Sığır sütünden laktoperoksidaz (LPO) enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu, bazı ilaçlara karşı kinetik özelliklerinin belirlenmesi ve bazı patojen mikroorganizmalara karşı antibakteriyal ve antifungal etkisinin incelenmesi
Purification and characterization of lactoperoxidase (LPO) from bovine milk, and investigation of its kinetic LPO behavior for some drungs and its antibacterial and antifungal activities againts some patogenic microorganisms
- Tez No: 155643
- Danışmanlar: DOÇ.DR. HASAN ÖZDEMİR
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Laktoperoksidaz, sefazolin, seftriakson, ketamin baz, marcain, inhibisyon, antibakteriyal, antifungal
- Yıl: 2004
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Atatürk Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 100
Özet
ÖZET Doktora Tezi SIĞIR SÜTÜNDEN LAKTOPEROKSÎDAZ (LPO) ENZİMİNİN, SAFLAŞTIRILMASI, KARAKTERİZASYONU, BAZI İLAÇLARA KARŞI KİNETİK ÖZELLİKLERİNİN BELİRLENMESİ VE BAZI PATOJEN MİKROORGANİZMALARA KARŞI ANTİBAKTERİYAL VE ANTIFUNGAL ETKİSİNİN İNCELENMESİ Metin Tansu UĞUZ Atatürk Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Kimya Anabilim Dalı Danışman: Doç.Dr.Hasan ÖZDEMİR Bu çalışmada laktoperoksidaz enzimi (LPO) (E.C. 1.1 1.1.7) sağlıklı sığır sütünden, biyokimyasal ve kromatograflk yöntemler kullanılarak saflaştmlmış ve bazı kinetik özellikleri araştırılmıştır. Laktoperoksidaz enziminin sığır sütünden saflaştırılması amacıyla, Amberlite CG-50 H reçinesiyle kısmi saflaştırma yapılarak, CM-Sephadex C-50 iyon değişim kromatografisi, %0-90 amonyum sülfat çöktürmesi, Sephadex G-100 jel filtrasyon kromatografisi, diyaliz ve enzim saflığını kontrol etmek için SDS-PAGE elektroforez teknikleri kullanıldı. Bir litre sığır sütünden spesifik aktivitesi 20,81 EÜ/mg protein olan toplam 6,7 mg LPO elde edildi. ABTS substratı için Kn, ve Vmax değerleri belirlendi. Suda çözünebilen bazı antibiyotik ve anestezik maddelerin enzim üzerindeki inhibisyon etkisi incelendi. ABTS ve H2O2 substratlan kullanılarak yapılan çalışmalarda, kullanılan ilaçların tamamının enzimi inhibe ettiği ve inhibisyon tipinin antibiyotikler için yarışmalı inhibisyon, anestezik maddeler için ise yanşmasız inhibisyon şeklinde olduğu bulundu. Kullanılan antibiyotiklerden Sefazolin ve Seftriakson'un enzimi yüksek oranda inhibe ettiği tespit edildi. Antibakteriyal ve antifungal çalışma, Disk-difUzyon yöntemi kullanılarak Müeller-Hinton Agar ortamında yapıldı. Bazı patojen bakteri suşları, fungus türleri ve klinikten izole edilen hastane enfeksiyonu etkenleri üzerinde LPO sisteminin etkisi incelendi. Antibakteriyal çalışmada bir çok bakteri susunun duyarlı olduğu fakat klinikten izole edilen bakterilerin daha dirençli oldukları anlaşılmıştır. Antifungal duyarlılık çalışmasında, 11 türden sadece Kluyveromyces fragilis ile Rodotorula rubra duyarlı, diğer türler ise dirençli bulunmuştur. 2004, 86 sayfa
Özet (Çeviri)
