Geri Dön

Purification of glutathione S-transferases and genetic characterization of zeta isozyme from Pinus brutia, Ten

Pinus brutia, Ten.'den glutatyon S-transferazların saflaştırılması ve zeta izoziminin genetik karakterizasyonu

  1. Tez No: 167424
  2. Yazar: ELİF ÖZTETİK
  3. Danışmanlar: PROF.DR. MESUDE İŞCAN
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Glutatyon S-transferazler, Zeta sınıfı GST'lerin gen sekansı, Saflaştırma, SDS-PAGE Elektoforez, Karakterizasyon vıı, Glutathione 5-transferases, Zeta class GSTs gene sequence, Purification, SDS-PAGE Electophoresis, Characterization. v
  7. Yıl: 2005
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 146

Özet

oz Pinus brutia, Ten.'den GLUTATYON S-TRANSFERAZLARIN SAFLAŞTIRILMASI VE ZETA İZOZİMİNİN GENETİK KARAKTERİZASYONU Öztetik, Elif Doktora, Biyokimya Bölümü Danışman: Prof. Dr. Mesude İşcan Ocak 2005, 146 Sayfa Glutatyon S-transferazlar (GST) dimerik konformasyona sahip, bir tripeptid olan glutatyonun iipofilik yapılardaki elektrofilik merkezlere nükleofilik olarak konjugasyonunu katalizleyen çok fonksiyonlu enzim grubudur. Birincil fonksiyonları ksenobiotiklerin ve endojenlerin detoksifikasyonlannda rol almalarıdır. Sitozolik GST 1er onbir sınıf altında toplanırlar; (A); Alfa, (M); Mu, (P); Pi, (S); Sigma, (T); Teta, (Z); Zeta, (F); Fay, (U); Tau, (B); Beta, (O); Omega and (L); Lambda. vıBu çalışmada, total RNA'lar Pinus brutia iğne yapraklarından izole edilerek, GST Zeta cDNA'sı RT-PCR metoduyla hazırlanmış, elde edilen gen 5' RACE (cDNA uçlarının hızlı çoğaltılması) metodu ile uzatılmış ve gen dizisi tayin edilmiştir. Bu sekanstan yola çıkılarak GST-Zeta'mn amino asit dizisi ve 226 amino asitten oluştuğu belirlenmiştir. Ayrıca Pinus brutia yapraklarından genomik DNA izole edilerek, PCR metodu ile çoğaltılmış, sekans tayini ve cDNA sekansı ile karşılaştırması yapılmıştır. Farklı ağaçlardaki GST-Zeta gen ekspresyonlan Northern blot metodu ile analiz edilmiş, içerdikleri tiol miktarları tayin edilmiş ve karşılaştırılmaları yapılmıştır. Buna göre, mRNA ekspresyonlan üç kat farklılık gösterirken, GSH miktarlarının yaklaşık 1.8 kat farklılık gösterdiği ve GST-Zeta ekspresyonlan ile GSH konsantrasyonlannın birbiriyle ilişkili olmadığı bulunmuştur. CDNB'e karşı aktivite gösteren GST'nin Pinus brutia iğne yapraklarından %1.95'lik ürün ve 15.45 kat saf olarak izolasyonu ve saflaştmlması gerçekleştirilmiştir. Saflaştırma protokolü sırasıyla Sephadex G-25, DEAE anyon değişim, S-hexylglutatyon afinite kolon kromatografisinden oluşmaktadır. Saflaştınlan numune CDNB'e karşı 2022 nmole/min/mg değerinde aktivite göstermiştir. Saflaştınlan iğne yaprak GST enziminin SDS-PAGE ile moleküler ağırlığı (Mr) 24.000 Da olarak bulunmuştur.

