Geri Dön

Peroksidaz'ın pazıdan (Beta vulgaris L. var. cicla) saflaştırılması ve karakterizasyonu

Purification and characterization of peroxidase from chard (Beta vulgaris L. var. cicla)

  1. Tez No: 129492
  2. Yazar: SİBEL KAHRAMAN
  3. Danışmanlar: PROF. DR. REFİYE YANARDAĞ
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Kimya, Chemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2003
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: İstanbul Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Biyokimya Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 76

Özet

ÖZET PEROKSİDAZ'IN PAZIDAN (Beta vulgaris L. var. cicla) SAFLAŞTIRILMASI VE KARAKTERİZASYONU Bu çalışmada ülkemizde bol miktarda yetiştirilen pazı bitkisinin yapraklarından peroksidaz enzimi ilk kez saflaştırıldı ve karakterize edildi. Çalışmamızda pazı yapraklan polivinil pirolidon ve sodyum askorbat içeren 0.1 M fosfat tamponuyla (pH=6.5) homojenize edilerek pazı ham ekstresi elde edildi. Pazı nam ekstresine %20-%60 (NHL^SC^ çöktürmesi uygulandı, %20-60'lık amonyum sülfat kesiti hidroksilapatit kolonuna tatbik edildi. Artan molaritede fosfat tamponu (pH=6.5) ile yapılan elüsyon sonucunda en yüksek peroksidaz aktivitesinin 100 mM'lık elüatta olduğu görüldü. 100 mM'lık hidroksilapatit fraksiyonu DE AE- selüloz kolonuna uygulandı. Elüsyona 0.5 mM'lık fosfat tamponu (pH=6.5) ile başlandı ve enzim bu fraksiyonda kolondan geçti. Saflaştırmada protein miktar tayini Bradford yöntemiyle, enzim aktivitesi p-fenilen diamin substratı kullanılarak spektrofotornetrik olarak tayin edildi. Tüm bu işlemler sonucunda, pazı yapraklarından peroksidaz enzimi 43.55 kez saflaştırıldı ve poliakrilamid jel elektroforezinde tek aktivite bandı gösterdi. SDS- PAGE ile enzimin molekül ağırlığı 50 kDa olarak tayin edildi. Pazıdan saflaştmlan peroksidazın optimum pH'smın pH=6 ve optimum temperatürünün ise 30°C olduğu bulundu. Enzimin çeşitli substratlara karşı ilgisi incelendi ve enzimin ilgisinin en yüksek olduğu p-fenilen diamin, o-fenilen diamin, pirogallol, gayakol, o-dianisidin ve 3,3- diamino benzidin' e karşı Km ve Vmax değerleri hesaplandı. Enzimin ilgisinin en yüksek olduğu 3,3'- diamino benzidin ve pirogallol'e karşı Km değerlerinin 0.023 mM ve 0.067 mM olduğu, Vmax değerlerinin ise sırasıyla 0.061 U ve 0.006 U olduğu bulundu. Çeşitli organik ve anorganik bileşiklerin enzim aktivitesi üzerine etkisi incelendiğinde glutatyon, sistein, ditiyoeritrol, p-merkapto etanol, askorbik asid ve fenil hidrazinin enzimi %100 oranında inhibe ettiği, FeCl2'nin ise enzimi %8.52 oranında aktive ettiği bulundu. Ayrıca enzim üzerinde inhibitor etkisi olan benzoik asid ve a- naftol'un yanşmalı, NaNs'in ise yarı yarışmalı olarak enzimi inhibe ettiği görüldü. VIII

Özet (Çeviri)

