In vivo investigation of CENP-a K118 ubiquitination
CENP-a K118 ubikitinasyonu işlevinin in vivo araştırılması
- Tez No: 1016344
- Danışmanlar: DOÇ. DR. MUHAMMED KASIM DİRİL
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biyoloji, Genetik, Biotechnology, Biology, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2026
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
- Enstitü: İzmir Uluslararası Biyotıp ve Genom Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Genom Çalışmaları Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Mitoz sırasında, genomik stabilite için hassas kromozom ayrışması çok önemlidir; bu süreç, mitotik iğ tarafından kinetokorlarda kromozomların yakalanmasıyla gerçekleşir. Histon H3 varyantı olan sentromerik protein A (CENPA), fonksiyonel kinetokor oluşumu için temel epigenetik şablon görevi görür. Post-translasyonel modifikasyonlar (PTM'ler) CENPA'nın kritik düzenleyicileri olmasına rağmen, mevcut literatür büyük ölçüde farklı aşırı ekspresyon, etiketleme ve gen susturma teknikleri kullanan in vitro kültürlere dayanmaktadır. Bu durum, çelişkili bulgulara yol açmış ve bu PTM'lerin fizyolojik, in vivo önemini büyük ölçüde çözümsüz bırakmıştır. Bu çalışmada, CENPA K118 kalıntısındaki (insanlarda K124) ubikitinasyonun fonksiyonel rolü in vivo olarak araştırılmıştır. CRISPR/Cas9 kullanılarak, ubikitinasyonu inhibe ederken kalıntının pozitif yükünü koruyan bir Cenpa K118R mutasyonuna sahip gen eklenmiş fare modelleri oluşturulmuştur. Homozigot K118R farelerin yaşayabilirliği, doğurganlığı ve gelişimsel fenotipleri kapsamlı bir şekilde analiz edildi. Ayrıca, kromozom ayrışmasını ve sentromerik protein lokalizasyonunu incelemek için primer fare embriyonik fibroblastları (MEF'ler) izole edildi. CENPA PTM'lerinin daha ileri moleküler araştırması için Cenpa flox koşullu KO hücre hatları da geliştirildi ve karakterize edildi. Bu araştırma, CENPA'yı fizyolojik düzeyde, tamamen endojen lokusundan inceleyerek, in vitro sınırlamaların üstesinden geliyor ve sentromer biyolojisindeki uzun süredir devam eden tartışmalara kesin cevaplar sunuyor.
Özet (Çeviri)
During mitosis, precise chromosome segregation is crucial for genomic stability, a process mediated by the mitotic spindle capturing chromosomes at kinetochores. Centromeric protein A (CENPA), a histone H3 variant, acts as the essential epigenetic blueprint for functional kinetochore assembly. Although post-translational modifications (PTMs) are critical regulators of CENPA, current literature relies heavily on in vitro cultures using disparate overexpression, tagging, and knockdown techniques. This has led to contradictory findings, leaving the physiological, in vivo relevance of these PTMs largely unresolved. In this study, the functional role of ubiquitination at the CENPA K118 residue (K124 in humans) was investigated in vivo. Using CRISPR/Cas9, knock-in mouse models with a Cenpa K118R mutationwhich inhibits ubiquitination while preserving the residue's positive chargewere generated. The viability, fertility, and developmental phenotypes of homozygous K118R mice were comprehensively analyzed. Furthermore, primary mouse embryonic fibroblasts (MEFs) were isolated to examine chromosome segregation and centromeric protein localization. Cenpa flox conditional KO cell lines were also developed and characterized for further molecular investigation of CENPA PTMs. By examining CENPA expressed entirely from its endogenous locus at physiological levels, this study overcomes in vitro limitations and provides definitive answers to long-standing debates in centromere biology.
Benzer Tezler
- In vivo investigation of the epigenetic functions of the CENP-A amino terminal
CENP-A amino terminalinin epigenetik fonksiyonlarının ın vivo araştırılması
TUĞBA ŞEHİTOĞULLARI
Yüksek Lisans
İngilizce
2022
BiyoteknolojiDokuz Eylül ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Bilim Dalı
DOÇ. DR. MUHAMMED KASIM DİRİL
- In-vivo investigation of the effects of traditional medicinal plants on acute inflammation
Geleneksel tıbbi bitkilerin akut inflamasyon üzerine etkilerinin in-vivo olarak araştırılması
ABDUL HAMID
Yüksek Lisans
İngilizce
2025
Eczacılık ve FarmakolojiMarmara ÜniversitesiFarmakoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HATİCE KÜBRA ELÇİOĞLU
- Investigation of the anti aging effects of exosomes andboron compounds in an in vivo d-galactose inducedaccelerated aging model
In vıvo D-galaktos ile uygulanan hızlandırılmış yaşlanmamodelinde ekzozomların ve bor bileşiklerinin yaşlanmakarşıtı etkilerinin araştırılması
SERDAR BORA BAYRAKTAROĞLU
Doktora
İngilizce
2025
BiyoteknolojiYeditepe ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FİKRETTİN ŞAHİN
- Zebrafish glioma xenograft models: In vivo investigation of injection methods and development of a streamlit application
Zebra balığı glioma ksenograft modelleri: Enjeksiyon yöntemlerinin in vivo araştırılması ve bir streamlit aplikasyonunun geliştirilmesi
RÜYA TOMBULOĞLU
Yüksek Lisans
İngilizce
2023
Nörolojiİhsan Doğramacı Bilkent ÜniversitesiNörobilim Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ÖZLEN KONU KARAKAYALI
- Investigation of in-vivo inhibition of ßeta-lactamase by ßeta-lactamase inhibitor protein
Beta-laktamazın beta-laktamaz inhibitör proteini tarafından in-vivo inhibisyonunun incelenmesi
AYŞE EZGİ AKKAYA
Yüksek Lisans
İngilizce
2010
BiyoteknolojiBoğaziçi ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. BERNA SARIYAR AKBULUT
YRD. DOÇ. DR. ELİF ÖZKIRIMLI ÖLMEZ