Özet (Çeviri)

ABSTRACT PURIFICATION OF GLUTATHIONE S-TRANSFERASES AND GENETIC CHARACTERIZATION OF ZETA ISOZYME FROM Pinus brutia, Ten. Öztetik, Elif Ph.D., Department of Biochemistry Supervisor: Prof. Dr. Mesude İşcan January 2005, 146 pages Glutathione S-transferases (GST, EC2.5.1.18) are a family of multifunctional, dimeric enzymes that catalyse the nucleophilic attack of the tripeptide glutathione (y- L-glutamyl-L-cysteinyl-L-glycine) on lipophilic ' compounds with electrophilic centres. The primary function of GSTs is generally considered to be the detoxification of both endogenous and xenobiotic compounds. Cytosolic GSTs have been grouped into eleven distinct classes as: (A); Alpha, (M); Mu, (P); Pi, (S); Sigma, (T); Theta, (Z); Zeta, (F); Phi, (U); Tau, (B); Beta, (O); Omega and (L); Lambda. IVin this study, the total RNAs from Pinus brutia needles were isolated, GST Zeta cDNA was prepared by RT-PCR, the length of the insert was elongated by applying 5' RACE (Rapid Amplification for cDNA ends) method and the identity of the insert was checked by sequencing. The amino acid sequence of GST-Zeta was deduced as composed of 226 amino acids. The genomic DNA was also isolated from Pinus brutia needles, amplified by PCR and sequenced, and compared to the sequence of cDNA. The expression level of GST-Zeta in individual trees of Pinus brutia were examined by Northern blot analysis, and compared to their thiol contents. The mRNA levels varied up to three-fold, whereas GSH amounts varied approximately 1.8 fold, and there were no correlation between the GST-Zeta expression and GSH concentration. GST enzyme with activity towards CDNB was isolated and purified from Pinus brutia. needles in 1.95 % yield with a purification factor of 15.45-fold. The purifîcation protocol included a sequential chromatography on Sephadex G-25 column, DEAE cellulose anion exchanger liquid chromatography column, and S- hexylglutathione agarose affinity columns. The purified GST showed specific activity tovvards CDNB as 2022 nmole/min/mg. The GST purified from needles had a molecular weight (Mr) value of about 24.000 which was confirmed by SDS-PAGE.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    35618

    Characterization and portial purificationof sheep lung cytosolic glutathione-S-transferases

    Koyun akciğer glutatyon S-transferazlarının karakterize edilmesi ve kısmen saflaştırılması

    REZA FARZAD

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1994

    BiyokimyaOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MESUDE İŞCAN

  2. Tez No

    153354

    Isolation and immunologic characterization of theta class glutathione S-transferase GSTT2-2 from bovine liver

    Sığır karaciğerindeki teta-sınıfı glutatyon S-transferaz: GSTT2-2'in izolasyonu ve immünolojik karakterizasyonu

    SULTAN BELGİN İŞGÖR

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2004

    BiyokimyaOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. NURSEN ÇORUH

    PROF. DR. MESUDE İŞCAN

  3. Tez No

    29576

    Characterization and partial purification of sheep kidney and liver cytosolic glutathione-s-transferases: A comparative study

    Koyun böbrek ve karaciğer glutatyon s-transferazlarının karşılaştırmalı olarak karakterize edilmesi ve kısmen saflaştırılması

    AWNİ ALİ ABU-HİJLEN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1993

    BiyokimyaOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MESUDE İŞCAN

  4. Tez No

    153291

    Characterisation of glutathione S-Transferase activity in Turkhish red pine (Pinus brutia ten): Variation in environmentally cold stressed seedlings

    Kızılçam bitkisinde glutatyon S-Transferaz enziminin karakterizasyonu: Soğuk stresi altındaki Kızılçam fidanlarında glutatyon S-Transferaz enzim aktivitesindeki varyasyonlar

    SEYHAN BOYOĞLU

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2004

    BiyokimyaOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MESUDE İŞCAN

    UZMAN ZEKİ KAYA

  5. Tez No

    114283

    Glutatyon-s-transferaz enziminin tavuk eritrositlerinden saflaştrılması ve karakterizasyonu

    Purification and characterization of GST from chicken erythrocyte

    DEMET KAVRAYAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2001

    KimyaCelal Bayar Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ.DR. TÜLİN AYDEMİR

Geri Dön