SUMMARY PURIFICATION AND CHARACTERIZATION OF PEROXIDASE FROM CHARD (Beta vulgaris L. var. cicta) This is the first study to purify and characterize peroxidase enzyme extracted from chard leaves which are grown abundantly in Turkey. In our study chard raw extract obtained by homogenizing chard leaves with 0.1 M phosphate buffer (pH=6.5) containing polyvinylpyrrolidone and sodium ascorbate. The crude extract was employed to %20-60 (NH^SC^ saturation. This ammonium sulfate cut applied onto hidroxylapatite column. Elution was carried out by increasing molarity of the phosphate buffer (pH=6.5) and resulted in the highest activity peak at 100 mM concentration. This fraction was applied onto DEAE- cellulose column for further purification. The column was first eluted 0.5 mM phosphate buffer (pH=6.5) and resulted in the recovery of the peroxidase activity. At the purification steps, protein was determined by Bradford method, enzyme was determined spectrophotometrically by using p-phenylenediamine dihydrochloride as substrate. At the end of these purification steps, peroxidase enzyme was purified 43.55- fold from chard leaves. The purified enzyme revealed one activity baud by polyacrylamide gel electrophoresis. The molecular weight of the purified enzyme estimated as 50 kDa by SDS-PAGE. It was determined that chard peroxidase has an optimum pH at pH=6 and optimum temperature at 30°C. Enzyme affinity investigated towards various substrates. Km and Vmax values are calculated for best subtrates; p-phenylenediamine, o-phenylenediamine, pirogallol, guaiacol, o-dianisidine, 3,3'- (fiaminobenzidine. Km values are 0.023 mM and 0.067 mM for 3,3'- diaminobenzidine and pirogallol, respectively which are best oxidized by chard peroxidase. Vmax values are 0.061 U and 0.006 U, respectively. When the effects of various inorganic and organic compounds on peroxidase activity were examined, it was observed that peroxidase was inhibited %100 by glutathione, sistein, ditioerityrol, f>-merkapto etanol, ascorbic acid and phenyHiydrazine, while activated %8.52 by FeCli. Also it was found that ct-naftol and benzoic acid inhibited the enzyme competitively, whereas NaN3 inhibited the enzyme uncompetitively.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    531806

    Peroksidazın üç fazlı ayırma yöntemi ile pazıdan (Beta vulgaris L.var. cicla) saflaştırılması

    Purificaton of peroxidase from chard (Beta vulgaris L. var. cicla) by three phase partitioning method

    MEHMET YAMAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    Biyokimyaİstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. REFİYE YANARDAĞ

  2. Tez No

    258777

    Ozon, klor ve hidrojen peroksit uygulamalarının pazıda klorofil miktarı üzerine etkileri

    Effects of ozone, chlorine and hydrogen peroxide treatments on chlorophyll content in chard

    ÖZLEM SEVİLGEN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2009

    Gıda MühendisliğiAnkara Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SEDAT VELİOĞLU

  3. Tez No

    194015

    Glutatyon peroksidaz 1 genindeki PRO197LEU polimorfizminin şizofreni etyopatogenezindeki rolü ve türk populasyonundaki allel dağılımı

    The role of PRO197LEU polymorphism of the glutathione peroxidase 1 gene in the etiopathogenesis of schizophrenia and the allele distribution in the turkish population

    İBRAHİM TEKEDERELİ

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2007

    PsikiyatriFırat Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı

    Y.DOÇ. HÜSEYİN YÜCE

  4. Tez No

    294219

    Melatonin uygulanan farelerin karaciğer dokusunda glutatyon peroksidaz'ın immunohistokimyasal dağılımı ve RT PCR ile gen ekspresyonu

    Immunohistochemical distribution of glutathione peroxidase and gene expression with RT PCR in liver tissue of mice administered melatonin

    SERAP KORAL TAŞÇI

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    Histoloji ve EmbriyolojiKafkas Üniversitesi

    Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NURHAYAT YECAN GÜLMEZ

  5. Tez No

    266522

    Rat karaciğer hücrelerinde talyum toksisitesinin neden olduğu oksidatif strese karşı metallotioneinlerin etkilerinin biyokimyasal ve histopatolojik olarak araştırılması

    A biochemical and histopathological investigation on the effects of metallothioneins against oxidative stress caused by thallium toxicity in rat liver cells

    GÖZDE AYDOĞAN KILIÇ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    BiyokimyaAnadolu Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. H. MEHTAP KUTLU

Geri Dön