistic effect on Salmonella-epithelial interactions appears not to be fully determined. This master's thesis aimed to systematically evaluate the impact of TRX on inflammatory signaling, inflammasome-related pathways, apoptotic responses, and bacterial invasion in human epithelial cell lines exposed to Salmonella under in vitro conditions. For this purpose, human colorectal adenocarcinoma (Caco-2) cell lines cultured in vitro under suitable conditions were infected with Salmonella Typhimurium ATCC 13311 at a multiplicity of infection (MOI) level of ~50. Subsequently, in the designed research groups, the levels of invasive live Salmonella were compared in the control and TRX-treated groups using a gentamicin protection assay to investigate the effect of TRX on bacterial invasion. MTT assays were used to determine the cytotoxic safety of the applied TRX dose. In addition to these work packages, TRX pre-treatment was performed on the cell lines designed by the research group one hour before Salmonella exposure. Total RNA and protein samples were obtained from the cell lines six hours after Salmonella administration (post-infection; PI). Total RNA isolates were subjected to transcriptome and RT-qPCR analyses. In this study, RNA-based expression analyses targeted inflammasomes (NLRC4, NLRP3, CASP4, and CASP5) and natural response-related cytokines and chemokines (TNF-α, NF-κB, IL-1β, and IL-18). Protein lysates were evaluated using western blotting to analyze GSDMD protein expression and activation. After the infection and the same incubation period, cells were appropriately obtained, and flow cytometry analyses were performed using Annexin V / propidium iodide staining to determine the total apoptotic percentages. In all experimental results, it was determined that TRX application did not lead to statistically significant differences when compared to untreated infected controls (P>0.05). Transcriptional analyses revealed stable expression profiles for natural response receptors, intracellular inflammasome sensors, inflammatory cytokines, and caspase genes, with folding change values remaining close to baseline values. Similarly, it was determined that TRX administration did not statistically significantly alter the total apoptotic cell ratios at the 6th and 12th hours of PI and did not affect the level of Salmonella invasion into epithelial cells (P>0.05). Specifically, the overall consistency of findings across independent experiments supports the conclusion that TRX does not exhibit a measurable modulatory effect on epithelial inflammatory signaling mechanisms, apoptosis responses, or bacterial invasion under the experimental conditions applied. These findings suggest that TRX does not exhibit a direct immunomodulatory effect on intestinal epithelial cells during Salmonella infection, or that the effects were not observed in the experimental design. Possible explanations for this include the epithelial innate response being due to infection saturation resulting from the applied dose and MOI. Further studies are necessary to investigate whether TRX exhibits immunomodulatory effects in alternative cell lines or in vivo models under conditions that more closely reflect complex biological relationships. These results contribute to a mechanistically grounded understanding of supplement-host-pathogen interactions, highlighting the importance of rigorous, multidimensional evaluation in functional food and infection biology research.
Benzer Tezler
- Obez hastalarda intestinal tiamin transporter ekspresyonunun (THTR1/2) ve Sp1 promotör aktivitesinin moleküler analizi
Moleculary analysis of intestinal thiamine transporter expression (THTR1/2) and Sp1 promoter activity in obese patients
OĞUZHAN SITKI DİZDAR
- Gıda emülgatörleri ve inülinin farelerde intestinal mikrobiyota üzerine etkisinin değerlendirilmesi
Assessment of the effect of food emulsifiers and inulin on intestinal microbiota in mice
CANSU BEKAR
Doktora
Türkçe
2024
Beslenme ve DiyetetikHacettepe ÜniversitesiDiyetetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AYLİN AYAZ
- Deneysel alerjik rinit sıçan modelinde bağırsak mikrobiyota profilinin belirlenmesi
Determination of intestinal microbiota profile in a rat model of experimental allergic rhinitis
NURANA MAMMADOVA
Yüksek Lisans
Türkçe
2025
MikrobiyolojiAtatürk ÜniversitesiTıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ÖZGÜR ÇELEBİ
DOÇ. DR. MUSTAFA CAN GULER
- Bağırsak hasar modellerinde kemik iliği mezenkimal kök hücre ve bağırsak mezenkimal kök hücrelerin rejeneratif ve immün modülatuvar etkilerinin karşılaştırılması
Comparison of regenerative and immune modulatory effecets of bone marrow and intestinal mesenchymal stem cells i intestinal damage models
BURCU PERVİN
Doktora
İngilizce
2025
BiyolojiHacettepe ÜniversitesiKök Hücre Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. FATİMA AERTS KAYA
- CagA pozitif helikobakteri pilori enfeksiyonunda NOD1 E266K polimorfizmi ve klinik önemi
Influence of E266K polymorphism in the NOD1 gene on the clinical outcome of helicobacter pylori infection
BANU KARA
Tıpta Yan Dal Uzmanlık
Türkçe
2008
GastroenterolojiÇukurova Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HİKMET AKKIZ