The Role of lipid peroxidation end product 4-hydroxy-2-nonenal in cell signalling
Lipid peroksidasyonu son ürünü olan 4-HNE'nin hücre sinyalizasyonundaki rolü
- Tez No: 128508
- Danışmanlar: PROF. DR. HÜVEYDA BAŞAĞA
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2002
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Sabancı Üniversitesi
- Enstitü: Mühendislik ve Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 87
Özet
ÖZET Lipid peroksidasyonu son ürünleri hücre içi sinyal iletiminde önemli rol aldıkları için son yıllarda özel bir ilgi odağı olmuşlardır. Bu çalışmada, lipid peroksidasyonu son ürünlerinden biri olan 4-hidroksi nonenal (4-HNE) ve oksidan ajan olarak çok iyi bilinen hidrojen peroksit (H2O2) in oksidatif ve sitotoksik özellikleri karşılaştırmalı olarak 3T3 fibroblast hücre kültüründe araştırıldı. Hücre morfolojisi ve canlılığı ile ilgili bulgular her iki oksidan ajanın hücre yapısında önemli değişikliklere yol açtığını gösterdi. Hücreler 500 |uM H2O2 ile 24 s veya daha uzun süre inkübe edildiğinde, apoptotik yapıların oluştuğu ışık mikroskobuyla gözlemlendi. Benzer sonuçlar hücreler 5, 15, 25, ve 35 |uM 4-HNE ile inkübe edildiğinde de görüldü. 4-HNE'nin derişimine bağlı olarak hücrelerin kalınlaştığı ve 35 yM 4-HNE ile inkübe edildiklerinde ise tutunma özelliklerini yitirerek solüsyona geçtikleri görüldü. Hücreler 25 ve 50 |JM 4- HNE ile 24 saat inkübe edildiklerinde hücre canlılığının sırasıyla % 25 ve % 93 oranında azaldığı tespit edildi. Hücre içinde 4-HNE'nin sebep olduğu reactif oksijen türleri (ROT)'nin oluşumunu tesbit için DCFH-DA floresan boyası kullanıldı. 4-HNE en düşük derişim olarak 5 (JM kullanıldığında dahi hücre içinde florasan ışığın yoğunluğu kontrole göre önemli miktarda arttığı saptandı. Antioksidan özellikleri bilinen ve yapısal olarak birbirinden farklı olan vitamin E (a-tocoferol) ve resveratrol 50 |uM derişiminde kullanıldığında ise bu antioksidanla rın 4-HNE'ye bağlı hücre içi ROT oluşumunu önemli ölçüde önledikleri floresan mikroskobu ile gözlemlendi. Bu bulgu 4-HNE'nin hücre içi ROT oluşumuna sebeb olduğunu destekledi. Diferansiyel boyama teknikleri ve DNA analizi sonuçlan 4-HNE'nin 10 (uM ve daha yüksek derişimlerde apoptozize yol açtığını ve bu etkinin vitamin E kullanıldığında önemli ölçüde önlendiğini gösterdi. Hücreler 25 uM 4-HNE 24 s süreyle inkübe edildiğinde, üçlü boyama tekniği ve florasan mikroskop bulgularında apoptotik hücreler parlak turuncu, canlı hücreler ise parlak yeşil görüldü. Elde edilen bulgular, sinyal iletisi mekanizmaları ışığında, 4-HNE nin hücre içinde oluşturduğu ROT ve buna bağlı olarak indüklenen apoptoziz olarak tartışıldı. VII
Özet (Çeviri)
ABSTRACT Lipid peroxidation end products gained special interest and attention in recent years as mediators and inducers of signal transduction. In the present study, the oxidative and cytotoxic effects of a lipid peroxidation end product, 4-hydoxy nonenal (4-HNE) has been studied and compared with that of a well known oxidant hydrogen peroxide (H2O2) in 3T3 fibroblast cell line. Cell morphology and viability studies showed that both H2O2 and 4-HNE could cause significant cellular deformations and loss of viability. Light microscopy results revealed that incubation of cells with 500 uM H2O2 for 24 hr or longer periods resulted in the formation of apoptotic bodies. Similar results have been observed when cells were incubated with 4-HNE at concentrations as low as 5, 15, 25, and 35 uM. In a concentration dependent manner, cells became thicker and when 35 |uM 4-HNE was used detachment and membrane blebbings that are indicating apoptosis have been clearly observed. Treatment of cells for 24 hr with 25 and 50 uM 4-HNE caused 25 % and 93 % loss in cell viability respectively. Intracellular ROS production has been monitored by a florescent probe, DCFH-DA. When cells were treated with 5 |uM 4-HNE, a significant increase in florescence intensity has been observed when compared to the control cells. Two structurally different antioxidants; a-tocopherol and resveratrol prevented 4-HNE-induced ROS production to a significant extent when they were used at 50 (uM concentration. This finding provided further evidence for the production of ROS. Differential staining by using fluorescent probes and DNA fragmentation analysis results indicated that 10 uM 4-HNE induced apoptosis and the effect was again overcome by the antioxidants; vitamin E and resveratrol. Furthermore, a combination of acridine orange (AO), Hoechst (HO), and propidium iodide (PI) florescent dyes have been used to differentiate viable, apoptotic and late apoptotic/necrotic cells respectively. Differential staining results indicated that when cells were incubated with 25 pM 4-HNE for 24 hr. apoptotic cells have been observed with condensed orange nucleus whereas viable cells were seen with green nucleus. The results are discussed in the light of cellular signalling mechanisms induced by 4-HNE leading to apoptosis via effecting the overall redox status of the cell. VI
Benzer Tezler
- Kurşun nitrat ve kadmiyum klorür'ün rat beyin dokusu üzerine toksik etkisi ve sesamol'ün koruyucu rolü
Toxic effect of lead nitrate and cadmium chloride on rat brain tissue and protective role of sesamol
BURAK BOSTANCI
- Lipit peroksidasyon son ürünü 4-hidroksinonenal'in nöroinflamasyon üzerine etkileri: Kersetin ve monokloropivaloilkersetin'in rolü
The lipid peroxidation end-product 4-hydroxynonenal induces neuroinflammatory responses: Role of quercetin and monochloropivaloylquercetin
ZEHRA ÖZKUL ŞAHİN
Yüksek Lisans
Türkçe
2015
BiyokimyaErciyes ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. AHMET CUMAOĞLU
- Koroner kalp hastası olan bireylerde lipid peroksidasyon düzeyinin tespiti
Detection of lipid peroxidation level in coronary cardiac patients
MEHMET ERTAŞ
- Dimetoat'ın sıçan beyin dokusu üzerine toksik etkisi ve ferulik asitin koruyucu rolü
Toxic effect of dimethoate on the rat brain tissues and the protective role of ferulic acid
TUĞBA KÖKEN
- Ghrelin ve kannabinoid CB1 reseptör agonist ve antagonistlerinin penisilinle oluşturulan epileptik sıçan beyin dokularındaki oksidan/antioksidan mekanizmalar üzerine etkilerinin araştırılması
The effects of ghrelin and agonist, antagonist of cannabinoid CB1 receptors on the oxidant and antioxidant mechanisms in the penicillin-induced epileptiform activity in rat
UĞUR DÜZ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2013
BiyokimyaOndokuz Mayıs ÜniversitesiTıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NERMİN KILIÇ