ABSTRACT Ph.D.Thesis PURIFICATION AND CHARACTERIZATION OF LACTOPEROXIDASE (LPO) FROM BOVINE MILK, AND INVESTIGATION OF ITS KINETIC LPO BEHAVIOR FOR SOME DRUGS AND ITS ANTIBACTERIAL AND ANTIFUNGAL ACTIVITIES AGAINST SOME PATOGENIC MICROORGANISMS Metin Tansu U?UZ Atatürk University Graduate School of Natural and Applied Sciences Department of Chemistry Supervisor: Doç.Dr.Hasan ÖZDEMİR Lactoperoxidase was purified from healthy bovine milk by using biochemical and chromatographic techniques and some kinetics properties have been investigated in the present study. For the purification of LPO from bovine milk, the milk was first treated with Amberlite CG-50 H* resins afterwards ammonium sulphate precipitation (0-90 %). CM-Sephadex C-50 ion exchange chromatography, therefore the enzyme was purified partially. Sephadex G-100 gel filtration chromatography and dialysis were employed, respectively. Enzyme purity determined by SDS-PAGE electrophoresis. 6.7 mg LPO from bovine milk (specific activity 20.81 EU/mg protein), were obtained from 1 liter milk. Km and V max values were measured in the presence of ABTS as substrates. Some of the water soluble (miscible) antibiotics and anesthesics on enzyme inhibition effects were investigated. The studies, in which ABTS and H2O2 used as substrat, it was found that all of the tested antibiotics inhibited enzyme activity and inhibition type was competitive. The higher inhibitions were shown by Sefazolin and Seftriakson. Anesthesics inhibited enzyme activity in non-competitive type. Antibacterial and antifungal susceptibility studies were carried out by disc diffusion method on Müeller-Hinton Agar. The effects of LPO system on some bacteria strains, some fungus sp and on the clinical isolate cause nosocomial infection were investigated, it is found that most of the studied bacteria strains were susceptibile. While, clinical isolate ones more resistance. Antifungal susceptibility studies indicated that only Kluyveromyces fragilis and Rodotorula rubra were sensitive. The rest of of studied eleven fungus strains were resistance. 2004, 86 pages Keywords; Lactoperoxidase, sefazolin, seftriaxon, ketamin base, marcaine, inhibition, antibacterial, antifungal. 11
Benzer Tezler
- Farklı memeli sütlerinden laktoperoksidaz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu, suda çözünen organik çözücülerdeki davranışı, sekonder ve tersiyer hidroperoksitleri indirgeme kinetiğinin incelenmesi
Purification and characterization of lactoperoxidase from different mammalians milk: Investigation of LPO behavior in water-misciple solvents and reduction kinetics of seconder and tertiary hydroperoxides
HALİL İBRAHİM HACIBEYOĞLU
Doktora
Türkçe
2002
KimyaAtatürk ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. Ö. İRFAN KÜFREVİOĞLU
YRD. DOÇ. DR. HAMDULLAH KILIÇ
- Laktoperoksidaz enziminin sığır ve koyun sütlerinden afinite kromatografisi tekniği ile saflaştırılması
Purification of lactoperoxidase enzyme from bovine and sheep milk by affinity chromatography technique
HANDE USANMAZ
- Laktoperoksidaz enziminin saflaştırılması ve bazı bileşiklerin bu enzim üzerine etkilerinin araştırılması
Purification of lactoperoxidase enzyme and investigation effects of some compounds on this enzyme
BESTE ŞİPAL
Doktora
Türkçe
2016
BiyokimyaBalıkesir ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. SEMRA IŞIK
DOÇ. DR. SERAP BEYAZTAŞ UZUNOĞLU
- Sülfanilamid türevleri kullanılarak memeli sütlerinden laktoperoksidaz enziminin saflaştırılması
Purification of the lactoperoxidase enzyme with using sulfanilamide derivatives from mammalian milk
ZEYNEP KÖKSAL
- Benzohidrazid türevleri ile laktoperoksidaz enziminin afinite tekniği kullanılarak memeli sütlerinden saflaştırılması
Purification of lactoperoxidase enzyme from mammals milk benzohydrazi̇de derivatives prepared by using affinity technique
NESLİHAN MACİT