Topoizomeraz I'in saflaştırılması ve bazı özelliklerinin incelenmesi
Purification of topoisomerase I and investigation of some of its properties
- Tez No: 164904
- Danışmanlar: PROF. DR. LEYLA AÇAN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Mycobacterium phlei, topoizomeraz I saflaştırma, özellikler, Mycobacterium phlei, topoisomerase I purification, properties
- Yıl: 2005
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 92
Özet
ÖZET Pınar, A. Topoizomeraz I'in saflaştırılması ve bazı özelliklerinin incelenmesi. Hacettepe Üniversitesi Biyokimya Programı Doktora Tezi, Ankara, 2005. DNA topoizomerazlar DNA'nın replikasyonu sırasında ortaya çıkan süpersarmalın açılmasına aracı olarak birçok hücresel aktiviteyi kontrol ederler. Tüm hücre tiplerinde bulunan bu enzimler başlıca tip I ve tip II olmak üzere iki sınıfa ayrılırlar. Son yıllarda topoizomerazlar antibakteriyel ve antikanser etkiye sahip çeşitli ilaçların hedefi olarak önem kazanmışlardır. Topoizomeraz inhibitor etkisinin araştırılması, yeni ilaç geliştirilmesinde yaygın olarak kullanılan bir yöntem haline gelmiştir. Bu çalışmanın amacı Mycobacterium tuberculosis ile yakın benzerliği olan fakat insan için patojen olmayan Mycobacterium phlei topoizomeraz I'inin saflaştırılarak bazı moleküler ve kinetik özelliklerinin incelenmesidir. Topoizomeraz I enzimi Mycobacterium phlei'den, sonikasyonu takiben DNaz muamelesi, Sephadex G50 kromatografisi ve Heparin Sepharose kromatografisi yöntemleriyle % 1.7 verimle, 5.05 kez saflaştırılmıştır. Kısmen saflaştırılan enzimin SDS poliakrilamid jel elektroforezinde molekül ağırlığı 125 kD olarak tesbit edilmiştir. Enzim aktivitesinin pH 6.0 - 8.5 arasında oldukça stabil olduğu, aktivite için Mg2+, ATP ve spermidine gerek duymadığı, ökaryotik topoizomeraz Fin inhibitörü olan kamptotesin tarafından, çalışılan konsantrasyonlarda inhibe edilmediği gözlenmiştir. İlaç etkisi araştırmalarında çözücü olarak kullanılan dimetil sülfoksit, ökaryotik topoizomeraz I üzerinde kuvvetli bir inhibitor etki göstermesine rağmen, mikobakteriden saflaştırılan enzimin bu çözücü tarafından inhibisyonunun çok daha düşük düzeyde olduğu gözlenmiştir. Mikobakteri topoizomerazının tanımlanmasının, tüberkülozlu hastaların tedavisinde yeni seçenekler yaratacak mikobakterileri seçici olarak etkileyen ilaçların geliştirilmesine imkan vereceği ve bu önemli sağlık probleminin çözümüne katkıda bulunulacağı düşünülmektedir.
Özet (Çeviri)
VI ABSTRACT Pinar, A. Purification of topoisomerase I and investigation of some of its properties. Hacettepe University Health Sciences Institute Ph. D. Thesis in Biochemistry, Ankara, 2005. DNA topoisomerases control several cellular activities by catalysing the relaxation of superhelices which are produced during the replication of DNA. They are found in all cell types and exist mainly in two forms as type I and type II. In recent years, topoisomerases gained importance as the target of several antibacterial and anticancer drugs. Investigation of the inhibitory action of the candidate substances on topoisomerase activity is widely used in drug development. The purpose of this study is to purify topoisomerase I from Mycobacterium phlei, which is closely related to Mycobacterium tuberculosis, but nonpathogenic for humans and investigate some of its molecular and kinetic properties. Topoisomerase I is purified 5.05 fold with a yield of 1.7 % from M. phlei, with a method including homogenization followed by DNase treatment, Sephadex G50 and Heparine Sepharose column chromatography steps. Molecular weight of the partially purified enzyme was estimated to be 125 kDa at SDS polyacrylamide gel electrophoresis. Enzyme activity was found to be stable in the pH range of 6.0 - 8.5. Mg2+, ATP and spermidine were not required for the activity. Camptotecin, which is an inhibitor of eukaryotic topoisomerase I was not inhibit the enzyme at the concentrations studied. Dimethyl sulphoxide, which is a preferred solvent for drug activity studies, and having a strong inhibitory effect on eukaryotic topoisomerase, showed much lower inhibition on mycobacterial enzyme. It is suggested that characterization of topoisomerase from mycobacteria will hopefully lead to develop selective drugs against mycobacteria, which would contribute to the treatment of tuberculosis and solution to this important health problem.
Benzer Tezler
- Human DNA topoisomerase I in complex with the poison topotecan and covalently bonded with a DNA duplex
DNA-human topo I kompleksinin kanser ilaç molekülü TPT ile mekanizmasının teorik incelemesi
NESLİHAN ÜÇÜNCÜOĞLU
- Structural and energetic investigation of effects of anti-cancer molecule topotecan on the mechanism of human topoisomerase I by means of molecular dynamics simulations
Anti-kanser molekül topotekanın human topoizomeraz I in mekanizmasına olan etkisinin yapısal ve enerjetık yönden moleküler dinamik simülasyonları ile incelenmesi
FİLİZ CAMCI
Yüksek Lisans
İngilizce
2010
Fizik ve Fizik MühendisliğiFatih ÜniversitesiFizik Bölümü
YRD. DOÇ. DR. LEVENT SARI
- Hidrazon Schiff bazı ligandlarının Cu(II) kompleksleri, sentezi, karakterizasyonu, DNA ve topoizomeraz I enzim etkileşimleri
Cu(II) complexes of hydrazone Schiff base ligands: Synthesis, characterization, DNA and topoisomerase I enzyme interactions
ELİF EDA ŞENGÜL
Yüksek Lisans
Türkçe
2017
KimyaMuğla Sıtkı Koçman ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. RAMAZAN GÜP
- Achıevıng synergısm ın combınatıon chemotherapy for gastrıc cancer treatment
Mide kanseri tedavisi için kombinasyon kemoterapisinde sinerjizmi başarma
ÖZEN LEYLEK
Doktora
İngilizce
2023
Moleküler TıpKoç ÜniversitesiHücresel ve Moleküler Tıp Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ GÜLNİHAL ÖZCAN
PROF. DR. SEDAT HAKAN ORER
- Evaluation of YB-1 transcriptional factor, DNA glycosylase hNTH1 and human topoisomerase I functions in relation to drug resistance and DNA repair mechanisms
YB-1 transkripsiyon faktörü, DNA glikozilaz hNTH1 ve insan topoizomeraz I enzimi işlevlerinin ilaç direnci ve DNA tamir mekanizması kapsamında değerlendirilmesi
MÜGE ŞENARISOY
Doktora
İngilizce
2018
BiyokimyaEge ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ZEKİ TOPÇU
DR. JOANNA TIMMINS